张伟三
- 作品数：5 被引量：18H指数：2
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：贵州省教育厅科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法的建立被引量：5
- 2002年
- 目的 建立一种简便、准确、实用的乙型肝炎病毒 ( HBV)耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法。方法 根据已公布的 HBV DNA序列 ,在 HBV多聚酶基因区设计并合成了两对寡核苷酸引物 ,其中一只为错配引物 ;应用巢式错配聚合酶链反应特异性扩增含有 HBV多聚酶基因 YMDD基序的片段 ,扩增产物用限制性内切酶 ( Nde )酶切 ,琼脂糖凝胶电泳 ,观察酶切后的目的片段限制性片段长度多态性 ( RFLP)图谱。部分标本进行 DNA测序。结果 ( 1 )所建立的巢式错配 PCR- RFLP方法操作简便 ,快速 ,从 DNA提取到酶切后电泳分析仅需要 1 1小时 ;灵敏度高 ,可以检测到 1 0 3 copies/ml的 HBV DNA;特异性强 ,结果准确 ,经 DNA测序证实。 ( 2 )应用该方法对 2 0例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎患者的系列血清进行了检测 ,发现 YMDD变异者 ( 4 5 % ) 9例 ,YMDD野毒株者 ( 5 5 % ) 1 1例 ,表明该方法可有效地鉴别 HBV YMDD野毒株与变异株。结论 本实验所建立的巢式错配 PCR- RFLP方法简单、敏感、特异 ,适合于一般实验室应用及大规模的人群调查。
- 张伟三丁静娟
- 关键词：限制性片段长度多态性分析拉米夫定基因变异
- 乙型肝炎病毒耐拉米夫定P基因变异的研究被引量：2
- 2002年
- 张伟三丁静娟
- 关键词：乙型肝炎乙型肝炎病毒感染拉米夫定
- 耐拉米夫定HBV多聚酶基因变异检测方法的建立及应用
- 2004年
- 张伟三丁静娟
- 关键词：耐拉米夫定HBV多聚酶基因变异乙型肝炎
- 乙型肝炎病毒耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法研究被引量：11
- 2004年
- 目的 建立简便、准确、实用的检测乙型肝炎病毒耐拉米夫定多聚酶 (P)基因变异的方法。方法 根据HBV基因序列 ,设计 5只寡核苷酸引物 ,用巢式聚合酶链反应 (nestedPCR)分别扩增HBVP基因B区和C区片段 ,产物用NdeⅠ或NIaⅢ酶切 ,琼脂糖胶电泳 ,分析酶切产物长度多态性(RFLP) ,建立检测P基因变异的方法。对 30例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎 (慢乙肝 )患者检测YMDD基序及 5 2 6位点变异 ,16例未用拉米夫定的慢乙肝患者为对照。 4份PCR产物作克隆测序以验证方法的准确、可靠。结果 所建的巢式PCR RFLP方法操作简便、快速 ,从模板提取到酶切后电泳分析仅需 11h ;灵敏度高 ,可检测到 10 3拷贝 ml的HBVDNA ;结果准确 ,4份经酶切分别判断为野毒株或变异株的标本经测序证实。 30例用拉米夫定的慢乙肝患者中 ,发现单纯YMDD变异 8例(2 6 7% ) ,YMDD联合L5 2 6M变异 3例 (10 0 % ) ,16例对照未检出上述位点的变异。结论 本方法简便、准确 ,适合较大样本检测。可用于临床筛检常见拉米夫定耐药性HBVP基因变异。
- 丁静娟张伟三张莉莎
- 关键词：乙型肝炎病毒拉米夫定多聚酶基因变异
- HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法的建立被引量：1
- 2002年
- 目的 建立一种简便、准确、实用的乙型肝炎病毒 (HBV)耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法。 方法 根据已公布的HBVDNA序列 ,在HBV多聚酶基因区设计并合成了两对寡核苷酸引物 ,其中一只为错配引物 ;应用巢式错配聚合酶链反应 (PCR)特异性扩增含有HBV多聚酶基因YMDD基序的片段 ,扩增产物用限制性内切酶 (NdeⅠ )酶切 ,琼脂糖凝胶电泳 ,观察酶切后目的片段的限制性片段长度多态性 (RFLP)图谱。部分标本进行DNA测序。 结果 (1)所建立的巢式错配PCR RFLP法 ,从DNA提取到酶切后电泳分析仅需要 11小时 ;灵敏度高 ,可以检测到 10 3 copies/ml的HBVDNA ;特异性强 ,结果准确 ,经DNA测序证实。 (2 )检测 2 0例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎患者的系列血清 ,发现YMDD变异者 (45 % ) 9例 ,YMDD野毒株者 (5 5 % ) 11例 ,表明该法可有效地鉴别HBVYMDD野毒株与变异株。 结论 本实验所建立的用于检测HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异的巢式错配PCR RFLP方法简单、敏感、特异 ,适用于一般实验室及大规模的人群调查。
- 张伟三丁静娟门晓燕
- 关键词：拉米夫定多聚酶基因耐药性基因变异
