卢冬
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：大连工业大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省高校创新团队支持计划辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学农业科学更多>>
- 重组海参溶菌酶基因工程菌的构建及原核表达被引量：5
- 2012年
- 根据GenBank中海刺参溶菌酶的cDNA序列(Accession no.EF036468),利用RT-PCR技术扩增出海刺参溶菌酶的基因片段(SL),将其克隆到原核表达载体pET-32a(+),得到重组质粒pET-32a(+)-SL,再转化至E.coil Rosetta(DE3)pLysS。利用IPTG诱导表达,重组蛋白经SDS-PAGE分析,得到一条分子质量约为31ku的特异条带。经过Western blotting分析鉴定,结果显示重组海参溶菌酶成功在大肠杆菌中表达,并且有部分可溶性蛋白,占总菌体蛋白约10%。这些结果为进一步研究海参溶菌酶的作用机理奠定基础。
- 常艺海丛丽娜卢冬
- 关键词：溶菌酶原核表达克隆海参
- 重组海参溶菌酶的表达及性质研究
- 本研究旨在研究重组海参(Stichopus japonicus)溶菌酶(rSjLys)可溶性表达的发酵条件。实验采用多因素正交优选法,以摇瓶培养方式,从培养基组分,发酵条件两个方面对重组海参溶菌酶进行研究。构建了高效分泌...
- 卢冬
- 关键词：可溶性可溶性蛋白分离纯化抑菌活性
- 文献传递
- 中国明对虾溶菌酶点突变基因的原核表达
- 2014年
- 为解决中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)溶菌酶成熟肽(FcLys)可溶性问题,构建了点突变基因的原核表达质粒,并进行重组表达。以已构建的带有FcLys目的基因的重组克隆质粒为模板扩增FcLys点突变(FcLysM)的基因片段,将该对虾溶菌酶成熟肽序列的N端和C端中含有几个疏水性氨基酸经点突变改为亲水性氨基酸,但不改变其活性中心和二硫键的形成。将FcLysM的基因片段与表达载体连接并转化,制得基因工程菌pET-39b(+)-FcLysM/Rosetta(DE3)。通过基因测序方法验证该重组表达质粒读码框的准确性以及FcLysM目的基因序列的正确性。该工程菌表达后在SDS-PAGE结果显示,表达产物为分子质量约为43ku的融合蛋白FcLysM。进一步研究分析证明,该重组点突变蛋白的可溶性表达量高于非突变的对虾溶菌酶表达量。
- 谭广毅丛丽娜姜启晨卢冬
- 关键词：原核表达
- 重组海参溶菌酶的表达及其性质
- 2014年
- 研究了重组海参（Stichopusjaponicus）溶菌酶（SjLys）可溶性表达的发酵条件。采用多因素正交优选法，以摇瓶培养方式从培养基组分、发酵条件两个方面对重组海参溶菌酶进行研究，构建了高效分泌型表达重组海参溶菌酶工程菌。研究结果发现，30℃、140r／min、IPTG浓度0．3mmol／L、诱导后继续培养14h，目的蛋白分泌表达量可达到30-40mg／L，且产物以大量可溶性蛋白存在。
- 卢冬丛丽娜姜启晨谭广毅
- 关键词：可溶性
- 海参溶菌酶C端多肽在毕赤酵母中的重组表达被引量：1
- 2013年
- 为构建并筛选具有抑菌活性的重组海参溶菌酶C端(SjLys-C)多肽的毕赤酵母基因工程菌,根据已构建的pMD18-T-SjLys-C质粒为模板,设计特异性引物,扩增出带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的海参溶菌酶C端多肽基因,将其亚克隆到真核表达载体pPIC9K上,构建重组表达质粒pPIC9K-SjLys-C。该重组质粒经BglⅡ线性化后,采用电转化方式将线性DNA转化至毕赤酵母GS115中,经含不同浓度抗生素G418的YPD培养基筛选鉴定转化子,再经1%甲醇诱导表达,共筛选出4株高拷贝重组海参溶菌C端多肽基因工程菌。结果表明,该酵母基因工程菌经甲醇诱导72h,其目的蛋白表达量最高,并对革兰阳性菌和阴性菌均具有抑菌活性,尤其对通常引起水产动物严重病害的病原菌副溶血弧菌和铜绿假单胞菌具有明显的抗菌效果。
- 姜启晨丛丽娜宋明徽谭广毅卢冬
- 关键词：毕赤酵母
