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人胰岛素原基因胰外表达重组体的构建及鉴定被引量：7: 2004年; 目的 :构建胰外表达成熟胰岛素的重组体。方法 :将人胰岛素原基因进行二处突变 ,突变后的胰岛素原基因与逆转录病毒载体 pLXSN重组并转染肝癌细胞。提取肝癌细胞基因组DNA ,PCR方法鉴定人胰岛素原基因与载体重组结果及在肝癌细胞基因组中整合情况。同时测定成熟胰岛素的表达。结果 :胰岛素原基因已整合到肝癌细胞基因组。突变的胰岛素原可被广泛存在的furin酶识别 ,在培养基内检测到较高浓度的成熟胰岛素。结论 :成功构建胰外表达成熟胰岛素的突变人胰岛素原基因逆转录病毒重组体。; 袁凤山张坤杨立新王大会尤春暖; 关键词：逆转录病毒载体基因重组基因表达

简捷的PCR点突变实现人胰岛素原基因非β细胞表达被引量：3: 2004年; 利用聚合酶链反应 (PCR)技术将人胰岛素原基因进行两处突变 ,引入Furin酶的裂解位点 ,再构建突变人胰岛素原基因逆转录病毒载体重组质粒 ,转染HepG2肝癌细胞 ,经检测可表达成熟胰岛素。; 袁凤山杨立新张坤王大会; 关键词：聚合酶链反应点突变基因表达 L型糖尿病

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张坤