刘羽
- 作品数：9 被引量：12H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗VEGF/VEGFR靶向肿瘤血管药物的研究进展被引量：10
- 2014年
- 研究表明,肿瘤的生长转移和新血管的生成有密切关系,其中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其信号途径在肿瘤血管生成中起关键作用。阻断该途径的任何环节均可有效抑制肿瘤血管的生成,进而抑制肿瘤的生长和转移。近年来,已有多种以VEGF/VEGFR为靶点的抗肿瘤血管生成药物投入临床应用,其中bevacizumab为第一个获批上市的抗肿瘤血管生成药物。继bevacizumab后,一种以基因工程手段获得的人Fc融合蛋白Zaltrap也成功在美国上市,这种杂交分子的药代动力学明显优于单克隆抗体,能更好的遏制肿瘤血管的发生并消退已形成的肿瘤血管。在肿瘤的临床治疗中,Zaltrap比bevacizumab显示出更大的优势。此外,VEGFC/D Trap及小分子酪氨酸激酶抑制剂也能有效抑制肿瘤血管的生成。在此对以VEGF/VEGFR为靶点的抗肿瘤血管生成药物进行综述。
- 李伊培郗永义张连成高丽华邵勇刘羽潘芸高招刚胡显文陈惠鹏张嵘
- 关键词：VEGF/VEGFR肿瘤血管生成抗肿瘤药物AFLIBERCEPT
- hTEM8-N-RFP融合蛋白真核表达载体的构建及在HEK293F细胞中表达
- 2013年
- 目的:构建人肿瘤内皮标志物8(hTEM8)胞外区(N端)与红色荧光蛋白(RFP)融合表达载体并在HEK293F细胞中表达,为进一步研究hTEM8的相互作用蛋白及其在肿瘤血管形成过程中的机制奠定实验基础。方法:以质粒pDsRed-Express-C1和重组质粒pcDNA3.1(+)-hTEM8/Fc为模板,PCR扩增RFP和hTEM8-N基因片段,先后插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达载体pcDNA3.1(+)-hTEM8-N-RFP,转染HEK293F细胞,通过荧光显微镜观察融合蛋白在转染细胞中的的表达,并用G418对转染的细胞进行加压筛选,Western blot检测hTEM8-N-RFP融合蛋白在转染细胞中的表达。结果:DNA测序、酶切鉴定的结果显示,表达载体pcDNA3.1(+)-hTEM8-N-RFP构建成功,且序列正确。转染后经荧光显微镜观察到HEK293F细胞中有红色荧光,经加压筛选单克隆后,在荧光显微镜下观察到稳定表达红色荧光的细胞株,Western blot检测到融合蛋白hTEM8-N-RFP在真核细胞HEK293F中获得表达。结论:成功构建了pcDNA3.1(+)-hTEM8-N-RFP真核表达载体,并在HEK293F细胞中表达,为后期研究hTEM8的相互作用蛋白和其生理功能奠定了良好的基础。
- 张连成高丽华刘羽郗永义邵勇贾康杰胡显文陈惠鹏
- 关键词：红色荧光蛋白真核表达融合蛋白
- 重组人VEGF可溶性受体的表达纯化及结合性质初探被引量：2
- 2014年
- 目的:表达优化的血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体1(VEGFR1)胞外区第2个类免疫球蛋白结构域(VEGFR1D2)和VEGF受体2(VEGFR2)胞外区第3个类免疫球蛋白结构域(VEGFR2D3)与人IgG1 Fc片段的融合产物VEGF-Trap2,探讨该产物与人源VEGF165(hVEGF165)之间的亲和力。方法:将优化的目的基因VEGFR1D2/R2D3连接到真核表达载体pIRES2-EGFP-Fc中,转染CHO-K1细胞并筛选高表达目的蛋白VEGF-Trap2的细胞系,亲和纯化VEGF-Trap2蛋白,通过非竞争性ELISA及生物膜干涉技术检测VEGF-Trap2与hVEGF165之间的亲和力。结果:DNA测序表明真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF-Trap2序列正确;获得表达VEGF-Trap2的细胞系;非竞争性ELISA实验中,VEGF-Trap2与hVEGF165功能性亲和常数达到1.86×107L/mol;生物膜干涉实验中,hVEGF165与VEGF-Trap2的平衡解离常数达到3.13×10-9mol/L。结论:构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF-Trap2并在CHO-K1细胞中稳定表达,重组蛋白VEGF-Trap2与hVEGF165有较高的亲和力,提示其可用于阻断VEGF信号传导途径,为该蛋白进一步的体外及体内实验奠定了基础。
