孙海涛
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：首都师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市教委科技计划面上项目北京市属高等学校人才强教计划资助项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 烟草丝束蛋白ABD2与微丝的体内体外相互作用
- 2014年
- 微丝骨架在细胞的生命活动中具有重要的功能,而其动态的解聚聚合特性是其实现功能的前提.丝束蛋白(fimbrin/plastin)做为微丝结合蛋白质,是微丝骨架的重要调控因子之一,含有2个肌动蛋白结合结构域,目前对其结合微丝的机制并不清楚.本文以烟草丝束蛋白的肌动蛋白结合结构域2(NtFAbd2)为研究对象,通过原核细胞表达纯化NtFAbd2,利用体外沉淀法分析发现,NtFAbd2能够与微丝结合;利用激光共聚焦扫描显微镜分析发现,在烟草BY-2悬浮细胞内,NtAbd2-GFP与微丝共分布,这些结果为深入分析植物丝束蛋白的作用机制提供了新的数据.
- 梁蒙韩利波孙海涛黄璐陈志玲
- 关键词：微丝
- 粗糙脉孢菌驱动蛋白-1在菌丝极性生长中的功能被引量：1
- 2022年
- 为了研究驱动蛋白-1的基因(Kin-1)在菌丝极性生长中的功能,本文以粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)菌株为材料,利用同源重组技术尝试获得其敲除突变菌株Kin-1^(KO),并分析菌株87-3、Ku70^(RIP)和Kin-1^(KO)的菌丝生长情况.结果表明,与菌株87-3和Ku70^(RIP)相比,菌株Kin-1^(KO)的菌落生长缓慢、质地致密,菌丝生长速率下降,菌丝直径变粗、分枝增多.本研究成果获得了粗糙脉孢菌Kin-1敲除突变株Kin-1^(KO),证实Kin-1对于粗糙脉孢菌菌丝的生长至关重要.
- 孙海涛陈志玲
- 关键词：粗糙脉孢菌
- 粗糙脉孢菌前纤维蛋白Y86和R88位点突变抑制菌丝生长被引量：1
- 2015年
- 微丝骨架在真菌的生长发育过程中发挥着重要的作用,而动力学特性是其实现功能的关键.前纤维蛋白(profilin)是肌动蛋白动态组装的主要调控因子,对其功能研究有助于阐明微丝骨架在真菌生长发育中的机制.本文以丝状真菌模式生物粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)为材料,利用定点突变技术和同源重组技术,分别将前纤维蛋白上肌动蛋白结合位点86位酪氨酸(Y86)和88位精氨酸(R88)进行了单突变和双突变,获得了Y86R、R88E和Y86RR86E前纤维蛋白点突变株.进一步利用平板培养和竞争性生长管培养对点突变株的表型进行分析后发现,与野生型相比,3个前纤维蛋白点突变株的菌丝生长均明显减慢.这些结果表明,前纤维蛋白与肌动蛋白的相互作用对于N.crassa的生长和发育至关重要.
- 孙海涛黄璐陈志玲
- 关键词：前纤维蛋白定点突变菌丝生长粗糙脉孢菌
- 前纤维蛋白点突变对粗糙脉孢菌生长的影响及其生化机制研究
- 2022年
- 【目的】为进一步了解前纤维蛋白(profilin,PFN)在丝状真菌中的功能,本文以粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)为研究对象,进行了前纤维蛋白对其菌落生长和肌动蛋白(actin)聚合特性影响的探究。【方法】通过采用定点突变、同源重组、分生孢子过膜和PCR等技术,获得粗糙脉孢菌前纤维蛋白F78 (F78A和F78D)和V113 (V113E、V113R和V113W)的点突变体。利用平板生长法、竞争性生长管和显微镜观察检测表型变化,并结合多聚脯氨酸亲和层析纯化、荧光分光光度技术和高速共沉淀等技术分析点突变的前纤维蛋白对肌动蛋白聚合特性的影响。【结果】获得的粗糙脉孢菌前纤维蛋白点突变株F78A、F78D、V113E、V113R和V113W,与对照菌株ku70RIP相比,突变株生长均明显减慢(P<0.05),其中PFN (F78D)和PFN (V113W)的突变体在生长的12–48 h,菌落直径分别仅为对照的20.0%–75.7%和12.7%–39.2%。竞争性生长管分析表明,PFN (F78D)和PFN(V113W)突变株菌丝生长速度受到显著抑制,分生孢子形成的节律并未发生明显改变。将纯化获得的前纤维蛋白野生型及点突变株F78D和V113W蛋白进行肌动蛋白的成核研究发现,前纤维蛋白能抑制肌动蛋白自发的成核过程,并表现为浓度依赖效应;而点突变蛋白F78D和V113W抑制肌动蛋白自发成核的作用减弱;进一步对肌动蛋白聚合特性的研究发现:野生型的前纤维蛋白在0–5μmol/L范围内可抑制肌动蛋白的聚合,且随浓度上升抑制作用进一步增强,致使上清中单体肌动蛋白含量最高可上升至82%左右;而5μmol/L点突变蛋白F78D和V113W抑制肌动蛋白聚合的作用均明显减弱,分别使单体肌动蛋白的含量比对照下降12.0%(P<0.01)和30.7%(P<0.01)。【结论】本研究证实前纤维蛋白在粗糙脉孢菌中起着重要的作用,其F78和V113是重要的活性位点,对于调节肌动蛋白的聚合解聚过程和粗糙脉孢菌的生长发育具有重要作用。
- 韩慧凤孙海涛李艳红陈志玲
- 关键词：粗糙脉孢菌前纤维蛋白肌动蛋白聚合定点突变
- 粗糙脉孢菌丝切蛋白的纯化及微丝解聚活性分析被引量：1
- 2022年
- 为探讨粗糙脉孢菌丝切蛋白(NcCof)的生化功能,对其进行纯化和微丝解聚活性分析。序列比对结果表明,NcCof N端第4位丝氨酸(S4)高度保守,推测其是NcCof发挥活性的重要位点,三级结构预测结果表明,它含有5个α-螺旋和6个β-折叠,中间的4个β折叠片处于反平行状态,5个α-螺旋围绕在β折叠片周围,具有典型的丝切蛋白/肌动蛋白解聚因子家族结构特征。利用点突变、亲和层析纯化得到蛋白NcCof、NcCof(S4A)和NcCof(S4D),进一步通过高速共沉淀等技术对其微丝解聚活性进行研究,结果表明,NcCof具有经典的微丝解聚活性,并具有剂量效应,突变蛋白NcCof(S4A)和NcCof(S4D)也具有解聚微丝的能力,但是NcCof(S4D)的解聚活性明显减弱。结果为进一步探讨NcCof调控肌动蛋白动态特性的分子机制奠定基础。
- 黄璐陈菁秋孙海涛李艳红陈志玲
- 关键词：粗糙脉孢菌丝切蛋白肌动蛋白
