徐耀瑜
- 作品数：15 被引量：43H指数：4
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- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省高校高新技术产业发展项目国家教育部博士点基金更多>>
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- 人CTLA-4基因转染细胞的构建及功能性单克隆抗体的研制
- 目的:构建含有人CTLA-4的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达CTLA-4基因的L929细胞,并研制鼠抗人CTLA-4功能性单克隆抗体。方法:从活化T细胞中用trizol法抽提总RNA,进一步用RT-PCR的方法扩增出C...
- 孙玮丽孙中文陈永井程钢徐耀瑜胡玲玲张学光邱玉华
- 关键词：CTLA-4基因转染细胞单克隆抗体
- 文献传递
- 抗人CD86嵌合抗体对B淋巴瘤细胞株Raji生长抑制及杀伤作用研究被引量：4
- 2009年
- 目的:研究CD86嵌合抗体ch1D1对天然高表达CD86分子的人恶性B淋巴瘤细胞株Raji增殖抑制及杀伤效应。方法:经流式细胞术检测ch1D1对Raji细胞表面CD86分子的识别;经ch1D1(终浓度10μg/ml)处理Raji细胞,MTT法检测对Raji细胞增殖的抑制效应;流式细胞术检测ch1D1诱导Raji细胞表面FasL及Fas的表达;MTT法检测ch1D1介导的外周血单个核细胞(PBMCs)对Raji为靶细胞的ADCC效应。结果:ch1D1可特异性识别Raji细胞表面CD86分子,阳性结合率为97.5%。ch1D1对Raji细胞增殖的抑制率为27.1%,较鼠源性亲本抗体1D1组(抑制率为38.8%)略下降,但两者统计学比较无差异(P>0.05)。与CD80嵌合抗体ch4E5联合应用抑制率可达56.3%,明显高于ch1D1单独作用的抑制率(P<0.05)。ch1D1作用4小时后,Raji细胞表达FasL水平开始升高,处理72小时阳性表达率为6.8%,较亲本抗体1D1组(阳性表达率3.2%)升高,但统计学比较无显著差异(P>0.05);经ch1D1作用24小时,Raji细胞Fas表达水平开始上调,阳性率为6.1%,较1D1组(阳性表达率4.8%)升高,但无统计学差异(P>0.05)。与ch4E5联合应用均较ch1D1单独作用Fas及FasL的表达水平升高,但统计学比较仍无显著差异(P>0.05)。经ch1D1处理4、24、48、72小时,介导PBMC对Raji细胞杀伤率分别为25.0%、52.0%、71.3%、72.7%,与人IgG1及鼠源亲本抗体对照组相比均明显升高,具有显著差异(P<0.05)。结论:抗人CD86嵌合抗体可抑制高表达CD86分子的肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡,与嵌合抗体Fc段介导的ADCC效应具有协同抗肿瘤作用。
- 刘玉华孙杰胡玲玲王艳茹马鸿冰程钢徐耀瑜杜阳阳陈明心邱玉华
- 关键词：CD86嵌合抗体淋巴瘤凋亡ADCC效应
- 强直性脊柱炎可溶性CD28／CD80／CD86／CD152的表达被引量：1
- 2012年
- 强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一种自身免疫功能紊乱，HLA—B27表达增高的慢性炎症疾病，协同共刺激免疫分子失调是其主要诱因。本文应用酶联免疫吸附试验（ELISA）和补体依赖的微量淋巴细胞毒试验（MLCT）研究强直性脊柱炎患者外周血清中可溶性CD28／CD80／CD86／CD152的表达。
- 徐耀瑜李艳霞刘舒扬孟保福张延林宋红林屈晓东董志鹏孙静美位冒冒
- 关键词：强直性脊柱炎CD152微量淋巴细胞毒试验自身免疫功能紊乱慢性炎症疾病
- GL50／ICOS在活化T细胞上的共表达及其生物学意义
- 目的:探讨GL50／ICOS在活化T细胞上的共表达及其生物学意义。方法:利用科室成功研制的阻断性GL50单抗(已被澳大利亚第八届白细胞分化抗原大会命名)的基础上,采用激发型anti-CD3联合anti-CD28、自体DC...
