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崔莲仙: 作品数：112 被引量：146H指数：7; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞的构建及生物学功能鉴定被引量：2: 2008年; 目的:建立特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台。方法:利用搭桥PCR的方法将已知的γδT细胞克隆DBS4.3特异性CDR3编码序列嵌入到γ9和δ2cDNA序列中,取代原有的CDR3区序列,获得的全长γ9和δ2链分别插入真核表达载体pREP7和pREP9中,共转染J.RT3-T3.5细胞,双压力抗生素筛选获得表达特异性γδTCR的转染细胞,通过ELISA和Re-altime PCR检测该转染细胞在接受抗原刺激后IL-2的分泌情况。结果:ELISA和Realtime PCR结果显示表达DBS4.3特异性γδTCR的转染细胞在DBS4.3特异性抗原仲丁胺和抗γδTCR抗体刺激作用下,活化分泌IL-2。结论:构建了特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台,为研究γδTCR识别抗原的机制奠定了基础。; 郗雪艳曹伟崔莲仙何维; 关键词：ΓΔT细胞抗原识别

人外周血γδ T细胞的可溶性anti-TCR γδ抗体扩增及其培养和保存的条件被引量：2: 2009年; 目的:比较人外周血γδT细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件。方法:分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性anti-TCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,采用锥虫蓝染色法检测γδT细胞存活率,采用免疫荧光染色法考察γδT细胞的纯度和亚型,采用乳酸脱氢酶(lacate dehydrogenase,LDH)法检测γδT细胞对不同肿瘤细胞系的杀伤作用。结果:添加15%小牛血清和添加5%人AB血浆的RPMI1640培养液对γδT细胞的培养效果接近,均优于AIM V无血清培养液。可溶性抗体与固相化抗体扩增外周血γδT细胞的效果相似;可溶性抗体扩增的γδT细胞受体(Tcell receptor,TCR)库容完整,同时具有TCR Vδ1和Vδ2两种亚型;对肺癌、肝癌和卵巢癌细胞系均有体外杀伤活性。这些γδT细胞在含1%人AB血浆或0.25%人血白蛋白的生理盐水中、4℃条件下保存12h,细胞存活率仍达95%以上。结论:可溶性anti-TCRγδ抗体和含有人AB血浆的RPMI1640培养液可以用于人外周血γδT细胞的体外扩增,扩增得到的γδT细胞在含有血浆或白蛋白的生理盐水中稳定性较好。; 康宁崔瑛周建华刘庆丰崔莲仙巴德年何维; 关键词：ΓΔT细胞

PKM2是TCRγδ的配体吗?: 2011年; 目的检验M2型丙酮酸激酶(PKM2)是否是肿瘤细胞表面TCRγδ识别的配体。方法用Western blot的方法验证OT3肽(合成的TCRγδ中δ链的CDR3区肽)与PKM2结合,用Western blot及免疫组化法观察PKM2在肿瘤细胞及组织中的表达,用流式细胞术及激光扫描共聚焦显微镜术验证PKM2在肿瘤细胞的定位,用固相化PKM2体外扩增γδT细胞和PKM2刺激γδT细胞分泌IFN-γ的实验检验PKM2的功能。结果 (1)PKM2可与OT3肽结合,肿瘤细胞总蛋白提取物中含有大量PKM2,提示以OT3为探针,从肿瘤细胞总蛋白提取物中钓取到PKM2是合理的,用此方法筛选OT3结合蛋白的方法是可行的;(2)PKM2普遍表达于肿瘤细胞及组织,但不表达于肿瘤细胞膜;(3)PKM2在体外不能扩增γδT细胞,无刺激γδT细胞产生IFN-γ的功能。结论 PKM2不表达于肿瘤细胞表面,对γδT细胞不具有刺激活化的功能,PKM2不具备TCRγδ的配体特性。; 师敬飞崔莲仙何维; 关键词：M2型丙酮酸激酶 ΓΔT细胞

可用于生产人重组白细胞介素－15的原核表达工程菌及纯化方法: 本发明涉及一种可用于大规模生产人重组白细胞介素-15(recombinant human interleukin-15，rhIL-15)的原核系统表达及纯化技术。更具体地，本发明的技术包含一种工程菌和一项全新的表达、纯化...; 何维唐峰崔莲仙巴德年; 文献传递

人白细胞介素-15 cDNA在中国仓鼠卵巢细胞中的高效稳定表达: 1999年; 目的　在中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）中表达人白细胞介素１５（ＩＬ１５），为ＩＬ１５的功能研究提供有利条件。方法　采用ＰＣＲ技术扩增人ＩＬ１５编码区ｃＤＮＡ片段，构建重组真核表达载体，再以脂质体法转染至ＣＨＯ细胞进行表达，鉴定表达产物的生物学活性。结果　共获得８株高效表达ＩＬ１５的阳性克隆，其平均活性为（３１８５４±３２７２）Ｕ／（１０６ｃｅｌｌｓ·ｄ），稳定传代６个月后仍保持其表达活性。结论　人ＩＬ１５; 薛莉崔莲仙何维巴德年; 关键词：白细胞介素15 卵巢细胞 CHO

SARS病毒N蛋白特异性单链抗体的筛选被引量：2: 2005年; 目的利用大容量人源性SARS单链抗体库筛选N蛋白的特异性单链抗体。方法利用RTPCR的方法克隆了SARS病毒的N蛋白基因,克隆入原核表达载体pBV220,在大肠杆菌DH5α中进行表达并经离子交换色谱纯化后得到了纯度达95%以上的N蛋白,然后以此蛋白包被25cm2组织培养瓶,对SARS单链抗体库进行先松弛,后严谨的筛选、富集,进行4轮筛选后对所筛的抗体进行ELISA鉴定。结果经过4轮的筛选、富集,得到了1株高亲和力的N蛋白单链抗体N18。结论在对SARS疾病的早期检测或筛查、SARS病毒的生活周期及发病机理的研究中N18将起到重要的作用。; 赵爱志杨宇袁振华董小岩连忠辉崔莲仙吴小兵何维; 关键词：SARS冠状病毒 N蛋白单链抗体库 SARS病毒 N蛋白基因 PBV220

γδ TCR CDR3嵌合抗体抗肿瘤的初步研究: 目的:为了探讨肿瘤浸润γδT细胞受体(γδTCR)CDR3区移植的嵌合抗体的抗肿瘤作用,我们进行体内外抗肿瘤实验,以期为肿瘤免疫治疗探索新的策略与手段。方法:我们测定了卵巢癌患者γδTCR δ链的互补决定区3(CDR3δ...; 王准胡洪波崔莲仙何维; 关键词：CDR3 免疫毒素肿瘤治疗; 文献传递

用硝酸纤维素膜固定的蛋白质制备单特异性抗体: 1993年; 抗体在医学和分子生物学领域有着非常广泛的用途,当应用抗体对某个蛋白质进行鉴定、定位及纯化时,抗体的特异性常是影响实验结果的关键因素之一。单克隆抗体是目前已知特异性最高的抗体,但制备单克隆抗体常遇到一些问题。如:有的抗体难以诱导出来,有的抗体产量非常低。; 崔莲仙徐轶珺; 关键词：抗体