刘立宾
- 作品数：6 被引量：41H指数：4
- 供职机构：浙江省中西医结合医院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金浙江省中医药重点研究计划上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF检测非呼吸道标本在结核病诊断中的应用价值被引量：14
- 2019年
- 目的比较PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF在组织、脓液等非呼吸道标本中对结核病的诊断价值。方法收集2017年10月至2018年8月在浙江省中西医结合医院疑似结核病患者225例的非呼吸道标本,后经临床确诊结核病177例,非结核病48例。所有标本均行PCR-荧光探针、Xpert MTB/RIF、Bactec MGIT960检测。以临床确诊为金标准,比较PCR-荧光探针、Xpert MTB/RIF、Bactec MGIT960检测结核病的诊断效能。绘制受试者工作曲线(ROC)评估三种方法在结核病诊断中的价值。并对PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF的一致性进行分析。结果与临床确诊比较,PCR-荧光探针、Xpert MTB/RIF、Bactec MGIT960检测的敏感度分别为53.67%(95/177)、58.76%(104/177)、31.07%(55/177)。PCR-荧光探针和Xpert MTB/RIF的敏感度均高于Bactec MGIT 960培养(χ^2=17.60和27.41,P值均<0.01)。PCR-荧光探针和Xpert MTB/RIF的敏感度相比,差异无统计学意义(χ^2=0.93,P>0.05)。与临床确诊比较,PCR-荧光探针、Xpert MTB/RIF、Bactec MGIT960培养检测的特异度分别为100.00%(48/48)、100.00%(48/48)、97.92%(47/48),三种检测方法的特异度比较,差异无统计学意义(F=1.83,P>0.05)。ROC曲线分析显示,PCR-荧光探针、Xpert MTB/RIF、Bactec MGIT960的ROC曲线下面积分别为0.768、0.794、0.645。PCR-荧光探针、Xpert MTB/RIF对结核病的诊断价值高于Bactec MGIT960(Z=5.19和6.52,P值均<0.01)。Xpert MTB/RIF优于PCR-荧光探针法(Z=2.80,P<0.05)。在各类型标本中,PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF的结核病检出率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。PCR-荧光探针和Xpert MTB/RIF具有较好的一致性(kappa=0.829)。结论Xpert MTB/RIF在组织、脓液等非呼吸道标本中对结核病的检测效能优于PCR-荧光探针法,但二者具有较好的一致性,PCR-荧光探针法经济实用,易于推广,具有较高的临床应用前景。
- 刘立宾王静李浩岳永宁陈园园鲍志坚朱敏
- 关键词：结核
- 三种分子方法检测结核分枝杆菌利福平耐药性的比较被引量：10
- 2020年
- 目的评估Xpert MTB/RIF、荧光PCR熔解曲线和基因芯片技术用于快速筛查利福平耐药结核病的临床价值。方法收集2016年9月3日至2019年8月11日在浙江省中西医结合医院收治的经Bactec MGIT 960液体培养药敏确诊为结核病,且具有Xpert MTB/RIF和基因芯片技术结果的150例患者临床资料,对所有患者分离培养菌株行荧光PCR熔解曲线检测。以Bactec MGIT 960液体培养药敏结果为金标准,分析Xpert MTB/RIF、荧光PCR熔解曲线和基因芯片技术对利福平耐药结核病的诊断效能。绘制受试者工作曲线(ROC)评估三种方法在利福平耐药结核病诊断中的价值。结果以Bactec MGIT 960药敏结果为金标准,Xpert MTB/RIF、荧光PCR熔解曲线和基因芯片技术检测利福平耐药的敏感度分别为88.89%(16/18)、94.44%(17/18)、88.89%(16/18),特异度分别为96.21%(127/132)、96.21%(127/132)、95.45%(126/132)。三种检测方法的敏感度和特异度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。三种分子方法检测利福平耐药与Bactec MGIT 960药敏结果的一致性Kappa值分别为0.794、0.827、0.770。ROC曲线分析显示,Xpert MTB/RIF、荧光PCR熔解曲线和基因芯片技术的ROC曲线下面积分别为0.926、0.953、0.922。三种检测方法对利福平耐药均具有较好的诊断价值(P<0.01),但三种方法比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。三种方法检测利福平耐药与Bactec MGIT 960药敏不一致结果共8例。结论Xpert MTB/RIF、荧光PCR熔解曲线和基因芯片技术三种分子方法对利福平耐药性检测能力相当,均具有较高的敏感度和特异度,适合快速筛查利福平耐药结核病。
