席丽
- 作品数：10 被引量：15H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 初产牛乳腺炎研究进展被引量：3
- 2009年
- 奶牛乳腺炎是由多种因素引起的严重影响奶牛业发展的重要疾病,初产牛临床和亚临床乳腺炎的流行和发病率,尤其在泌乳初期,均高于经产母牛。初产牛与经产牛的流行病学和危险因素不尽相同,为更加有效地控制初产牛乳腺炎,必须对初产牛乳腺炎进行深入系统的研究。论文重点论述了初产牛产前和产后临床、亚临床乳腺炎患病率和发病率,乳腺炎的致病因素,病原和诊断技术,介绍了国内外初产牛乳腺炎兽医防治、抗病育种等方面的研究成果。
- 席丽靳亚平秦新喜
- 关键词：乳腺炎控制策略
- CD58抗体的制备及其检测方法的建立
- 2008年
- 【目的】建立CD58特异性抗体的制备方法,及检测CD58抗体的间接ELISA方法。【方法】用CD58混合弗氏佐剂和兔淋巴细胞吸附CD58的方法免疫家兔获取CD58的抗体,双向免疫扩散试验检测抗体特异性,间接ELISA检测抗体水平。【结果】两种方法都能够使动物机体产生免疫应答;双向免疫扩散试验证实,弗氏佐剂法获得2种抗体,淋巴细胞吸附法制备抗原可获得1种抗体;间接ELISA检测法CD58的最适包被浓度为10.0μg/mL,最佳封闭液为10 g/L明胶,辣根酶标记的羊抗兔IgG工作浓度为1∶2 000。【结论】兔淋巴细胞吸附法可制备针对CD58的单一抗体,间接ELISA检测方法可以用于CD58抗体水平的检测。
- 秦新喜盛宏霞靳亚平宋毓民席丽苏圣华李倩杨艳
- 关键词：CD58ELISA抗体
- Hsp65与IL-2融合蛋白诱导小鼠细胞免疫应答及保护力被引量：3
- 2008年
- 目的研究Hsp65与hIL-2的融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力。方法在大肠杆菌中诱导表达Hsp65与hIL-2的融合蛋白,通过Ni-NTA亲合柱纯化后的蛋白经鉴定后,与佐剂DDA和MPL联合免疫小鼠,连续免疫3次,每次间隔2周,最后一次免疫结束后两周,分离5只小鼠脾淋巴细胞,测定淋巴细胞增殖指数,IFN-γ和IL-2水平,以及特异性淋巴细胞杀伤功能,其余5只免疫小鼠用于MTB毒株攻击实验。结果获得融合蛋白可分别与抗Hsp65和抗hIL-2的单抗发生特异性反应。融合蛋白免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞被有效活化,诱导产生的-γIFN和IL-2的水平以及CTL杀伤功能均显著高于BCG和单纯Hsp65免疫组(P<0.05)。融合蛋白免疫组可有效抵抗MTB毒株攻击,脾脏细菌数显著减少(4.36±0.48),提供的保护力与BCG相当(4.30±0.53)。结论Hsp65与hIL-2的融合蛋白是一种有效的亚单位疫苗,可用于TB的预防。
- 师长宏张海席丽张廷芬赵勇王丽梅徐志凯
- 关键词：热休克蛋白65人白细胞介素2
- 结核分枝杆菌HSP65亚单位疫苗和基因疫苗的构建及免疫学特性被引量：2
- 2008年
- 目的:构建HSP65蛋白的亚单位疫苗和基因疫苗,并与BCG相比较,评价这两种疫苗在小鼠体内的免疫学特性.方法:从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出hsp65基因,连接进入pMD18-T载体中,测序后,利用不同酶切位点将完整的hsp65基因分别克隆到pProEX HTb原核表达载体和pcDNA3.1(-)真核表达载体,前者在大肠杆菌中诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blot分析后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化;后者通过阳离子聚合物瞬转P815细胞,用间接免疫荧光检测细胞内HSP65蛋白的表达.用上述原核表达蛋白和真核质粒(分别为亚单位疫苗和基因疫苗)免疫BALB/c小鼠,ELISA测定特异性抗体的滴度,MTT测定脾淋巴细胞特异性增殖指数.结果:获得的结核分枝杆菌hsp65基因序列与GenBank公布的完全一致;Western Blot结果显示,在Mr约65000处有与鼠抗HSP65 mAb和临床结核患者血清的特异性结合带;免疫荧光结果显示转染重组质粒的P815细胞的表达蛋白与HSP65 mAb有特异性结合.两种疫苗免疫小鼠体内产生特异性抗体,经蛋白刺激后可引起脾淋巴细胞特异性增殖.结论:所构建的两种疫苗能引起免疫动物的特异性体液和细胞免疫反应,应进一步研究其抵抗结核分支杆菌感染的保护力机制,以用于结核病的防治研究.
- 席丽师长宏靳亚平张海张廷芬赵勇岳晨莉
- 关键词：结核分枝杆菌热休克蛋白质类亚单位疫苗基因疫苗
- 人血浆中PYY定量检测方法的建立
- 酪酪肽(PYY)与神经肽Y(NPY)和胰多肽(PP)具有较高的序列同源性和结构同源性(PP-折叠)，共同属于NPY调节肽家族。PYY是一种含有36个氨基酸的直链多肽，且在回肠末端、结肠和直肠浓度最大。在循环系统中主要以P...
