孙君君
- 作品数：11 被引量：41H指数：4
- 供职机构：河南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省基础与前沿技术研究计划项目河南省高校科技创新团队支持计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 草鱼PGC-1β基因克隆及高糖高脂饲料对其表达的影响被引量：1
- 2015年
- 为探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1β基因在草鱼能量代谢中的作用,本研究克隆了草鱼PGC-1β基因的核心序列,并对其进行了生物信息学分析;利用Real-time PCR技术检测了PG C-1β在不同组织中的表达状况;同时研究了饥饿、饥饿再投喂及高糖(糖含量45%)高脂(脂含量8%)饲料对草鱼肝脏PGC-1β表达的影响。结果显示,所获得的草鱼PGC-1β基因部分c DNA片段长为885 bp(Gen Bank登录号:KM580493.1),共编码293个氨基酸,与斑马鱼的同源性为81%;该基因在脑中的表达量最高,肠和肝脏次之;与正常投喂组相比,饥饿(7 d)导致PGC-1β在肝脏中的mRNA水平显著升高,饥饿再投喂后几乎恢复到对照组的表达水平。饲喂高脂以及高糖高脂饲料(65 d)后,与对照组相比,草鱼肝脏中PGC-1β的mRNA水平显著升高。研究结果表明,PG C-1β基因在草鱼能量代谢旺盛的组织中高表达,同时饥饿处理、饲料糖和脂肪水平等营养状况显著影响PGC-1βmRNA的表达。以上提示,PGC-1β在草鱼能量代谢过程中可能起到重要作用。
- 卢荣华杨峰孙君君谢帝芝秦超彬杨丽萍郑文佳聂国兴
- 关键词：草鱼营养调控能量代谢
- 草鱼肝细胞脂变模型的建立及脂代谢基因表达分析被引量：9
- 2015年
- 为了筛选草鱼肝细胞脂肪变性的最佳诱导剂及浓度,并初步分析脂肪乳剂（lipid emulsions, LE）引起草鱼肝细胞脂肪变性的作用机理,以草鱼（Ctenopharyngodon idellus）正常肝细胞为研究对象,建立草鱼脂肪变性肝细胞模型,以含10%胎牛血清的基础培养液为对照组,处理组为含20%脂肪乳剂0.5~2 mL/L和含20%、50%胎牛血清的诱导培养液,孵育草鱼肝细胞48 h 后,定量分析肝细胞内的甘油三酯（TG）含量,观察脂滴积聚情况及肝细胞超微结构的变化,检测细胞培养上清中谷丙转氨酶（alanine transaminase, ALT）、谷草转氨酶（aspartate transaminase, AST）的活性, qRT-PCR技术检测脂代谢关键基因（PPARa、PPARg、SREBP-1c、LPL、Lep和UCP2）的转录水平变化,蛋白质印迹技术检测PPARg、SREBP-1c的蛋白水平变化。结果发现,含1~2 mL/L LE的诱导液组和含20%、50%FBS的诱导液组与对照组相比TG含量均显著上升（P〈0.05）,且20%FBS和各浓度LE诱导组的转氨酶活性与对照组相比差异不显著（P〉0.05）,表明含1~2 mL/L LE的诱导液和含20% FBS的诱导液均可建立草鱼营养性脂肪肝细胞模型。在肝细胞脂变模型中, PPARγ和 LPL 等脂代谢基因的表达量显著升高（P〈0.05）,而 Lep 基因表达量显著降低（P〈0.05）, PPARγ和SREBP-1c的蛋白水平升高。结论认为：采用1~2 mL/L LE和20%的FBS均可以在短时间内建立草鱼肝细胞脂肪变性模型,含1 mL/L LE的诱导液诱导效果最佳；肝细胞内脂质的蓄积可能与脂肪代谢关键基因PPARγ、SREBP-1c、LPL及Lep等密切相关。
- 卢荣华梁旭方孙君君杨峰王敏李玺洋白小丽
- 关键词：草鱼肝细胞脂肪变性基因表达脂质代谢细胞模型
- 鲤肠道小肽转运载体PepT1多克隆抗体的制备及其组织表达分析被引量：3
- 2016年
