刘泽隆
- 作品数：62 被引量：212H指数：7
- 供职机构：鲁东大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金烟台市科学技术发展计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学经济管理更多>>
- 液体发酵平菇菌株的诱变选育被引量：1
- 2006年
- 以平菇PL-39为出发菌株,采用紫外线连续诱变、分离提纯、驯化等方法,以斜面菌丝生长速度和液体摇瓶菌丝生物量及发酵多糖总量为测定目标,筛选出了一株遗传上相对稳定的适应液体培养的平菇菌株———PL-3903。该菌株在综合PDA培养基上生长快,长势旺,菌丝体浓密纯白,经驯化后在液体培养基中发酵生活力强,生物量达2.49 g/100 ml,发酵多糖总量达3.38 g/100 ml。
- 王淑芳卜庆梅刘泽隆杨立红
- 关键词：液体发酵平菇诱变选育生物量
- 基于蛋白质反式剪接的双载体凝血Ⅷ因子基因转移被引量：5
- 2009年
- 以intein的蛋白反式剪接为工具,研究了运用双载体的真核细胞凝血Ⅷ因子（FⅧ）基因转移,通过翻译后剪接得到完整的功能性FⅧ蛋白.将B结构域大部分缺失（Δ761~1639）的人功能性FⅧ（BDD-FⅧ）cDNA于剪接所需保守残基Ser1657前断裂为重链和轻链,分别与106和48个氨基酸的mini Ssp DnaB intein的N端（IntN）和C端（IntC）编码序列融合,构建一对在质粒pcDNA3.1的强启动子CMV驱动下的真核表达载体.用脂质体共转染至293细胞和COS-7细胞,培养48h后,收集细胞上清,用ELISA检测培养上清中剪接形成的BDD-FⅧ蛋白水平,用Coatest法检测上清的功能性FⅧ生物活性,并用Western blot观察细胞内的BDD-FⅧ蛋白质剪接.结果显示,两种细胞培养上清中有较高水平的剪接BDD-FⅧ蛋白形成,分别达到（137±23）和（109±22）ng/mL,由细胞内和细胞外（培养上清）的剪接共同组成 并检测到培养上清中较高水平的FⅧ生物活性,分别为（1.05±0.16）和（0.79±0.23）IU/mL,包括细胞内、外剪接产物BDD-FⅧ共同形成 细胞总蛋白的Western blot进一步显示共转染后细胞内高效剪接形成的BDD-FⅧ蛋白.表明intein可用于双载体系统真核细胞FⅧ基因转移,并不完全依赖细胞内的剪接产生具有高FⅧ生物活性的BDD-FⅧ蛋白,为进一步在甲型血友病基因治疗研究中应用双腺相关病毒载体（AAV）转运FⅧ基因,克服AAV载体的容量限制提供了依据.
- 朱甫祥刘泽隆迟晓艳屈慧鸽刘相钦
- 关键词：INTEIN蛋白质反式剪接
- 海南甘蔗生产技术效率分析被引量：7
- 2005年
- 以技术效率分析原理为基础,构造柯布-道格拉斯型随机前沿生产函数模型,并应用修正最小二乘法估计模型参数.通过该模型分析海南甘蔗生产的技术效率现状,得出海南全省和5个甘蔗主产市县在1996—2002年中每年的甘蔗生产技术效率及平均技术效率,并推断海南甘蔗生产整体水平不高且存在着不稳定性和没有区域优势的现象.
