周梅
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 不同机械牵伸条件对大鼠肌腱干细胞分化的影响被引量：3
- 2017年
- 目的探讨不同机械牵伸条件对肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)分化的影响,寻求TSCs成肌腱分化、成骨分化以及成脂肪分化的最佳单轴循环牵伸载荷。方法取8周龄雄性SD大鼠跟腱,采用酶消化法分离培养TSCs。取第3代TSCs,随机分为不同牵拉条件组(实验组A^D组)及静态培养组(对照组E组),其中A组牵拉强度4%、频率1 Hz,B组牵拉强度4%、频率2 Hz,C组牵拉强度8%、频率1 Hz,D组牵拉强度8%、频率2 Hz。利用课题组自行研发的体外细胞单轴循环牵拉设备,沿培养皿长轴对A^D组细胞进行单轴循环机械牵伸,E组细胞行静态培养。分别处理12、24、48 h后收集各组细胞,采用实时荧光定量PCR检测成腱分化相关基因Scleraxis(SCX)、抗细胞黏合素C(Tenascin C,TNC),成脂肪分化相关基因CCAAT/增强子结合蛋白-α(CCAAT-enhancer-binding protein-α,CEBPα)、脂蛋白脂肪酶(lipoprteinlipase,LPL)及成骨分化相关基因RUNX2、远端缺失基因5(distal-less homeobox 5,DLX5)的表达;Western blot检测TNC、CEBPα及RUNX2蛋白表达。结果实时荧光定量PCR检测示:SCX、TNC m RNA相对表达量在B组牵拉24 h时显著高于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05);CEBPα、LPL m RNA相对表达量在D组牵拉48 h时显著高于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05);RUNX2、DLX5 m RNA相对表达量在C组牵拉24 h时显著高于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测示:B组牵拉各时间点TNC蛋白表达均高于E组(P<0.05),同时牵拉24 h与E组相比CEBPα表达有显著抑制作用(P<0.05);C组牵拉24 h RUNX2蛋白表达显著高于E组(P<0.05),同时牵拉24、48 h TNC蛋白表达显著低于E组(P<0.05);D组牵拉48 h CEBPα蛋白表达显著高于E组(P<0.05),TNC蛋白表达显著低于E组(P<0.05),RUNX2蛋白表达与E组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论机械力学刺激可以促进TSCs发生分化,而且不同条件的牵拉载荷会引起不同方向分化。4%、2 Hz牵拉24 h为�
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- 关键词：机械牵拉分化
- 不同强度跑台训练对大鼠跟腱微损伤修复影响的实验研究被引量：6
- 2017年
- 目的探讨不同强度跑台训练对胶原酶诱导的大鼠跟腱微损伤修复的影响。方法取8周龄雄性SD大鼠72只,体质量200~250 g,经适应性跑台训练1周后,于双侧跟腱各注射30μL浓度为10 mg/mL的Ⅰ型胶原酶溶液,制备胶原酶诱导的跟腱微损伤模型。饲养1周后随机分为对照组(n=24)、低强度组(n=24)、高强度组(n=24);对照组大鼠可自由活动;低、高强度组采用计算机控制动物实验跑台对大鼠进行被动跑台训练,其中低强度组跑台强度为13 m/min、20 min/d,高强度组跑台强度为17 m/min、60 min/d。于训练开始即刻及1、4周,每组各取8只大鼠双侧跟腱,行大体观察、组织学观察并半定量评分以及生物力学测试。结果训练开始即刻,各组跟腱标本大体观察、组织学观察及半定量评分以及生物力学测试比较,差异均无统计学意义(P>0.05),提示各组跟腱微损伤模型损伤程度相似,具有可比性。大体观察示,1周时,各组腱旁结缔组织增生、肌腱组织缺乏光泽;4周时,低强度组腱旁增生组织较对照组明显减少,而高强度组腱旁结缔组织较多,并且有大量新生血管形成。组织学观察示,1周时各组间总分比较差异无统计学意义(P>0.05);低、高强度组仅新生血管量评分与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。4周时,高强度组总分明显高于对照组、低强度组,对照组显著高于低强度组(P<0.05);低强度组纤维排列、细胞形态、细胞异常增多、新生血管量评分与对照组、高强度组比较,高强度组细胞异常增多评分与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。生物力学测试示,1周时各组跟腱横截面积、最终应力、抗拉强度及弹性模量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。4周时,低强度组最终应力及抗拉强度较对照组明显升高(P<0.05),最终应力及弹性模量较高强度组明显升高(P<0.05);其余各指标组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结�
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- 关键词：肌腱病跑台训练跟腱
- 体外细胞单轴循环牵伸载荷模型建立的实验研究被引量：1
- 2014年