- 为从蛋白水平研究小肽转运载体（PepT1）在鲤（Cyprinus carpio L.）不同组织中的表达及分布规律,本研究采用PCR法获得PepT1 cDNA片段,并转化至大肠杆菌Rosetta,对目标多肽进行原核表达,将Pep T1重组蛋白纯化后免疫新西兰长耳兔（Oryctolagus cuniculus）,获取兔抗鲤PepT1多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,免疫组化检测PepT1的组织表达情况,并用荧光实时定量PCR技术检测PepT1转录水平组织表达情况。结果显示,目标多肽分子量约为28 kD;抗体效价达到4×10~5。PepT1在鲤的前肠、中肠、后肠、脾、肝胰脏和肾中均有表达。肠道组织PepT1的高表达与其主要完成食物中肽的吸收功能密切相关,且吸收部位主要集中在前肠和中肠;肾中PepT1免疫染色阳性区域也较为明显,这与肾小管基底膜存在对短肽的重吸收功能相关。此外,肝胰脏和脾PepT1也有一定量的表达,可能与这两个重要器官代谢旺盛有关。本研究制备的兔抗鲤PepT1多克隆抗体能够有效识别鲤各组织中的PepT1蛋白,在后续研究中亦可用于其他鱼类PepT1转运蛋白的表达定位和定量研究。
- 闫潇杨丽萍郑文佳孙君君卢荣华聂国兴
- 关键词：原核表达抗体效价
- 草鱼AdipoR1-B基因克隆、组织分布及其表达的营养调控被引量：2
- 2016年
- 为探讨Adipo R1-B在鱼类糖类和脂质代谢中的作用,本实验采用RACE方法获得了草鱼Adipo R1-B的全长c DNA序列(登录号:KP733846),利用生物信息学技术对该基因及其所编码蛋白的结构特征进行了分析;采用实时定量PCR技术,检测了Adipo R1-B在19个不同组织中的表达特性以及高糖(45%)、高脂(8%)和高糖高脂饲喂对草鱼肝脏中该基因表达的影响。结果显示,草鱼Adipo R1-B c DNA全长2186 bp,其中开放读码框为1122 bp,编码373个氨基酸;跨膜结构分析表明草鱼Adipo R1-B为典型的7次跨膜蛋白;同源性分析结果显示,草鱼Adipo R1-B与其他物种的Adipo R1-B高度同源(氨基酸相似度78%以上),并与斑马鱼Adipo R1-B的进化关系最近;组织分布结果显示,Adipo R1-B在草鱼肝脏中表达量最高,中枢神经系统和红肌次之;此外,高脂和高糖高脂饲喂均能够显著提高草鱼肝脏中Adipo R1-B的表达水平。因此,草鱼肝脏中Adipo R1-B的表达水平受到日粮中脂类水平的调控,推测该受体可能在调节鱼类脂质代谢中发挥重要作用。
- 杨峰秦超彬卢荣华孙君君杨丽萍聂国兴
- 关键词：草鱼脂联素受体基因克隆营养调控
- 糖对草鱼肝脂代谢关键基因转录水平的调控研究被引量：4
- 2015年
- 在目前集约化水产养殖模式下,草鱼肝脂质代谢紊乱问题比较严重,已引起人们的高度关注。为获知糖对草鱼肝脂代谢的影响及作用机理,本研究分别从活体和细胞水平上分析了糖对肝脂代谢5个关键基因转录水平变化的影响。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,检测了在低糖(糖含量24%)和高糖(糖含量42%)投喂条件下草鱼肝脏中固醇调节元件结合蛋白-1c、过氧化物酶体增殖物激活受体α和乙酰辅酶A羧化酶的转录水平变化,H·E染色观察肝脏组织形态学变化;并检测了在不同浓度葡萄糖作用下,草鱼肝细胞中固醇调节元件结合蛋白-1c、脂肪酸合酶和脂蛋白脂酶基因的表达变化。结果显示,肝组织中固醇调节元件结合蛋白-1c、乙酰辅酶A羧化酶在高糖组中的表达量显著高于对照组和低糖组(P<0.05),过氧化物酶体增殖物激活受体α在高糖和低糖条件下变化不明显(P>0.05);H·E染色观察发现在高糖条件下草鱼肝组织出现了大量的脂肪蓄积;在其肝细胞中固醇调节元件结合蛋白-1c、脂肪酸合酶、脂蛋白脂酶的mRNA表达量随葡萄糖浓度增加均呈先升后降趋势,分别在葡萄糖浓度为10mmol/L和20mmol/L时达到最高值(P<0.05)。研究结果表明,葡萄糖可能通过调节固醇调节元件结合蛋白-1c、乙酰辅酶A羧化酶和脂蛋白脂酶等基因的表达进而调节体内糖向脂的转化过程。研究结果为丰富鱼类糖代谢调控机理提供研究资料,并有望为提高鱼类饲料糖的利用效率提供理论依据。
- 孙君君卢荣华常志光秦超彬杨峰聂国兴
- 关键词：草鱼糖类脂代谢基因表达
- 淇河鲫IL-8cDNA克隆及组织表达分析
- IL-8是最早发现的趋化因子,属于CXC亚家族,与鱼类非特异性免疫水平关系密切.本文采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,从淇河鲫(Carassius auratus in Qihe river)总RNA反转录产物...