- 范红霞刘泽隆过建春
- 关键词：技术效率甘蔗生产生产函数模型道格拉斯模型分析
- 内含肽介导的氯离子通道蛋白CFTR的反式剪接被引量：7
- 2009年
- 研究利用内含肽(intein)的蛋白质反式剪接功能在大肠杆菌中对囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane regulator,CFTR)的反式剪接作用.CFTR基因突变导致一种常染色体隐性遗传疾病囊性纤维化(cystic fibrosis,CF).将CFTR的cDNA于剪接反应所需的保守性氨基酸残基Ser660前断裂为N端和C端,分别与split mini Ssp DnaB内含肽的106个氨基酸残基的N端和48个氨基酸残基的C端编码序列融合,构建到原核表达载体pBV220.诱导表达后SDS-PAGE可见预期大小剪接形成的CFTR蛋白条带,Western印迹用CFTR特异性抗体进一步证明为剪接所产生的CFTR蛋白,表明内含肽可有效催化CFTR的反式剪接.
- 朱甫祥刘泽隆屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：内含肽蛋白质反式剪接
- 禽流感及其对经济的影响被引量：4
- 2007年
- 人们对禽流感的研究已有多年的历史,全世界已经历了12次大流行,波及许多国家和地区。禽流感病毒有多种亚型,迄今已初步测得H5N1、H7N1、H7N7等高致性禽流感毒株的基因序列。全球已报道至少192起高致病性禽流感,其中H5N1亚型引起的禽流感发病率和死亡率都较高,危害巨大。禽流感病毒的肆虐给全球经济造成了至少150亿美元的损失,也不可避免地给我国经济造成了至少600亿人民币的损失,禽流感疫情的继续和蔓延,使得世界经济前景不容乐观。文章通过对历史上发生的禽流感、病原体亚型及造成的经济损失等进行回顾和统计分析,初步探讨了其对我国经济的影响。
- 沙爱龙刘泽隆
- 关键词：禽流感
- 亮氨酸拉链促进蛋白质剪接介导的双载体转凝血Ⅷ因子基因被引量：2
- 2012年
- 作者最近基于蛋白内含子(intein)的双载体转B区缺失型凝血Ⅷ因子(BDD-FⅧ)基因研究证明,表达后的重、轻链可通过蛋白质反式剪接成为共价连接的完整BDD-FⅧ分子并发挥凝血生物活性,但存在不完全剪接的前体蛋白。本文试图通过将具有特异性强相互作用的亮氨酸拉链引入intein序列,提高反式剪接的效率,用双载体系统向培养的COS-7细胞共转融合intein的重链和轻链基因,通过瞬时表达观察了细胞内BDD-FⅧ的剪接和分泌至培养上清液的剪接BDD-FⅧ量和生物活性。结果显示,Western blotting检测到共转基因细胞内明显增强的BDD-FⅧ剪接,表现为前体蛋白的减少;分别用ELISA和Coatest法分析共转基因细胞培养上清液中分泌的剪接BDD-FⅧ蛋白量和生物活性为(106±12)ng.mL-1和(0.89±0.11)U.mL-1,明显高于无亮氨酸拉链的intein融合重链和轻链基因共转基因细胞[(72±10)ng.mL-1和(0.62±0.07)U.mL-1],而且不依赖细胞机制的蛋白质剪接反应明显增强,表现为混合培养的转重链和轻链基因细胞上清液中增加的剪接BDD-FⅧ蛋白量和生物活性[(36±11)ng.mL-1和(0.28±0.09)U.mL-1]。结果表明,亮氨酸拉链可通过增强融合于重链和轻链的intein间的相互作用提高蛋白质反式剪接的效率,改善基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因的效果,为进一步的动物体内基于蛋白质剪接的双腺相关病毒(AAV)载体转FⅧ基因研究提供了实验依据。
- 朱甫祥杨树德刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：INTEIN蛋白质反式剪接亮氨酸拉链
- Cys突变体凝血Ⅷ因子的蛋白质反式剪接
- 2012年
- 为改善蛋白质反式剪接效率,将B-区缺失型FⅧ(BDD-FⅧ)重链的Tyr664和轻链的Thr1826突变为Cys,双载体共转COS-7细胞,观察了细胞内蛋白质剪接、二硫键形成和细胞培养上清液中分泌的剪接BDD-FVIII量和活性。Western blotting检测结果显示,Cys突变可在细胞内形成链间二硫键,剪接BDD-FVIII蛋白量明显增加;双夹心ELISA检测分泌的剪接BDD-FVIII为(128±24)ng.mL/1,明显高于对照(89±15)ng.mL/1;Coatest法检测结果显示,细胞分泌的凝血活性为(0.94±0.08)u.mL/1,也明显高于对照(0.62±0.15)u.mL/1。结果表明,链间二硫键形成可显著提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-Ⅷ基因作用,为进一步动物体内实验提供了依据。
