张悠
- 作品数：10 被引量：19H指数：3
- 供职机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家科技部农业科技成果转化资金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 嗜水气单胞菌J-1株灭活疫苗生产工艺的改进被引量：1
- 2011年
- 目的改进嗜水气单胞菌J-1株灭活疫苗的生产工艺,提高培养效率。方法采用改良培养基和产毒素培养基,利用机械式通风搅拌培养J-1菌株,确定发酵培养时间,并比较两种培养基的培养效果;用摇瓶灭活和罐灭活J-1菌株培养液,比较不同浓度甲醛的灭活效果。结果用机械搅拌发酵罐培养J-1菌株,菌体生长12～14 h达峰值,产毒素培养基菌液活菌数平均为102×108 CFU/ml,改良培养基活菌数平均为216×108 CFU/ml,较产毒素培养基提高了111.7%,活菌数最大可达300×108 CFU/ml;改良培养基培养J-1菌株,培养液毒力略高于产毒素培养基;0.3%的福尔马林于37℃灭活24 h,可完全灭活J-1菌株培养液,且制备的灭活疫苗福尔马林残留量符合质量标准。结论改良培养基培养J-1菌株的效果明显优于产毒素培养基,机械式搅拌发酵罐培养嗜水气单胞菌,可比原工艺缩短培养时间一半。
- 陶家发赖迎迢任燕江小燕康光辉张悠石存斌吴淑勤
- 关键词：嗜水气单胞菌生产工艺
- 鳜鱼脑部细胞培养研究
- 本文以本实验室建立的鳜鱼脑部细胞(CPB)系为实验材料,目的是比较该细胞在不同培养条件下的生长状况,通过筛选和优化该细胞培养各种条件,为后续工厂化大规模生产鳜鱼疫苗做基础。通过对不同培养基、不同血清浓度、不同PH值等培养...
- 赖迎迢付小哲陶家发张悠石存斌
- 关键词：鳜鱼病毒疫苗
- 文献传递
- 基于CPB细胞扩增体系的鳜弹状病毒增殖条件的优化被引量：3
- 2018年
- 为获知鳜弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)QY株在体外培养细胞中最适增殖条件,以鳜脑细胞系(Chinese perch brain cell line,CPB)为增殖体系,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)技术所测病毒拷贝数为判断指标,比较同步接毒和异步接毒2种接种方式以及病毒接种量、血清浓度等培养条件对病毒增殖的影响,确定SCRV-QY株在CPB细胞中的最适增殖条件。结果显示,单位体积病毒增殖量方面,异步接毒法优于同步接毒法,以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为10将病毒接种长满单层的CPB细胞中,28°C吸附1.5 h,用含2%胎牛血清的L15培养液于28°C培养时,病毒增殖量最高,为5.59×10^(10)拷贝/mL;而从单位成本所获病毒量考虑,同步接毒法筛选出的4种增殖条件单位成本所获的病毒产量优于异步接毒法,其中当MOI=0.03、胎牛血清终浓度为6%时,同步接种对数生长中期的CPB细胞,28°C恒温培养70 h后收获病毒液,单位成本所获病毒量最高,为4.88×10^(13)个拷贝/元。综上所述,本研究以病毒增殖量和培养基成本作为考量,优化SCRV-QY株的增殖条件,可为SCRV疫苗低成本、规模化生产提供理论依据。
- 罗霞付小哲李宁求林强黄志斌张悠
- 关键词：增殖条件
- 同步接毒条件下鳜传染性脾肾坏死病毒在CPB细胞中的最适增殖条件被引量：5
- 2015年
- 为了获知鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)同步接毒最适增殖条件,通过检测不同血清浓度、病毒接种量、细胞状态等培养条件下的病毒拷贝数,确定鳜脑组织细胞(CPB)同步接种ISKNV的最适体外增殖条件。结果表明,上述各因素对ISKNV的增殖量均有明显影响。其中选取处于对数生长中期的CPB细胞,胰酶消化后按照病毒感染复数(MOI)为0.2同步接种ISKNV,培养液中胎牛血清终浓度为6%时,28℃恒温培养9 d后收获,所得病毒拷贝数最多,为2.54×108拷贝/m L。将所测得病毒拷贝数折算成培养基成本进一步分析表明,按照上述相同条件进行接毒,每元人民币培养基所得病毒量也最高,为4.24×1011拷贝。综上所述,本研究基于病毒增殖量及培养基成本对病毒增殖条件进行优化,可为低成本ISKNV疫苗的生产提供理论依据。
- 罗霞付小哲李宁求林强张悠黄志斌
- 关键词：传染性脾肾坏死病毒荧光定量PCR增殖条件
- 气单胞菌二联灭活疫苗生产工艺的初步建立被引量：1
- 2012年
- 目的初步建立嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和温和气单胞菌(Aeromonas sobria)二联灭活疫苗的生产工艺。方法用50 L发酵罐培养嗜水气单胞菌和温和气单胞菌,确定发酵培养时间、甲醛灭活浓度及与佐剂乳化比例,对制备的疫苗进行质量检测,并分析佐剂与无佐剂二联灭活疫苗的免疫效果。结果 50 L发酵罐培养嗜水气单胞菌和温和气单胞菌菌株10～12 h时,A650值达峰值;0.3%的甲醛于37℃灭活24 h,可完全灭活菌液;以灭活菌液与佐剂1∶1.5比例混合较合适;制备的佐剂二联灭活疫苗各项质量指标均合格,免疫保护效果优于无佐剂二联灭活疫苗。结论已初步建立嗜水气单胞菌和温和气单胞菌二联灭活疫苗的生产工艺。
- 陶家发任燕罗霞赖迎迢康光辉张悠石存斌吴淑勤
- 关键词：嗜水气单胞菌温和气单胞菌灭活疫苗
- 鳜鱼脑部细胞培养研究
- 本文以本实验室建立的鳜鱼脑部细胞(CPB)系为实验材料,目的是比较该细胞在不同培养条件下的生长状况,通过筛选和优化该细胞培养各种条件,为后续工厂化大规模生产鳜鱼疫苗做基础.通过对不同培养基、不同血清浓度、不同PH值等培养...
