刘肖萍
- 作品数：18 被引量：25H指数：3
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪Fc受体γ亚单位基因克隆与原核表达
- 目的: 克隆猪Fc受体γ亚单位基因，构建原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备多克隆抗体。方法:研究中应用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞总RNA中克隆出猪Fc γ亚单位的cDNA序列，测序结果表明得到了与预期相符的长为29...
- 张志远徐红运刘肖萍卢晓艳段二珍刘玉松夏平安崔保安
- 关键词：基因克隆原核表达多克隆抗体
- 文献传递
- 猪Fc受体γ亚单位基因克隆与原核表达
- 【目的】克隆猪Fc受体γ亚单位基因,构建原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备多克隆抗体。【方法】研究中应用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞总RNA中克隆出猪Fcγ亚单位的cDNA序列,测序结果表明得到了与预期相符的长为29...
- 张志远徐红运刘肖萍卢晓艳段二珍刘玉松夏平安崔保安
- 关键词：克隆原核表达多克隆抗体
- 文献传递
- 猪IgGIIB类Fc受体剪接异构体的分子特征
- 根据GenBank中猪IgGIIB类Fc受体(swFcⅡRIIB)cDNA基因序列(DQ026064)，从猪外周血白细胞cDNA中扩增swFcγRIIB基因剪接异构体(FJ608551)，测定其序列并进~序列分析，将sw...
- 刘玉松夏平安崔保安刘肖萍张志远范旭赵琳张凤华徐红运段二珍卢晓艳
- 关键词：剪接异构体抑制性受体基因克隆
- 文献传递
- 重组猪IgGⅡB类Fc受体蛋白的原核表达和抗体的制备被引量：1
- 2010年
- 根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体剪接异构体cDNA(swFcγRⅡB)基因序列(FJ608551),利用Primer5.0软件设计合成了1对特异性引物,扩增swFcγRⅡB去掉胞内区和跨膜区的基因,PCR产物经KpnⅠ+EcoRⅠ双酶切后,将截短的swFcγRⅡB基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-swFcγRⅡB,在IPTG诱导下成功表达了分子质量约为40ku的融合蛋白swFcγRⅡB-His,该表达蛋白在细胞质中主要以不溶性包涵体的形式存在。原核表达蛋白经纯化免疫小鼠,制备鼠源swFcγRⅡB封闭抗体,ELISA检测抗体效价为1:5120,具有高度特异性。Western-blotting检测表明,制备的多克隆抗体可以与融合蛋白swFcγRⅡB-His特异性结合。
- 刘玉松夏平安赵琳范旭张凤华徐红运刘肖萍张志远崔保安
- 关键词：原核表达抗体制备
- 重组猪IgGIIB类Fc受体剪接异构体胞外区及结构域的原核表达与抗体制备
- 根据GenBank中猪IgGIIB类Fc受体剪切异构体基因序列(FJ608551)，利用Primer 5.0软件设计合成3对特异性引物，从质粒pTG19-T-swFcγRIIb1中用PCR方法扩增编码胞外区、EC1及EC...
- 刘肖萍刘玉松夏平安赵琳范旭徐红运张凤华张志远崔保安
- 关键词：FCΓRIIB原核表达蛋白纯化
- 文献传递
- 猪IgGⅡB类Fc受体剪接异构体胞外区及结构域的原核表达与抗体制备被引量：3
- 2011年
- 根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体剪切异构体基因序列(FJ608551),利用Prim er 5.0软件设计合成3对特异性引物,从质粒pTG19-T-swFcγRIIB1中用PCR方法扩增编码胞外区、EC1及EC2结构域蛋白分子基因片段,PCR产物经KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切后将其插入到原核表达载体pET-32 a中,构建了3种猪FcγRIIB剪接异构体原核表达载体pET-EY,pET-AY,pET-BY,转化大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下成功表达了相对分子质量约为36,29,27 kD融合蛋白表达,纯化后的融合蛋白分别免疫小鼠制备鼠源血清.ELISA结果显示抗体效价为1∶5 120,1∶5 120,1∶10 240.免疫印迹结果显示制备的多克隆抗体可以与融合蛋白特异性结合.
- 刘肖萍张志远刘玉松赵琳范旭徐红运张凤华夏平安崔保安
- 关键词：FCΓRIIB原核表达
- 猪IgGⅡB类Fc受体基因剪接异构体的克隆及序列分析被引量：2
- 2010年
- 根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体(swFcγRⅡB)cDNA基因序列,利用Prim er软件设计合成了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从猪外周血白细胞cDNA中扩增swFcγRⅡB基因,将扩增的基因片段插入pTG19-T载体进行测序,利用DNAStar Protean软件对基因的氨基酸序列潜在抗原表位进行预测.结果表明,克隆的swFcγRⅡB基因序列长度为951 bp,编码316个氨基酸,与已发表序列的核苷酸与氨基酸序列同源性分别为99.3%和98.3%,其胞内区多出19个氨基酸的插入,其氨基酸序列至少存在3个潜在优势抗原表位的区域.swFcγRⅡB基因存在亚类,所克隆基因是swFcγRⅡB基因的1种RNA剪接异构体,预示了swFcγRⅡB基因至少存在2种RNA剪接异构体.
- 刘玉松夏平安刘肖萍张志远刘明莉王中明段二珍卢晓艳崔保安
- 关键词：抑制性受体抗原表位
- 猪IgGIIB类Fc受体剪接异构体的分子特征
- 根据GenBank中猪IgGIIB类Fc受体(swFcγRⅡB)cDNA基因序列(DQ026064),从猪外周血白细胞cDNA中扩增swFcγRⅡB基因剪接异构体(FJ608551),测定其序列并进行序列分析,将swFc...
- 刘玉松刘肖萍张志远范旭赵琳张凤华徐红运段二珍卢晓艳夏平安崔保安
- 关键词：剪接异构体抑制性受体基因克隆
- 文献传递
- 多个猪IgGⅡB类Fc受体剪接异构体的分子生物学特征
- FcγRⅡB是目前发现唯一的抑制型FcγR,在天然免疫和适应性免疫反应的负向调节方面发挥重要作用。本研究克隆并鉴定了多个猪的FcγRⅡB转录体,对进一步深入研究FcγRⅡB的生物学特性及其介导的免疫调节作用机制具有重要意...
- 刘肖萍
- 关键词：剪接异构体真核表达
- 文献传递
- FcγRⅡB介导的PRRSV感染的抗体依赖性增强作用被引量：13
- 2012年
- 将PRRSV Hn-1/06株阳性血清(中和效价为1∶2)做2～8倍倍比稀释后,分别与等体积含100TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备感染性免疫复合物。取纯化的猪IgG和兔抗猪IgG制备非感染性免疫复合物。用鼠抗FcγRⅡB阳性血清封闭猪肺泡巨噬细胞(PAM细胞)表面的FcγRⅡB,然后分别将感染性免疫复合物和非感染性免疫复合物与PRRSV的混合物感染封闭后的PAM细胞,培养48h后收获样品,采用荧光定量RT-PCR检测收获样品中PRRSV的含量。结果表明,选择性封闭PAM细胞的FcγRⅡB能增强PRRSV的抗体依赖性增强作用。
- 段二珍周永辉张宜娜张继希张志远卢晓艳刘肖萍夏平安崔保安
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒FC受体荧光定量RT-PCR
