季卫丹
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：徐州师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 小鼠HSP60基因的克隆与表达条件的优化
- 2011年
- 目的:克隆小鼠热休克蛋白60(HSP60)基因,在大肠杆菌中表达,并进一步对其表达条件进行优化。方法:采用RT-PCR技术克隆出非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠HSP60的cDNA序列。构建重组表达载体pET28a-HSP60,以其转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),在不同的菌体浓度、不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、不同诱导时间以及不同温度条件下诱导,检测重组蛋白的表达情况。结果:获得一个含有1 721bp的cDNA的片段,重组蛋白HSP60在E.coli BL-21(DE3)中的最佳表达条件是菌体密度A600nm为0.6,诱导时间为5h,诱导物(IPTG)浓度为4mmol/L,诱导温度为35℃,重组蛋白大小约为60kD。结论:成功克隆了小鼠HSP60基因,并在大肠杆菌中获得高效表达,为重组蛋白的分离纯化及进一步研究其生物学功能奠定了基础。
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- 关键词：热休克蛋白60克隆大肠杆菌
