曾贵利
- 作品数：7 被引量：13H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU对PKR磷酸化的调节作用被引量：1
- 2010年
- 目的研究ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子对RNA聚合酶Ⅱ转录的影响,探讨RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU对PKR磷酸化的调节作用。方法将ALU全基因序列插入pcDNA3.1(-)载体的CMV启动子(一个RNA聚合酶Ⅱ启动子)的下游,构建重组质粒pcDNA3.1-ALU;转染HEK293细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR筛选稳定表达ALU的细胞;用干扰素处理稳定表达ALU序列的细胞,Western blot法检测PKR的磷酸化水平。结果ALU全基因序列插入pcDNA3.1载体的CMV启动子直接下游,能够被RNA聚合酶Ⅱ有效转录;在稳定表达ALU的HEK293细胞中,加干扰素与未加干扰素组PKR的磷酸化水平均明显高于相应的HEK293细胞对照组。结论ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子对RNA聚合酶Ⅱ转录无明显影响,但与RNA聚合酶Ⅲ启动下转录的ALU不同,RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU失去了对干扰素的拮抗作用,反而可以通过形成双链RNA的方式激活PKR的活性。
- 杨梅沈薇吴进峰曾贵利王峰任红唐开福
- 关键词：磷酸化干扰素
- 抑制乳腺癌耐药蛋白基因逆转肝癌多药耐药的体内实验被引量：2
- 2009年
- 目的探讨小片段RNA干扰抑制乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因及其蛋白表达在裸鼠体内逆转人肝癌组织多药耐药(MDR)的可行性。方法建立裸鼠多药耐药肝细胞癌模型,随机分为A组和B组,A组(对照)注射生理盐水40μl+Lipo-fectamine200010μl,B组注射BCRP基因RNAi质粒pSUPER-BCRP40μl+Lipofectamine200010μl,两组均行瘤内注射1次。5d后,各组均经腹腔注射阿霉素5mg/kg化疗,每5d给药1次,共4次。彩色B超测量肿瘤体积;化疗结束后1周处死裸鼠,RT-PCR及Westernblot法检测各组裸鼠肿瘤组织中BCRP基因mRNA的转录水平及其蛋白的表达水平。结果B组每次化疗后肿瘤体积均明显缩小;除第1次化疗外,其余各次化疗后肿瘤体积均小于A组;化疗结束后,B组与A组相比,肿瘤组织中BCRP基因mRNA的转录水平和BCRP蛋白的表达水平均明显降低。结论BCRP基因RNAi质粒pSUPER-BCRP可有效降低裸鼠肝癌组织BCRP基因mRNA的转录水平及其蛋白的表达水平,在一定程度上逆转MDR,为从基因水平逆转MDR提供了初步的实验依据。
- 李涛曾贵利陈勇余少红王晓波龚建平
- 关键词：乳腺癌耐药蛋白多药耐药RNA干扰裸鼠
- 脱氧氮杂胞苷诱导HepG2细胞表达主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A被引量：1
- 2009年
- 目的观察主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A（MICA）在HepG2与L02细胞株中表达的差异及脱氧氮杂胞苷（5-aza-dC）对HepG2细胞株MICA表达的影响，探讨毛细血管扩张眭共济失调突变蛋白（ATM）依赖的DNA损伤途径与5-aza-dC调节MICA表达的关系。方法同时接种并培养L02和HeDG2细胞，在同一时间点收取细胞，流式细胞仪检测细胞膜MICA蛋白表达水平；不同浓度5-aza—dC（0．1、1．0、5．0mmol／L）作用于HepG2细胞不同时间（24、48、72、96h）后，定量PCR检测MICA mRNA水平以寻找5-aza-dC最佳作用浓度和时间；ATM特异性抑制剂咖啡因或RNA干扰技术干扰ATM表达，定量PCR检测细胞mRNA水平，流式细胞术检测细胞膜MICA蛋白表达水平。结果数据比较采用Kruskal-Wallis和Mean-Whitney U方差分析。结果流式细胞结果显示，HepG2细胞高水平表达MICA，而正常肝细胞L02几乎不表达MICA；5-aza—dC处理可上调HepG2细胞MICA的表达（x^2=7．20，P〈0．05），这种上调作用可被ATM特异性阻滞剂咖啡因和ATM特异的小分子干扰RNA所阻断（U=0．00，P〈0．05）。结论MICA在正常肝细胞株中无表达，在肝癌细胞株中高表达；5-aza-dC可诱导HepG2细胞MICA的表达，其机制可能与5-aza-dC引起的ATM依赖的DNA损伤途径有关。
- 吴进峰曾贵利沈薇杨梅王峰田绿李璇胡文艳李小平任红唐开福
- 关键词：DNA损伤主要组织相容性复合物脱氧胞苷
- 红景天甙对HSC-T6细胞株Rho／ROCK信号通路影响的研究被引量：3
- 2009年
