戴晓春
- 作品数：21 被引量：9H指数：2
- 供职机构：温州医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：温州市科技计划项目国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
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- 大鼠SLC7a8基因的克隆及真核表达载体的构建
- 杨德业王本极黄晓燕林素周希戴晓春
- Pax-8基因干扰后线粒体功能在心肌细胞凋亡中的作用
- 戴晓春杨德业
- 大鼠SLC7a8基因的克隆及真核表达载体的构建
- 目的克隆大鼠左旋氨基酸转运体（SLC7a8）基因cDNA的读码框（CDS）,构建携带SLC7a8基因的重组真核表达载体,为进一步研究其在自发性高血压大鼠（SHR）中的功能作准备。方法从WKY大鼠肾脏组织提取总RNA,通过...
- 杨德业王本极黄晓燕林素周希戴晓春
- 文献传递
- 转录因子Pax-8基因干扰后线粒体功能对心肌细胞凋亡的影响被引量：2
- 2013年
- 目的采用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达，引起线粒体功能的变化，借此探讨线粒体对心肌细胞凋亡的影响。方法将H9C2（2-1）大鼠胚胎心肌细胞分为3组：实验组[针对Pax-8基因的小干扰RNA（Pax-8siRNA）组]，阴性对照组[非特异性siRNA（NCsiRNA）组]和空白对照组（BCsiRNA组）。荧光分光光度法检测半胱天冬酶（caspase-3）活性以反映细胞凋亡，RT—PCR测定B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcelllymphoma／lewkmia-2，Bcl2）和其同源类似物Bax的mRNA表达，Westernblot测定Bcl2、Bax和胞浆细胞色素C（Cyto）的蛋白表达，流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位（△咿m，用JC-1单体／聚合物比值来衡量线粒体去极化的比例，比值越大，△ψm越低）。结果Pax-8siRNA组心肌细胞caspase-3活性（0．167±0．012）明显高于NCsiRNA组（0．075±0．021）和BCsiRNA组（0．072±0．019），P均〈0．05。Pax-8siRNA组Bcl，mRNA和蛋白的表达水平（分别为0．61±0．06和0．94±0．11）明显低于NCsiRNA组（分别为0．90±0．070和1．39±0．15）和BCsiRNA组（分别为0．94±0．09和1．49±0．20），P均〈0．05。Pax-8siRNA组BaxmRNA和蛋白表达水平（分别为1．05±0．10和1．25±0．12）明显高于NCsiRNA组（分别为0．72±0．03和0．99±0．12）和BCsiRNA组（分别为0．64±0．03和0．92±0．06），P均〈0．05。Pax-8siRNA组心肌细胞线粒体释放Cyto至胞浆的量（0．75±0．14）明显高于NCsiRNA组（0．51±0．06）和BCsiRNA组（0．48±0．07），P均〈0．05。Pax-8siRNA组JC-1单体／聚合物比值（0．163±0．011）明显高于NCsiRNA组（0．092±0．015）和BCsiRNA组（0．072±0．025），P均〈0．05，提示Aqtm明显低于NCsiRNA组和BCsiRNA组（P均〈0．05）。NCsiRNA组与BCsiRNA组上述指标比较，差异均无统计学意义。结论Pax-8基因干扰心肌细胞，促进了心肌细胞的凋亡，线粒体参与了心肌�
- 戴晓春周希黄晓燕王良国林素杨德业
- 关键词：肌细胞细胞凋亡线粒体转录因子
- 血管内皮生长因子对内皮生长晕细胞冻存后复苏率及增殖、迁移能力的影响被引量：2
- 2012年
- 目的研究血管内皮生长因子对冻存后内皮生长晕细胞复苏率及其增殖、迁移能力的影响。方法密度梯度离心法分离脐带血中单个核细胞,体外扩增培养内皮生长晕细胞,免疫组织化学法、荧光染色法鉴定内皮细胞特性。分别采用不含血管内皮生长因子和含50μg/L血管内皮生长因子的冻存液对内皮生长晕细胞进行冻存,分为正常组、对照组、50μg/L血管内皮生长因子组,24 h后复苏并观察细胞的复苏率及其增殖、迁移能力。结果50μg/L血管内皮生长因子组可提高冻存复苏后内皮生长晕细胞的复苏率。24 h内两组细胞增殖、迁移能力均较正常组减弱(P<0.01),但50μg/L血管内皮生长因子组显示对内皮生长晕细胞增殖、迁移能力的保护作用。48 h后50μg/L血管内皮生长因子组细胞迁移能力较正常组增强(P<0.01),增殖能力接近正常组(P>0.05),但对照组在观察期间内细胞增殖和迁移能力均较正常组与50μg/L血管内皮生长因子组减弱(P<0.01)。结论血管内皮生长因子可以提高冻存后内皮生长晕细胞的复苏率以及复苏后细胞的增殖、迁移能力。
- 张艳丽张怀勤林以诺吴高俊戴晓春王超群
- 关键词：血管内皮生长因子冻存
- Pax-8在ALK3基因敲除小鼠心脏发育不同阶段中的表达
- 杨德业周希黄晓燕褚茂平高瞻戴晓春
