姜彬
- 作品数：6 被引量：21H指数：2
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- 相关领域：生物学更多>>
- microRNA过表达载体构建技术的实验研究
- 2014年
- 目的:构建microRNA的表达载体,再转染生物体细胞观察该microRNA的转录或表达情况,以获知它的作用机理及对生物体的影响。方法:以microRNA-21(简化为miR-21)为例说明构建表达载体的方法。根据microRNA的成熟序列以及附近约200多碱基共约470个碱基序列,设计PCR引物,PCR扩增,PCR产物和pcDNA3.1(+)质粒双酶切后,用T4连接酶进行连接反应,并转化入感受态细胞,筛选后对重组质粒进行双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定及测序分析,并将其转染Hela细胞,经RT-PCR实验检测其表达情况。结果:pcDNA3.1(+)/miR-21过表达载体转染细胞后使得miR-21在细胞中过表达。结论:成功构建了miR-21的真核表达载体,为进一步研究miR-21功能及作用机制奠定实验基础。
- 姜彬
- 关键词：微小RNAMIR-21PCDNA3
- 细胞培养技术简介及避免污染的策略被引量：11
- 2008年
- 细胞试验是分子生物学科学研究的重要手段之一,而细胞培养技术又是细胞试验中不可或缺的关键性技术方法。简要地介绍细胞培养的过程,试剂和方法,并着重论述细胞培养中经常出现的污染问题,造成污染的原因,分辨污染的方法。通过从实际工作中总结出来的经验,从环境、试剂和操作诸方面对避免污染的方法进行了讨论。
- 姜彬
- 关键词：细胞培养技术污染
- MicroRNA-21对p53基因的转录后调控作用被引量：1
- 2013年
- 目的研究microRNA-21与p53的关系,验证microRNA-21对p53是否具有转录后调节作用。方法成功构建MicroRNA-21过表达载体,转染肿瘤细胞使其在细胞中表达,用RT-PCR和Western印迹检测Micro-RNA21过表达与Micro-21knockdown在转录水平上表达量的差异及p53基因在Micro-RNA21过表达的细胞中的表达情况。结果实验结果显示,过表达Micro-RNA21的细胞与转染空载体的细胞相比,其MicroRNA21的表达量显著提高;Micro-RNA21过表达之后,其P53的表达量显著减少。而microRNA-21knockdown之后,可见P53的蛋白水平明显升高。结论 microRNA-21与p53有着密切的联系,microRNA-21对p53具有一定的转录后抑制作用。
- 姜彬唐颢
- 关键词：细胞衰老P53基因
- microRNA及其与衰老进程的关系
- 2012年
- 论述了衰老相关基因及衰老相关的microRNA在人体衰老进程中的重要作用,侧重介绍了microRNA通过调控关键的衰老相关因子导致细胞衰老或凋亡的研究进展。
- 姜彬
- 关键词：MICRORNA衰老
- 蛋白质免疫印记分析法实验条件的研究被引量：7
- 2008年
- 蛋白质免疫印记分析（western blotting）是研究和分析蛋白质的重要手段。该文简述了western blot-ting的方法及实验过程,从实际操作的角度,着重探讨了实验条件的控制、影响因素和优化实验结果的方法。这些从实际工作和预实验中总结出来的优化方法,可以使实验结果更加明晰和易于进一步的分析研究。
- 姜彬
- 关键词：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳丙烯酰胺亚甲基双丙烯酰胺
- HMG盒转录因子1(HBP1)参与H_2O_2诱导的细胞衰老过程被引量：2
- 2012年
- 为探讨HMG盒转录因子1(HBP1)在过氧化氢(H2O2)诱导的细胞衰老中所起的作用,通过慢病毒感染得到稳定表达HBP1的MDA-MB-231细胞,以H2O2处理细胞.采用Western免疫印迹杂交试验和实时PCR检测HBP1、p16和细胞周期蛋白D1(cyclinD1)表达水平的变化.用荧光免疫试验检测H2O2对HBP1表达的影响,以及HBP1在H2O2的诱导下对于p16和细胞周期蛋白D1启动子的影响.用细胞增殖试验检测H2O2对于细胞增殖的影响.用基因敲减实验和衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测在H2O2诱导的细胞衰老中HBP1所起的作用.Western和免疫荧光实验结果显示,细胞经H2O2处理后,HBP1表达增高的同时促进了p16的表达,降低了细胞周期蛋白D1的表达.细胞增殖实验结果显示,H2O2显著抑制了细胞的增殖.基因敲减实验和SA-β-Gal染色实验说明,H2O2可诱导HBP1表达正常的MDA-MB-231细胞衰老,而HBP1的敲减则抑制了H2O2诱导的细胞衰老过程.本研究结果提示,在H2O2诱导的衰老中,HBP1的表达显著增加,并通过促进衰老相关基因p16的表达和抑制生长因子cyclinD1的表达来阻碍细胞增殖,促进细胞衰老.HBP1在H2O2诱导的细胞衰老过程中起着重要作用,H2O2诱导的细胞衰老必须在HBP1存在的情况下才能发生.
- 姜彬张晓伟
- 关键词：P16细胞周期蛋白D1衰老过氧化氢处理