- 孙中文邱玉华王凤鸣孙玮丽程钢徐耀瑜胡玲玲张学光
- 关键词：活化T细胞共表达生物学意义
- 文献传递
- 抗人CD28鼠-人嵌合抗体的构建及瞬时表达被引量：2
- 2007年
- 目的构建及瞬时表达抗人CD28鼠-人嵌合抗体。方法采用基因工程技术,从分泌鼠抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:2F5)中克隆出抗体重链和轻链可变区基因及相应信号肽编码序列。分别与人免疫球蛋白IgG1恒定区重、轻链基因拼接,构建含有重组基因的pIRES表达质粒pIRES/h2F5。转染293T细胞并用抗性药物G418选择培养。采用流式细胞术,检测瞬时转染细胞后嵌合抗体的表达情况。结果抗人CD28鼠人嵌合抗体得到表达并能与CD28分子特异性结合。结论抗人CD28鼠-人嵌合抗体的构建和瞬时表达是成功的,为后续构建稳定分泌抗人CD28鼠-人嵌合抗体的CHO基因转染细胞株奠定了基础。
- 程钢陈永井马震宇费敏孙中文徐耀瑜胡玲玲邱玉华
- 关键词：CD28单克隆抗体嵌合抗体
- CD80鼠-人嵌合抗体的CHO细胞表达及体外生物学功能的初步研究被引量：12
- 2009年
- 目的:CHO细胞表达抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,并研究其在体外阻断CD80介导的共刺激信号转导的生物学功能。方法:构建含有嵌合重、轻链基因的表达载体pIRES/ch4E5;表达载体先转染293T细胞,FCM检测到ch4E5抗体的瞬时表达后,表达载体再转染CHO细胞,构建稳定表达细胞株CHO-ch4E5;ProteinG亲和层析法从CHO-ch4E5细胞无血清培养上清中纯化ch4E5抗体,FCM检测ch4E5抗体对膜型CD80的识别;以丝裂霉素处理的正常人外周血单核细胞PBMCs为刺激细胞,以异体正常人外周血淋巴细胞PBLs为反应细胞,用MTT法分析ch4E5抗体的阻断作用。结果:ch4E5抗体在293T细胞的瞬时表达于48小时达到高峰,上清与L929-B7-1细胞结合率为96.0%;CHO-ch4E5细胞持续表达ch4E5抗体,其培养上清与L929-B7-1细胞结合率为95.7%;3天培养上清中,ch4E5抗体的产率约为5.56mg/L;ch4E5抗体和L929-B7-1、Daudi、Sub-T细胞结合率分别为94.1%、25.7%、23.5%;ch4E5抗体可以阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制异体PBLs的体外增殖。结论:在CHO细胞中成功表达了抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,在体外该嵌合抗体具有亲本抗体阻断CD80介导的共刺激信号的生物学活性。
- 徐耀瑜胡玲玲陈永井程钢罗先富孙杰刘玉华王艳茹陈明心邱玉华
- 关键词：CD80嵌合抗体阻断作用
- 抗人CD28鼠-人嵌合抗体的构建及表达
- 目的:构建抗人CD28鼠-人嵌合抗体基因,用293T细胞瞬时表达并对表达产物进行鉴。方法:从分泌鼠抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2F5)中提取总RNA,通过RT-PCR技术克隆该抗体VH和VL的编码区基因序列,根...