- 目的研制一种体外细胞单轴循环牵伸模型。方法用硅树脂材料制备带微沟槽培养皿,运用有限元软件ABAQUS分析培养皿应变分布。将肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)在培养皿中培养,观察TSCs贴壁生长情况。可编程控制器(programmable logic controller,PLC)控制牵伸模型机械运行部分对培养皿周期性牵伸。按不同牵伸频率(0.5、1.0、2.0、3.0 Hz)及应变(4%、8%、16%、20%)分为16组连续牵伸24 h,检测培养皿实际运行次数及位移量变化;倒置显微镜观察TSCs有无脱落及漂浮;在牵伸时间为8、12 h(频率1 Hz、应变8%)时,用激光共聚焦扫描显微镜观察细胞骨架中F-actin形态变化。结果硅树脂培养皿应变分布较均匀,培养皿底膜有效应变范围约占总面积的91%。TSCs在培养皿中培养10 h时,全部贴壁且沿微沟槽方向生长。在不同牵伸条件下牵伸模型运行稳定,硅树脂培养皿实际运行频率、应变位移距离和设定频率及理论应变位移距离比较差异无统计学意义(P>0.05);TSCs无明显脱落及漂浮;牵伸组F-actin束变细,部分发生断裂,红色荧光(F-actin)染色减弱且分布不均匀。结论体外细胞单轴循环牵伸载荷模型建模成功。该模型操作简便、参数设计范围宽,可模拟不同条件进行体外贴壁细胞生物力学载荷实验研究。
- 杨广华唐康来马林周梅陈万穆米多袁成松胡超李赛英
- 关键词：牵伸三维有限元肌腱病
- 人脐带间充质干细胞联合富含血小板血浆促进大鼠跟腱损伤的修复被引量：2
- 2017年
- 目的探讨不同浓度富含血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)在体外对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)增殖、分化的影响,评估h UC-MSCs联合PRP对大鼠跟腱损伤修复的影响。方法 PRP活化后成为PRP-clot releasate(PRCR)。取P3代h UC-MSCs于培养皿中培养24 h后,分别加入含0%(对照组)、10%、20%、40%PRCR的DMEM/F12培养基,于第1、2、3、4天测定h UC-MSCs的增殖速度。P3代h UC-MSCs按相同分组培养,于第1、3、5天收集细胞并提取蛋白。Western blot检测h UC-MSCs中成肌腱分化标志性基因肌腱蛋白C(tenascin c,TNC)、SCX(scleraxis)、Ⅰ型胶原的表达。选取48只8周龄雄性SD大鼠,Ⅰ型胶原酶溶液50μL注射于大鼠右侧跟腱制备跟腱损伤模型,3 d后于损伤部位再次分别注射50μL生理盐水(对照)、h UC-MSCs悬液、PRP或PRP+h UC-MSCs混悬液,术后2、4周安乐死大鼠,Western blot检测跟腱中TNC、SCX及Ⅰ型胶原的表达,跟腱切片HE染色行组织学评估。结果 PRCR在体外对h UC-MSCs增殖均有促进作用,20%PRCR组促增殖作用最显著(P<0.05);20%PRCR组较对照组在体外可以显著地促进h UCMSCs成肌腱分化标志性基因的表达(P<0.05);术后2、4周,PRP+h UC-MSCs组跟腱中成肌腱分化相关基因在蛋白水平表达更高,跟腱切片HE染色显示PRP+h UC-MSCs组纤维排列更规整,炎细胞更少。结论适宜浓度PRP在体外显著促进了h UC-MSCs的增殖、成肌腱分化;PRP联合h UC-MSCs能有效促进大鼠受损跟腱的修复。
- 王位付宇翀周梅唐红张吉强唐康来
- 关键词：人脐带间充质干细胞富含血小板血浆大鼠模型跟腱损伤
- 循环牵拉对大鼠跟腱来源肌腱干细胞c-fos基因表达的影响被引量：1
- 2017年
- 目的探讨机械刺激对大鼠跟腱来源肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)立早基因c-fos表达的影响。方法取8周龄雄性SD大鼠跟腱组织,用酶消化法分离、培养TSCs,取第3代细胞用于实验。利用单拉循环牵伸载荷模型在1 Hz条件下,分别用4%和8%牵拉强度牵拉细胞,并在牵拉0、5、15、30、60、120 min后收集细胞进行实时荧光定量PCR检测,观察c-fos m RNA相对表达量随牵拉时间的变化,并找到表达最高时间点Tmax。然后分别用2%、4%、6%、8%和12%的牵拉强度,在牵拉Tmax时收集细胞,观察c-fos m RNA相对表达量随牵拉强度的变化。接着分别用2%、4%、6%、8%和12%的牵拉强度,对TSCs经0、5、15 min短时间牵拉后静置至Tmax,观察c-fos m RNA相对表达量经短时刺激后的变化情况。最后分别用4%和8%牵拉强度牵拉细胞0、Tmax、120 min,检测成肌腱分化标志基因Ⅰ型胶原、腱调蛋白(tenomodulin,TNMD),成骨分化标志基因Runx2、远端缺失基因5(distal-less homeobox 5,Dlx5),成脂肪分化标志基因脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)的表达情况。结果与0 min相比,在4%和8%牵拉强度下,c-fos m RNA相对表达量在牵拉15 min时显著升高(P<0.05),30 min时出现峰值(P<0.05),至60 min时表达量恢复至起始水平(P>0.05);故Tmax为30 min。牵拉30 min时,2%的牵拉强度即可使c-fos m RNA相对表达量升高,且6%、8%和12%牵拉强度较2%、4%牵拉强度进一步升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。经过5 min的短时间牵拉,并静置至30 min时即可使c-fos m RNA相对表达量升高(P<0.05)。4%牵拉强度下,在牵拉30 min和120 min时,各分化标志基因相对表达量与0 min比较差异均无统计学意义(P>0.05);而8%牵拉强度下,在牵拉30 min时,Runx2基因相对表达量显著升高,在牵拉120 min时,Ⅰ型胶原、TNMD、Dlx5、Runx2等基因相对表达量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论循环牵拉能够影响大鼠跟腱来源TSCs立早基
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