- 席丽
- 关键词：超高效液相色谱-串联质谱法
- 文献传递
- 结核分支杆菌HSP65的基因表达及其免疫学特性研究
- 结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)热休克蛋白65(Heat Shock Protein 65，HSP65)是热休克蛋白60家族成员之一，由groEL2基因编码，是一种高度保守的蛋...
- 席丽
- 关键词：结核分支杆菌基因表达免疫学特性酶切鉴定稳定转染
- 文献传递
- 结核分枝杆菌Hsp65与IL-2融合蛋白稳定表达细胞系的建立被引量：1
- 2008年
- 目的构建了表达结核分枝杆菌Hsp65与IL-2融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的P815细胞系。方法将Hsp65与IL-2基因分别克隆至真核表达载体pcDNA3.1,转化DH5α菌株感受态细胞,获得阳性重组质粒Hsp65-IL-2-pcDNA3.1。在阳离子聚合物作用下,重组质粒转染与BALB/c遗传背景一致的P815(H-2d)细胞。G418筛选抗性克隆,免疫荧光检测融合蛋白的表达。结果真核质粒转染的阳性克隆细胞,经RT-PCR检测到Hsp65与IL-2融合蛋白mRNA水平的表达,分别用抗Hsp65和IL-2的单抗进行间接免疫荧光检测,可在转染重组质粒的P815细胞膜上观察到较强的绿色荧光。结论获得表达Hsp65与IL-2融合蛋白的稳定细胞系,为其CTL研究提供了合适的靶细胞。
- 师长宏张海席丽王晓武王丽梅赵勇
- 关键词：结核分枝杆菌真核表达热休克蛋白65白细胞介素2融合蛋白
- 藤黄微球菌复苏促进因子结构域及其突变体基因的克隆和表达及生物活性的测定被引量：5
- 2008年
- 目的克隆、表达藤黄微球菌复苏促进因子（Rpf）结构域及其突变体基因，评价其生物学活性。方法采用PCR方法从藤黄微球菌基因组中扩增出Rpf结构域及其突变体基因E54A、E54K，用限制性内切酶消化后克隆入pMD-18T载体中，将测序正确的基因插入到pGEX-4T-1表达载体中，转化大肠杆菌DH5α，经异丙基-β—D硫代半乳糖（IPTG）诱导，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定表达蛋白，利用Rpf结构域单克隆抗体进行Western blot分析。用GS-4B亲和层析柱纯化蛋白，将纯化的蛋白加入到休眠的耻垢分枝杆菌中测定各自的生物活性。结果获得藤黄微球菌Rpf结构域及其E54K和E54A突变体基因，测序结果与美国基因序列数据库GenBank公布的序列完全相同，突变位点与设定一致；表达蛋白相对分子质量与文献报道一致；Western blot结果显示，在相对分子质量约32000处有与Rpf结构域单克隆抗体特异性结合带。通过GS-4B系统，得到纯化的GST融合蛋白，并证实Rpf结构域蛋白对休眠的耻垢分枝杆菌有一定的复苏和促生长作用，突变体E54K对耻垢分枝杆菌的生长有抑制作用。结论获得Rpf结构域及其2种突变体蛋白，明确其对耻垢休眠菌有复苏的作用。
- 岳晨莉史皆然师长宏张海赵雷张廷芬赵勇席丽
- 关键词：突变体生物学活性
- 结核分枝杆菌热休克蛋白65与人白细胞介素-2的融合蛋白诱导小鼠免疫应答及保护力的研究
- 2008年
- 热休克蛋白65（Hsp65）是结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）感染过程中一个重要的保护性抗原，具有很强的免疫原性，而白细胞介素-2（IL-2）是一种辅助性T淋巴细胞（Th1）型的细胞免疫佐剂，不仅可增强机体的免疫应答，而且可以诱导机体的免疫反应向Th1型方向发展。因此，我们构建并表达了Hsp65与IL-2的融合蛋白，观察该融合蛋白在小鼠体内诱导产生的免疫应答及保护力，为结核病新型疫苗的研究奠定基础。
- 师长宏张海席丽张廷芬赵勇王丽梅徐志凯
- 关键词：人白细胞介素-2热休克蛋白65结核分枝杆菌免疫应答保护力蛋白诱导
- 结核分枝杆菌Hsp65的表达、纯化与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌热休克蛋白65(Heat Shock Protein 65),为研究结核病诊断技术提供基础。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中分两段扩增出hsp65基因,将上下游基因片段分别连接进入pMD18-T载体中,序列测定正确后,通过基因内部的单一酶切位点进行连接。将完整的hsp65基因克隆到pProEX HTa载体并在大肠杆菌DH5α中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化。获得的纯化蛋白与10例临床可疑结核病人血清进行Western-blot分析。结果获得的结核分枝杆菌Hsp65基因序列与GenBank公布的一致;表达蛋白相对分子质量为65 kDa,与文献报道相同;Western-blot结果显示,在相对分子量约65 kDa处与鼠抗MTB Hsp65 mAb特异性结合带;纯化的目的蛋白与8例病人血清有特异性结合条带,2例为阴性,该结果与临床诊断一致。结论成功表达、纯化和鉴定了Hsp65蛋白,为其在结核病诊断研究中的应用奠定了基础。
- 席丽师长宏靳亚平张廷芬赵勇岳晨莉
- 关键词：结核分枝杆菌HSP65表达纯化