- 王俊丽雒燕婷郝光孙君君段艳艳卢荣华李学军孔祥会聂国兴
- 关键词：IL-8克隆
- 鱼类leptin的生物学特性及功能被引量：6
- 2015年
- 瘦素(Leptin)是肥胖基因(Obese gene)的产物,属于I型细胞因子。在哺乳动物中,leptin主要由脂肪细胞合成与分泌,是调控摄食、能量代谢、骨骼发育、甲状腺功能以及繁殖等生理过程的重要激素。目前,多种硬骨鱼类的leptin基因已被克隆,其功能也已得到初步研究。研究认为,鱼类leptin的主要合成部位在肝脏,其在氨基酸序列上与哺乳动物存在很大差异,但蛋白质结构高度保守;功能方面,leptin可调节鱼类的摄食、葡萄糖和脂肪代谢以及繁殖等生命活动过程。本文就鱼类leptin及其受体的特征结构、组织分布、表达调控及功能研究进展进行简要综述。
- 卢荣华孙君君梁旭方聂国兴杨峰
- 关键词：LEPTIN鱼类生物学特性食欲调节能量代谢
- 草鱼SREBP-1基因的克隆及糖对其在肝脏中表达的影响被引量：7
- 2014年
- 固醇调节元件结合蛋白（SREBPs）是调控糖脂代谢相关基因表达的关键核转录因子。为获知草鱼SREBP-1基因的序列及其在肝脏中的表达规律,本实验采用同源克隆和RACE方法获得了草鱼SREBP-1基因的部分cDNA序列,并通过生物信息学方法对该基因及所编码蛋白的结构特征进行了分析;采用实时荧光定量PCR技术,对SREBP-1基因在8种不同组织的表达规律及低糖（糖含量24%）和高糖（糖含量42%）投喂条件下肝脏中的表达水平进行了研究。结果显示,所克隆到的草鱼SREBP-1基因cDNA长4 760 bp,其中包括开放读码框3 426bp,编码1 141个氨基酸;草鱼SREBP-1具有一个典型的碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链结构（bHLH-zip）;氨基酸序列比对结果显示,草鱼SREBP-1与其他鱼类的同源性在76%~88%之间,与斑马鱼的进化关系最近;草鱼SREBP-1基因在脑中的表达量最高,肝脏和肠次之,在肾脏、脾脏、肌肉、脂肪和性腺中均有少量表达;与对照组相比,SREBP-1基因在高糖诱导下表达量显著提高（P〈0.05）,低糖诱导下没有显著性差异。研究表明,在高糖负荷条件下,草鱼肝脏中SREBP-1可能会促进糖的利用和转化,从而参与糖代谢调节过程,为丰富鱼类糖代谢调控机理提供研究资料,并有望为提高鱼类对饲料糖的利用效率提供理论依据。
- 孙君君卢荣华杨峰秦超彬杨丽萍王俊丽孔祥会李学军聂国兴
- 关键词：草鱼SREBP-1糖代谢基因表达
- 鱼类miRNAs研究新进展被引量：4
- 2017年
- MicroRNAs（miRNAs）是一类内生性的、进化上高度保守的单链成熟非编码RNA,长度约21~25个核苷酸,广泛存在植物、动物及微生物中~[1-2],参与生物体的胚胎形成、个体生长发育、机体免疫、疾病防御以及繁殖和糖脂类代谢等生命过程~[3-8]。目前,基于生物信息学预测,miRNAs约占整个基因组的2%~3%~[9]。
- 卢荣华王俊丽孙君君杨峰谢帝芝田雪聂国兴
- 关键词：鱼类MIRNAS
- 草鱼SREBP-1-3'-UTR双荧光素酶报告载体构建及miR-33对其表达的影响被引量：2
- 2017年
- 为研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)miR-33在固醇调节元件结合蛋白-1(Sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1)调节脂代谢中的作用,构建了草鱼SREBP-1基因3'端非翻译区(Untranslated region,UTR)含miR-33靶序列的双荧光素酶报告基因载体。首先用PCR法获得SREBP-1 mRNA含miR-33结合位点的3'UTR序列(379 bp),与双荧光素酶报告载体pmir GLO重组后转染DH5α感受态细胞。然后经筛选和双酶切鉴定,获得含有SREBP-1基因3'-UTR的双荧光素酶报告载体:pmir GLO-SREBP-1-3'-UTR。最后在草鱼肝细胞L8824共转染miR-33mimics和pmir GLO-SREBP-1-3'-UTR,明确miR-33与SREBP-1基因3'UTR区的靶向关系。结果表明,含有SREBP-1基因3'-UTR序列的双荧光素酶报告基因载体构建成功,PCR、双酶切和基因测序证明序列与目标一致;转染pmir GLO-SREBP-1-3'-UTR的L8824细胞可表达荧光素酶,单独转染载体组的荧光素酶活性显著高于共转染载体和miR-33 mimics组(P<0.05)。本研究证实草鱼SREBP-1是miR-33的直接靶基因,miR-33通过和SREBP-1 mRNA 3'UTR结合,调控SREBP-1基因的转录后表达。
- 王俊丽卢荣华秦超彬常志光孙君君杨峰聂国兴
- 关键词：草鱼SREBP-1