- 程钢陈永井孙中文马震宇徐耀瑜胡玲玲张学光邱玉华
- 关键词：CD28嵌合抗体突变
- 文献传递
- 人CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及初步功能研究被引量：5
- 2010年
- 目的:构建含有人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3,研究CXCR3与其配体Mig、IP-10及I-TAC相互作用引起的L929-CXCR3的迁移效应。方法:TRIzol一步法从经PHA和IL-2活化的人PBMC中抽提总RNA,RT-PCR扩增人CXCR3全长基因,装入逆转录病毒载体pEGZ-term,与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,收集培养上清感染L929细胞,500μg/mlzeocin加压筛选获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3。采用流式细胞术和RT-PCR分别从蛋白及基因水平对CXCR3的表达进行鉴定。Transwell分析L929-CXCR3细胞在Mig、IP-10及I-TAC作用下的迁移率。结果:构建了含人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,建立了人CXCR3基因转染细胞株L929-CXCR3,其膜表面CXCR3分子的阳性表达率为98.4%;趋化L929-CXCR3发生迁移的最小配体浓度分别为Mig10ng/ml、IP-105ng/ml及I-TAC1ng/ml,相应迁移率分别为2.46%、2.34%及2.24%。结论:L929-CXCR3细胞株的建立为研究CXCR3信号转导与生物学功能及制备相应的单克隆抗体奠定了基础。
- 孙杰刘玉华陈永井郭静雅陈昌友胡玲玲陈明心杜阳阳徐耀瑜邱玉华
- 关键词：CXCR3趋化因子基因转染逆转录病毒
- B7嵌合抗体对强直性脊柱炎中单个核细胞的作用被引量：1
- 2014年
- 目的研究B7嵌合抗体对强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）中单个核细胞的作用。方法AS单个核细胞培养体系中，分别加入终浓度为5μg／ml的ch4E5和ch1D1抗体，补体依赖的细胞毒性试验（MLCT）观察单个核细胞死亡得分的组间差异，流式细胞术（FCM）分析其膜型分子表达变化，ELISA检测其分泌细胞因子的情况。结果MLCT中嵌合抗体组低于AS组得分（P〈0．01），FCM检测嵌合抗体组较AS组CD4／CD8比值下降（P〈0．05），CD154表达下降（P〈0．01），CD4^＋CD25^high调节性T淋巴细胞增多（P〈0．01），加入嵌合抗体的单个核细胞培养体系分泌IL-2和TNF-α减少（P〈0．05），IL-4和TGF-β升高（P〈0．02）。结论B7嵌合抗体通过作用B7／CD28及CD40／CD154信号通路，改变AS中单个核细胞一些表面分子的表达和细胞因子的分泌，最终影响单个核细胞。
- 徐耀瑜位冒冒
- 关键词：嵌合抗体B7强直性脊柱炎
- 转染人CTLA-4细胞的对树突状细胞B7分子表达的影响被引量：1
- 2007年
- 从PHA活化的人外周血T细胞中抽提总RNA,经RT-PCR扩增出CTLA-4的全长基因,构建逆转录病毒载体pEGZ-Term/CTLA-4,经PCR及电泳鉴定后感染包装细胞293T。收集培养上清感染L929细胞。用Zeocin选择培养。经免疫荧光及流式细胞术进行筛选,获取稳定表达CTLA-4分子的细胞株CTLA-4/L929。将CTLA-4/L929经丝裂霉素处理后与体外细胞因子诱导的树突状细胞共同孵育。分别于24、48及72h,用直接免疫荧光法和流式细胞术分析树突状细胞B7-1和B7-2分子的表达。研究结果显示,构建的重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/CTLA-4的PCR产物长约700 bp,与人CTLA-4基因的长度一致。经Zeocin选择及多次亚克隆化培养,CTLA-4基因转染细胞CTLA-4/L929稳定表达膜型CTLA-4分子。以其为刺激细胞与树突状细胞共同培养后,可明显下调树突状细胞B7-1的表达,但对B7-2的表达没有影响。本研究获得的CTLA-4基因转染细胞株,为进一步探讨CTLA-4及其配基分子在免疫应答中的作用与机制提供了手段。
- 孙玮丽陈永井孙中文徐耀瑜胡玲玲张学光邱玉华
- 关键词：CTLA-4B7基因转染共刺激分子树突状细胞