- 赖迎迢付小哲陶家发张悠石存斌
- 关键词：鳜鱼病毒疫苗
- 弧菌福尔马林灭活条件的初步研究被引量：2
- 2011年
- 目的 初步研究弧菌福尔马林灭活条件,为弧菌灭活疫苗的生产工艺提供参数。方法对弧菌培养菌液添加不同浓度的福尔马林,于不同温度下测定灭活时间;采用摇瓶和发酵罐培养弧菌,在28℃比较灭活效果,并检测弧菌灭活疫苗原液的安全性。结果福尔马林对弧菌的最低抑菌浓度为0.025%,不同浓度的福尔马林及不同温度所需的灭活时间不同,福尔马林浓度越大,灭活时间越短,加热能缩短灭活时间。摇瓶和罐灭活效果检测显示,在28℃,0.3%的福尔马林24 h可完全灭活,弧菌二联灭活疫苗原液的安全性符合要求。结论 0.3%福尔马林在28℃灭活24 h,是比较理想的弧菌灭活方法。
- 陶家发赖迎迢任燕康光辉张悠石存斌吴淑勤
- 关键词：弧菌属福尔马林
- 弧菌菌株发酵工艺初步研究被引量：4
- 2011年
- 采用摇瓶培养和发酵罐培养并在不同培养时间测定菌液浊度和活菌数,为弧菌灭活疫苗生产工艺提供参数。研究结果表明,摇瓶培养装量以30%较为合适,培养基初始pH 7.5,发酵过程以不再控制为宜。初步确定了弧菌发酵培养工艺参数:弧菌菌株接种TSB,28℃摇瓶培养18～20 h,28℃种子罐通气搅拌培养12～14 h,28℃发酵罐通气搅拌培养12～14 h。
- 陶家发赖迎迢任燕康光辉张悠石存斌吴淑勤
- 关键词：弧菌生产工艺
- 海水鱼弧菌病二联灭活疫苗原液生产工艺研究
- 哈维氏弧菌SpGY020601株和溶藻弧菌EpGS021001株,采用振荡培养和发酵罐培养,测定不同培养时间的菌液浊度和活菌数,添加不同浓度的甲醛进行灭活检验。初步确定,振荡培养时,培养液18h后进入生长稳定期,20-2...
- 陶家发赖迎迢任燕康光辉张悠石存斌吴淑勤
- 关键词：弧菌灭活
- 文献传递
- 鳜致病性嗜水气单胞菌灭活疫苗原液生产工艺的建立被引量：5
- 2010年
- 目的建立鳜致病性嗜水气单胞菌灭活疫苗原液的生产工艺。方法分别采用摇瓶和5L发酵罐于28℃培养嗜水气单胞菌GYK1株,测定不同时间菌液的A650值;培养菌液添加不同浓度的甲醛液,检测不同时间的灭活效果;依次采用摇瓶、种子罐、发酵罐培养,甲醛灭活,制备灭活疫苗原液,并进行安全性和效力试验。结果摇瓶培养时,培养菌液18h进入生长稳定期,24h左右达高峰;用5L发酵罐培养时,培养菌液8h即进入生长稳定期,10h左右达高峰;0.30%的甲醛,37℃,24h可完全灭活菌液,且甲醛残留量较低;制备的灭活疫苗原液安全性良好,效力合格。结论初步建立了鳜致病性嗜水气单胞菌灭活疫苗原液的生产工艺。
- 陶家发赖迎迢任燕巩华康光辉张悠石存斌吴淑勤
- 关键词：嗜水气单胞菌生产工艺
