张海燕
- 作品数：4 被引量：113H指数：2
- 供职机构：扬州大学医学院更多>>
- 发文基金：国家科技型中小企业技术创新基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 一种鉴定MNSs红细胞血型单克隆抗体类型的方法的建立
- 2007年
- 为鉴定MNSs血型单克隆细胞株6D7C9分泌的抗体类型,通过克隆、亚克隆、细胞转染等分子生物学技术建立了血型糖蛋白GPA、GPB的异源表达系统,并将其作为抗原,通过ELISA、Western印迹法确定6D7C9分泌的McAb.结果显示,RT-PCR技术成功克隆获得了GPA、GPB血型糖蛋白编码基因,通过分别构建其重组逆转录病毒表达载体pEGZ/GPA及pEGZ/GPB,转染包装细胞293T,再感染L929细胞,经zeocin筛选2周后,RT-PCR及流式细胞仪分析证实,L929/GPA和L929/GPB转基因细胞中分别有GPA、GPB目的基因的转录和蛋白表达.用稳定高表达GPA、GPB的转基因细胞通过ELISA和Western印迹法证实单克隆细胞株6D7C9分泌的是抗GPA/GPBMcAb.本研究成功地建立了血型糖蛋白GPA、GPB的异源表达系统,为MNSs血型McAb的检测及GPA、GPB蛋白的功能学研究奠定了基础.
- 陈琦曹慧张海燕高晓飞李厚达
- 关键词：血型糖蛋白A单克隆抗体基因表达
- 人B-CAM/Lu基因逆转录病毒载体的构建及其在L929细胞中的表达
- 2007年
- 目的克隆人B-CAM/Lu基因,构建其逆转录病毒表达载体,获得稳定高表达B-CAM/Lu的L929细胞株。方法RT-PCR技术克隆人B-CAM/Lu基因,并插入逆转录病毒载体pEGZ中,该重组逆转录病毒载体与pH456、pH460两个辅助病毒载体一起,共转染包装细胞293T,并感染L929细胞,经Zeocin筛选获得的细胞株通过RT-PCR、Western blot及间接免疫荧光鉴定细胞中B-CAM/Lu基因mRNA的转录和蛋白表达。结果成功获得人B-CAM/Lu基因,测序正确,亚克隆至逆转录病毒载体pEGZ后,经转染筛选,获得的抗性L929细胞株通过RT-PCR和Western blot分析,检测到B-CAM/Lu mRNA的转录和目的蛋白的表达,通过间接免疫荧光确定该蛋白定位表达在L929转基因细胞膜上。结论成功克隆并构建了人B-CAM/Lu基因的重组逆转录病毒表达载体,获得稳定高表达B-CAM/Lu蛋白的L929细胞株,为将其作为免疫源,制备B-CAM/Lu单抗用于镰刀型红细胞病及一些肿瘤疾病的检测诊断打下了基础。
- 陈琦曹慧高哓飞张海燕王芬李厚达
- 关键词：L929逆转录病毒载体
- 水稻籽粒灌浆期间茎鞘贮存物质含量变化及其影响因素研究被引量：110
- 1994年
- 以库限制型水稻品种盐粳２３５和源限制型水稻品种汕优６３和亚优２号进行研究．水稻籽粒的灌浆因品种源库关系而有很大差异，剪叶或疏花对强势粒的灌浆影响不大，但显著地延经或加速弱势粒的灌浆进程．库限制型品种盐粳２３５抽穗前叶鞘和茎秆中临时性贮存物质积累高蜂出现早，单位库容上占有贮存性物质比例高；而源限制型品种汕优６３和亚优２号叶鞘和茎秆中临时性贮存物质积累高蜂出现迟，单位库容占有贮存性物质比例低．两类型品种茎鞘中贮存物质均在籽粒发育早期输出．但盐粳２３５的输出持续时间长于汕优６３和亚优２号的．疏花、剪叶和激素处理主要通过改变库源大小，增加或减少单位库容占有光合同化物比例及改变茎鞘贮存物质在整个籽和灌浆物质中的比例来影响籽粒生长和发育．还就茎鞘贮存物质在籽粒早期发育中的作用进行了讨论．
- 梁建生曹显祖张海燕宋平朱庆森
- 关键词：灌浆水稻
- Rh抗原Fab抗体库的构建与筛选被引量：3
- 2009年
- 目的:构建抗体库并筛选Rh抗原的Fab抗体。方法:收集5份血清中抗Rh抗体效价在1∶256～512的人淋巴细胞,提取RNA,用多对引物PCR扩增VH、Vκ、Vλ基因,并分别从pComb3xTT和pComb3xλ噬粒中扩增CH1、Cκ、Cλ,通过重叠PCR,构建重链Fd基因及完整的kappa、Lamda轻链,并进一步重叠PCR,获得Fab抗体片段。Fab经酶切、连接并电转化到噬菌体抗体表达载体pComb3xSS中,构建获得抗Rh的Fab抗体库,经4轮Rh(-)/Rh(+)红细胞阴/阳淘筛,获得的阳性克隆分别进行血凝试验、Western blot分析及测序鉴定。结果:构建获得总库容为7.4×106的Fab抗体库,并从中筛选得到1株能特异结合Rh抗原的Fab抗体。结论:应用基因工程抗体技术,成功获得了1株能与Rh(+)红细胞特异凝集的Fab抗体,为制备能用于临床的特异性强、效价高,并具有自主知识产权的Rh抗体打下基础。
- 陈琦张嘉敏张海燕朱自严李厚达
- 关键词：RH血型基因工程抗体噬菌体抗体库FAB