- microRNA-29b在血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用被引量：4
- 2013年
- 目的:研究microRNA-29b(miR-29b)在血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的角色。方法:实时定量PCR检测自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)和Wistar-Kyoto(WKY)大鼠肾脏皮质组织miR-29b表达的差异。体外培养NRK-52E大鼠肾小管上皮细胞,给予血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)10-7mol/L(为Ang Ⅱ组),以正常培养的细胞作空白对照,实时定量PCR检测Ang Ⅱ组和正常对照组细胞miR-29b表达差异,运用WesternBolt技术和实时定量PCR技术分别检测Ang Ⅱ组和空白对照组TGF-β、α肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原蛋白(Col Ⅰ)的表达量。进一步分别再转染miR-29b inhibitor和miR-29b mimics,建立miR-29b低表达和高表达细胞模型。低表达模型实验分三组:①空白对照组:正常培养的肾小管上皮细胞未经任何处理;②低表达组:转染miR-29b inhibitor;③阴性对照组:转染随机合成NC microRNA片段。高表达模型实验分三组:①空白对照组:肾小管上皮细胞给予Ang Ⅱ(10-7mol/L)诱导;②高表达组:肾小管上皮细胞给予Ang Ⅱ(10-7mol/L)诱导,同时转染miR-29b mimcs;③阴性对照组:肾小管上皮细胞给予Ang Ⅱ(10-7mol/L)诱导,同时转染随机合成NC microRNA片段。用流式细胞仪技术检测转染率,用实时定量PCR检测转染效果,运用Western Bolt技术和实时定量PCR技术分别检测各组中TGF-β、α-SMA和Col Ⅰ的表达量。结果:实时定量PCR检测SHR大鼠肾脏皮质组织miR-29b的表达(0.76±0.01)相比WKY大鼠(1.00±0.00)下降(P<0.05),相比空白对照组(1.00±0.00),Ang Ⅱ组miR-29b的表达(0.56±0.06)明显下降(P<0.05),TGF-β、α-SMA、Col Ⅰ的mRNA表达和蛋白表达明显升高(P<0.05)。流式细胞仪技术检测NRK-52E细胞转染率为95.14%,相比空白对照组(1.00±0.00),低表达组miR-29b表达(0.07±0.02)明显下降,高表达组miR-29b表达(38.3±8.1)明显升高(P<0.05)。在低表达模型实验中,低表达组α-SMA、TGF
- 潘嘉林黄晓燕邵驾宇王本极林素王良国戴晓春杨德业
- 关键词：自发性高血压大鼠肾小管上皮细胞
- Pax-8基因抑制后心肌细胞中UCP2的表达
- 2012年
- 目的:建立Pax-8基因敲除模型及Pax-8基因的体外干扰实验,探索心肌细胞中Pax-8基因抑制后解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)基因表达的变化。方法:Pax-8基因敲除纯合子小鼠(Pax-8 KO-/-)为实验组,Pax-8基因敲除小鼠杂合子(Pax-8 KO+/-)和野生型(Pax-8 KO+/+)为对照组;同时在体外实验的大鼠心肌细胞株中,加入Pax-8基因的小干扰RNA(Pax-8 siRNA)为实验组,非特异性siRNA(NC siRNA)组和空白组为对照组。采用RT-PCR和Western blotting技术测定UCP2的mRNA和蛋白质表达。结果:在Pax-8基因敲除动物模型中,与Pax-8基因敲除小鼠杂合子组和野生型组相比,实验组Pax-8基因敲除小鼠纯合子心脏组织UCP2的mRNA和蛋白表达均上调(P<0.05),而对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);在体外干扰实验中的结果显示,与NC siRNA组和空白对照组比较,Pax-8 siRNA组UCP2的mRNA表达和蛋白表达均上调(P<0.05),而NC siRNA组与空白对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Pax-8基因被抑制后,心肌细胞凋亡增加,UCP2基因表达上调,提示UCP2参与了心肌细胞凋亡的调控。
- 戴晓春黄晓燕周希高瞻王本极张艳丽杨德业
- 关键词：解偶联蛋白2心肌细胞凋亡基因敲除小鼠
- 线粒体功能在Pax-8基因干扰心肌细胞凋亡中的作用
- 杨德业戴晓春黄晓燕周希高瞻王本极
- Pax-8在ALK3基因敲除小鼠心脏发育不同阶段中的表达
- 目的研究胚胎发育不同时间心脏特异性骨形态形成蛋白受体IA(BMPR1 A,又名AL K3)基因敲除小鼠心肌组织中的Pax-8的mRNA表达水平,提示Pax-8基因与ALK3基因的关系及其在心脏发育中的作用。方法实验组为心...
- 杨德业周希黄晓燕褚茂平高瞻戴晓春
- 文献传递