- 刘立宾王静李浩岳永宁陈园园鲍志坚朱敏
- 关键词：利福平耐药ROC曲线
- miR-150调控PDCD4对结核分枝杆菌H37Rv感染THP-1巨噬细胞的影响被引量：4
- 2021年
- 目的:探讨miR-150对结核杆菌H37Rv感染THP-1巨噬细胞炎症、细胞增殖及凋亡的影响。方法:结核杆菌H37Rv感染THP-1巨噬细胞24、36和48 h后,ELISA法检测细胞IFN-γ及炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β)含量。感染H37Rv的THP-1巨噬细胞转染miR-150 mimic, miR-150 inhibitor及相应阴性对照物,CCK-8法检测细胞增殖,qPCR法检测细胞miR-150及程序性细胞死亡蛋白4 (PDCD4)表达水平。荧光素酶报告实验检测miR-150和PDCD4的靶向关系,miR-150 mimic与PDCD4-siRNA共同转染细胞,Western blot法检测THP-1巨噬细胞Bcl-1、Bax和Caspase-3蛋白表达。结果:IFN-γ、IL-6、TNF-α、IL-1β含量随H37Rv感染THP-1巨噬细胞作用时间增加而显著增加。双荧光素酶报告实验显示PDCD4是miR-150的直接靶基因,且在THP-1巨噬细胞中过表达miR-150时,PDCD4 mRNA表达水平显著降低,增强细胞活力;在THP-1巨噬细胞中miR-150表达被抑制时,PDCD4 mRNA表达水平显著升高,炎症因子表达及细胞活力降低。miR-150 inhibitor与PDCD4-siRNA共转染可显著增加炎症因子及Bcl-2蛋白表达水平而降低Bax和Caspase-3蛋白表达水平。结论:miR-150负调控PDCD4是其促进THP-1巨噬细胞的细胞活力且抑制巨噬细胞凋亡的关键分子机制之一。
- 杨盛娅孙亚萍刘立宾盛云峰鲍志坚
- 关键词：PDCD4炎症THP-1巨噬细胞细胞凋亡
- 生物素标记探针-液相杂交-非变性PAGE检测非编码小RNA方法的建立和优化被引量：1
- 2012年
- 目的建立生物素标记探针-液相杂交-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测非编码小RNA(sRNA)的方法。方法将生物素标记的sRNAU6寡核苷酸探针经非变性PAGE电泳后转印至尼龙膜上,然后用辣根过氧化物酶(HRP)耦联链霉亲和素进行检测。从细胞中提取总RNA,用已标记U6探针优化液相杂交退火条件及杂交缓冲液;用建立的方法检测并计算BEAS-2B、A549细胞中sRNAU6与miRNA145的含量。结果将Biotin-11-dUTP成功标记至寡核苷酸上,随着寡核苷酸浓度增加,检测信号强度越强,10μmol/L时达到最强。采用水浴反应条件与采用聚合酶链反应(PCR)仪梯次降温反应条件下得到的杂化链无明显差异;以磷酸盐缓冲液作为杂交缓冲液优于Tris-HCl、DEPC水;BEAS-2B、A549细胞5μgRNA中U6含量接近;BEAS-2B细胞中miRNA145绝对含量高于A549细胞。结论成功建立并优化了sRNA检测新方法 ,为简单、易行、可靠地检测sRNA提供了可能。
- 郭跃辉刘立宾徐芒华郭竹英姜斌李伟高丰厚
- PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF检测非呼吸道标本在结核病诊断中的应用价值
- 目的 比较PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF在组织、脓液等非呼吸道标本中对结核病的诊断价值.方法 收集2017年10月至2018年8月在浙江省中西医结合医院疑似结核病患者225例的非呼吸道标本,后经临床确诊结...
- 刘立宾王静李浩岳永宁陈园园鲍志坚朱敏
- 关键词：结核
- 三七皂苷单体R1抑制低氧高二氧化碳诱导的肺动脉平滑肌细胞p38 MAPK信号通路的活化被引量：12
- 2012年
- 目的:探讨三七皂苷单体R1(R1)减轻低氧高二氧化碳(CO2)性肺动脉收缩的作用及其与p38MAPK信号通路的关系。方法:原代培养雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),取第2至5代对数生长期细胞至低氧高CO2(1%O2,6%CO2)条件下继续培养,并分别用8、40、100 mg/L R1孵育24 h后收集细胞,采用免疫印迹法测定p38 MAPK磷酸化蛋白表达,半定量RT-PCR检测p38 MAPK mRNA的表达。结果:Western blotting和RT-PCR结果显示,低氧高CO2组p-p38 MAPK蛋白和p38 MAPK mRNA表达明显高于对照组(N)组(P<0.01)。与低氧高CO2组相比,R1(8、40、100 mg/L)不同程度抑制了p-p38 MAPK蛋白和p38 MAPK mRNA的表达(P<0.01),并呈剂量依赖关系。结论:低氧高CO2诱导PASMCs p38 MAPK活化,三七皂苷单体R1可能通过抑制p38 MAPK通路减轻低氧高CO2性肺动脉收缩。
- 王淑君刘立宾黎关龙王园园周俊辉赵珊刘亚坤王万铁
- 关键词：低氧高二氧化碳肺动脉高压P38MAPK通路