- 李伊培高丽华张连成邵勇刘羽潘芸高招刚张嵘胡显文陈惠鹏
- 关键词：血管内皮细胞生长因子受体FC融合蛋白CHO-K1细胞
- 肿瘤内皮标志物8同型物Ⅰ基因真核表达载体的构建及其在HEK293F细胞中的表达
- 2014年
- 目的:构建肿瘤内皮标志物8(TEM8)基因真核表达载体,实现TEM8在HEK293F细胞中的外源表达。方法:用PCR技术扩增TEM8基因,经限制性酶切、连接、转化,插入pcDNA3.1(+)-EGFP真核表达载体,并通过脂质体将TEM8表达质粒转染至HEK293F细胞中,Western印迹检测TEM8的表达。结果:PCR扩增得到TEM8基因,构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-TEM8-EGFP并转染HEK293F细胞,经G418加压筛选及有限稀释法得到生长性状良好、表达效率高的单克隆细胞系TEM8-EGFP/HEK293F;Western印迹证明过表达细胞系TEM8-EGFP/HEK293F显著表达TEM8蛋白。结论:构建了表达TEM8的重组HEK293F工程细胞系TEM8-EGFP/HEK293F,为进一步研究TEM8的生理功能奠定了基础。
- 刘羽高丽华邵勇王友亮胡显文陈惠鹏
- 关键词：真核表达载体
- 一种基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体及应用
- 本发明公开了一种基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体及应用。本发明提供了一种构建表达载体的方法，包括如下步骤：将出发载体pIRSE-EGFP-B的驱动目的基因表达的CMV启动子替换为hCMV启动子，且在所述出发载体pI...
- 邵勇胡显文高招刚高丽华潘芸王友亮刘羽李伊培
- 文献传递
- 融合蛋白VT-GL-B3及其编码基因和应用
- 本发明公开了一种融合蛋白VT-GL-B3及其编码基因和应用。本发明提供的融合蛋白，是如下（a）或（b）或（c）：（a）由序列1自N末端第21-468位氨基酸残基组成的蛋白质；（b）由序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（...
- 高丽华胡显文李伊培陈惠鹏王友亮邵勇高招刚潘芸刘羽
- 文献传递
- 一种基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体及应用
- 本发明公开了一种基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体及应用。本发明提供了一种构建表达载体的方法，包括如下步骤：将出发载体pIRSE‑EGFP‑B的驱动目的基因表达的CMV启动子替换为hCMV启动子，且在所述出发载体pI...
- 邵勇胡显文高招刚高丽华潘芸王友亮刘羽李伊培
- 文献传递
- 基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体的构建及应用
- 2014年
- 目的通过插入GS筛选系统和替换启动子改造载体以获得高效表达细胞系。方法将pIRES2-EGFP多克隆位点上的BamHⅠ位点突变,构建一个新的载体pIRES2-EGFP-B,通过AseⅠ和NheⅠ双酶切其上的巨细胞病毒(CMV)启动子,加入谷氨酰胺合成酶(GS)基因筛选标志,再通过PacⅠ和NheⅠ双酶切,插入人巨细胞病毒(hCMV)启动子,构建载体pHGS1.0。将目的基因分别插入载体pHGS1.0和pIRES2-EGFP中,通过比较重组蛋白TEM8(1-227)-VEGFR1domain2-IgG2(TV-IgG2)表达来分析新构建载体的优越性。结果成功插入GS筛选标志,并加入hCMV启动子,人免疫球蛋白定量试剂盒分析发现,重组蛋白表达量提高了5倍。结论通过GS系统筛选,得到高效表达目的蛋白载体系统,为后续的高效表达细胞系筛选奠定了基础。
- 高招刚邵勇高丽华潘芸刘羽李伊培胡显文陈惠鹏
- 关键词：谷氨酰胺合成酶甲氨喋呤重组蛋白质类
- 融合蛋白VT-GL-B3及其编码基因和应用
- 本发明公开了一种融合蛋白VT‑GL‑B3及其编码基因和应用。本发明提供的融合蛋白，是如下（a）或（b）或（c）：（a）由序列1自N末端第21‑468位氨基酸残基组成的蛋白质；（b）由序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（...
- 高丽华胡显文李伊培陈惠鹏王友亮邵勇高招刚潘芸刘羽
- 文献传递