- 朱甫祥刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：蛋白质反式剪接转基因
- 山羊卵泡卵母细胞体外成熟的研究被引量：43
- 1999年
- 研究了ＦＣＳ，１７β－Ｅ２，ＦＳＨ，ＬＨ对山羊卵泡卵母细胞成熟的作用，及培养时间对卵母细胞核和细胞质成熟的影响。结果表明，添加体积分数为１０％～１５％的ＦＣＳ，１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２，２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ和１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ有利于提高卵母细胞核成熟，并放出第一极体。而成熟培养２０，２４ｈ的卵母细胞成熟率显著高于培养１６ｈ（Ｐ＜０．０５），核成熟后培养３～４ｈ有利于卵母细胞质成熟，对其后的受精、卵裂及胚胎的进一步发育有重大影响。且ＴＣＭ１９９＋质量分数为１０％～１５％的ＦＣＳ＋１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２＋１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ＋２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ是卵母细胞成熟的理想培养系统。
- 张涌刘泽隆李裕强
- 关键词：山羊体外成熟卵母细胞
- TMD2前断裂CFTR翻译后的连接及氯离子通道功能被引量：1
- 2010年
- CFTR基因突变导致一种常染色体隐性遗传疾病——囊性纤维化(CF)。利用split Ssp DnaB intein的蛋白质反式剪接技术的真核细胞双载体转CFTR基因,旨在研究翻译后水平CFTR的连接,以及由其建立的氯离子通道功能。于CFTR膜内第2个跨膜结构域(TMD2)前的Glu838密码子后将其cDNA断裂为N端和C端两部分,与具有蛋白质反式剪接作用的split Ssp DnaB intein编码序列融合,分别插入到载体pEGFP-N1和pEYFP-N1,构建一对真核表达载体pEGFP-NInt和pEYFP-IntC。用脂质体将这对载体共转染至幼年仓鼠肾细胞(BHK),瞬时表达实验用Western blotting观察CFTR蛋白质的连接,并用膜片钳技术记录Cl-通道电流。结果显示,基因共转染细胞呈现完整的CFTR蛋白条带,膜片钳记录到全细胞Cl-电流和单个Cl-通道开放活性。结果表明split Ssp DnaB intein的蛋白质反式剪接技术可用于双载体共转移CFTR基因,为CF基因治疗应用双腺相关病毒载体(AAV)转运CFTR基因,克服AAV的容量限制提供了依据。
- 朱甫祥宫贤弟刘泽隆杨树德屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：CFTRSPLITSSPDNABINTEIN蛋白质反式剪接
- 前肽缺失vWF促进细胞分泌蛋白质剪接的L303E/F309S突变体凝血第八因子
- 2012年
- 该文旨在探索前肽缺失的von Willebrand因子(vWF-ΔPro)对蛋白质剪接的L303E/F309S突变体凝血第八因子(FVIII)分泌的影响。将vWF-ΔPro基因与蛋白内含子融合的FVIII重链和轻链基因共转HEK293细胞。结果显示,转vWF-ΔPro细胞的剪接蛋白FVIII分泌量和活性分别为(196±27)ng/mL和(1.39±0.31)IU/mL,明显高于对照细胞的(116±24)ng/mL和(0.91±0.18)IU/mL。表明vWF-ΔPro可提高剪接的L303E/F309S突变体FVIII蛋白分泌量和活性。
- 朱甫祥刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：VWF蛋白质剪接分泌
