刘欣
- 作品数：6 被引量：1H指数：1
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- 活细胞内人IGFBP2-3’UTR基因的GFP—MS2荧光系统标记
- 2014年
- 目的利用GFP—MS2系统在活细胞内对胰岛素样生长因子结合蛋白2（insulin-hke growth factor，bindin gprotein2，IGFBP2）mRNA3’非翻译区（3’untranslated region，3’UTR）进行绿色荧光标记，构建pT-／-IGFBP2-3’UTR-24×MS2重组质粒。方法提取HeLa细胞总RNA，以针对IGFBP2-3’非翻译区的特异性片段为反转录引物，反转录出cDNA，并以其为模板，降落PCR法扩增出带有EcoRI和BamHI双酶切位点的1GFBP2—3’UTR目的基因，再利用双酶切法将目的片段连接到psG5载体（启动子为T7）上，构建重组质粒pT-／．IGFBP2-3’UTR；同时。以BglII和BamHI双酶切法从pCR4-24xMS2SL．stable质粒上切下24×MS2结合位点片段并将其插入pT7-IGFBP2-3’UTR，构建重组质粒pT7-IGFBP2-3’UTR-24×MS2；然后将构建的重组质粒pT7-IGFBP2-3’UTR-24×MS2、pMS2．GFP质粒与pERFP-Tudor-SN质粒共同转染人HeLa细胞内，以激光共聚焦荧光显微镜检测IGFBP2—3’UTR的荧光标记情况及应激共定位。结果以酶切质粒法及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误．激光共聚焦结果显示在胞浆中检测到IGFBP2．3’UTR的绿色荧光信号，在细胞受到氧化应激时IGFBP2—3’UTR信号呈颗粒状聚集，且与应激颗粒（stressgranules，SGs）的标志蛋白Tudor-SN呈共定位关系。结论针对IGFBP2—3’UTR的GFP-MS2荧光标记系统质粒构建成功；细胞应激时，ICFBP2-3’UTR被招募至sGs结构中。
- 付雪高星杰张毅史雪彬辛灵彪刘欣于林杨洁何津岩
- 关键词：重组质粒
- Tudor-SN蛋白与乳腺癌细胞生物学行为的关系研究
- 目的 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其复发和转移严重威胁患者的生命.在恶性肿瘤发生转移的过程中,肿瘤的高侵袭性和迁移能力的提高是重要的前提条件.Tudor-SN蛋白(又称p100,SND1蛋白)是一种高度同源性的,且...
- 刘欣王保亚苏超高星杰朱梦瑜段中潮钱宝鑫付晓杨洁
- 关键词：TGF-Β信号通路SMAD蛋白乳腺癌
- 蛋白表达抑制稳定株MDA—MB-231-Tudor—SNI的筛选和鉴定
- 2010年
- 目的采用针对人类Tudor—SN基因的RNA干扰（RNAi）技术建立Tudor—SN表达抑制的乳腺癌MDA—MB-231稳定细胞株。方法利用脂质体转染方法将pGenesil—shRNA—hTudor—SNI质粒转染进入MDA—MB-231细胞，经G418筛选出稳定株，通过RT—PCR检测Tudor—SN的mRNA水平，再以Western印迹技术鉴定Tudor—SN蛋白表达情况并计算蛋白表达抑制率。结果与对照组相比，以G418筛选的MDA—MB-231-Tudor—SNI稳定株Tudor—SN的mRNA水平降低（P〈0．01，n=3），蛋白表达水平明显下调（P〈0．01，n=3），蛋白表达抑制率达78．12％。结论成功筛选并鉴定人类Tudor—SN蛋白表达抑制MDA—MB-231稳定株，有助于深入研究Tudor—SN蛋白在乳腺癌中的作用。
- 王保亚刘欣高星杰朱梦瑜杨振霞赵秀娟杨洁
- 关键词：RNA干扰细胞筛选
- Tudor-SN蛋白,一种新的参与细胞周期调控的功能蛋白
- 细胞周期是细胞生命活动的基本特征,细胞通过周期时相的变迁完成个体的发育和自我的更新。细胞周期的调控是决定各类细胞命运的关键,涉及Cyclin、CDK、CKI等多种调控因子的参与,它们相互协同作用组成一个庞大而复杂的调控网...
- 苏超宋娟Adiam Teche刘欣高星杰王鑫廷张桂敏赵虹杨洁
- 关键词：细胞周期
- 浅议医学期刊编辑的稿件退修工作被引量：1
- 2009年
- 提出医学期刊编辑要做好稿件退修工作,应重视与作者的沟通,增强服务意识,还要发挥专业优势,发掘文章的新意与深意,为作者提出精辟、准确、可行性强的修改意见,最终提高稿件甚至期刊的质量。
- 刘欣
- 关键词：稿件退修
- Tudor-SN蛋白一级结构间断的SN5结构域质粒的拼接构建
- 2011年
- 目的 实现Tudor-SN蛋白TSN结构域内间断的SN5基因片段（SN5α、SN5β）的拼接以及与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中的融合表达.方法 利用Geno 3D对拼接的SN5进行结构预测.以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR分别扩增出SN5α和SN5β的基因,双酶切并纯化后,先将SN5β引入pEGFP-C2,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5β,再将SN5α引入pEGFP-C2-SN5β,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5.将pEGFP-C2-SN5β/ SN5脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达.结果 ① 拼接的SN5结构预测显示与TSN完整结构中的SN5高度重合;②对重组质粒进行双酶切鉴定可见SN5α、SN5β、SN5的cDNA片段;③ 转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达;④ Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白.结论 pEGFP-C2-SN5/SN5β重组质粒构建成功,SN5α和SN5β在pEGFP-C2中实现了顺序拼接;目的片段可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达,融合蛋白可与抗GFP抗体结合用于蛋白检测.
- 钱宝鑫朱梦瑜高星杰刘欣苏超付晓王保亚王鑫廷杨洁
- 关键词：PEGFP-C2重组质粒