- 目的:观察红景天甙对大鼠肝星状细胞株HSC-T6细胞增殖活化、胶原合成、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶-Ⅰ(Rhoassociated coiled coil forming protein kinase-Ⅰ,ROCK-Ⅰ)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(Tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1)表达的影响并以ROCK特异性抑制剂Y-27632作为阳性对照,探讨红景天甙抗肝纤维化作用的分子机制。方法:MTT法检测HSC-T6细胞生长增殖;酶联免疫吸附(ELISA)法检测HSC-T6细胞上清Ⅰ型胶原含量;实时荧光定量PCR(Re-al-time PCR)检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(Alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、ROCK-Ⅰ、TIMP-1mRNA的表达;Western blot检测细胞α-SMA、ROCK-Ⅰ、TIMP-1蛋白表达.结果:MTT检测显示红景天甙和Y-27632对HSC-T6细胞的生长增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖性;ELISA结果提示红景天甙和Y-27632可抑制HSC-T6细胞Ⅰ型胶原的分泌;Real-time PCR和West-ern blot结果表明红景天甙和Y-27632均能下调HSC-T6细胞ROCK-Ⅰ、TIMP-1和α-SMA的表达。结论:红景天甙可抑制HSC-T6细胞活化增殖,减少其Ⅰ型胶原分泌,其机制可能与抑制HSC-T6细胞的Rho/ROCK信号通路有关。
- 吴进峰沈薇曾贵利曾维政左国庆
- 关键词：红景天甙肝星状细胞
- 肝癌细胞HepG2间的P-糖蛋白传递作用被引量：2
- 2009年
- 目的探讨肝癌细胞株HepG2细胞间是否存在P-糖蛋白（P—gp）的传递及P—gp与多药耐药基因（mdr1）的关系。方法将pSUPER．neo＋GFP质粒转染至HepG2细胞（命名为HepG2／GFP），并与阿霉素耐药HepG2细胞（命名为HepG2／ADM）混合培养。激光共聚焦显微镜观察肝癌细胞间P-gp的传递。免疫磁珠法分离混合培养细胞，收集原HepG2／GFP细胞（命名为HepG2／aqMDR），采用Western blot分析HepG2、HepG2／ADM、HepG2／GFP、HepG2／aqMDR细胞的P—gp表达水平，同时应用实时荧光定量PCR分析这些细胞mdr1 mRNA的表达水平。多样本均数比较用单因素方差分析，进一步两两比较用SNK—q检验。结果荧光显微镜下可见大量带绿色荧光的稳定克隆。激光共聚焦显微镜下见HepG2／aqMDR细胞以黄色荧光为主，而HepG2／GFP以绿色荧光为主，HepG2／ADM以红色荧光为主。Western blot检测结果显示HepG2／aqMDR细胞中P—gp表达水平低于HepG2／ADM，但明显高于HepG2／GFP（q=35．07，P〈0．05）与HepG2（q=36．87，P〈0．05）。实时荧光定量PCR结果显示，HepG2／ADM细胞中mdr1 mRNA表达水平较高，而HepG2／aqMDR、HepG2、HepG2／GFP三组细胞中mdr1的mRNA表达水平差异没有统计学意义（F=2．30，P〉0．05）。结论P—gp可以从耐药肝癌细胞传递至敏感肝癌细胞，这一现象为进一步研究肝癌多药耐药机制提供了新的思路。
- 陈龙左国庆吴进峰曾贵利李涛刘作金唐开福
- 关键词：P糖蛋白
- 应用RNAi文库筛选HBV复制相关基因被引量：3
- 2008年
- 深入研究HBV复制机理,筛选参与HBV复制的基因,可能为开发抗乙肝病毒新药提供新的靶点.本文拟建立一种筛选HBV复制相关基因的方法:RNAi文库感染HepG2.2.15细胞后,利用免疫磁珠收集HBsAg表达降低的细胞,提取DNA,PCR扩增siRNA编码序列,将PCR产物克隆入T-easy载体,随机挑选克隆测序,发现DDB1基因可能参与HBV复制.本试验建立了一种筛选HBV复制相关基因的方法,为大规模全基因组筛选参与HBV复制的基因奠定了基础.
- 曾贵利沈薇吴进峰任红孙航贺彩霞唐开福
- 抑制BCRP表达逆转肝细胞癌MDR的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:研究小片段RNA干扰对肝癌耐药细胞系HEPG2/ADM中BCRP基因及其蛋白产物BCRP表达的抑制作用和逆转其耐药性的效果.方法:构建针对BCRP基因pSUPER-RNAi质粒,转染肝癌耐药细胞HEPG2/ADM.通过RT-PCR和Western Blot在mRNA和蛋白水平评价RNAi对BCRP表达的影响.MTT法检测RNAi逆转HEPG2/ADM细胞耐药性的效果,按实验组和对照组细胞的半数抑制剂量(IC50)计算RNAi对各种细胞耐药倍数的改变.结果:在耐药肝癌细胞HEPG2/ADM中,RNAi明显抑制了BCRP mRNA和蛋白产物BCRP的表达水平,其表达仅为对照组细胞的22.55%和37.49%(P<0.01).在相同浓度化疗药物的作用下,RNAi组HEPG2/ADM细胞耐药性显著下降,对ADM的耐药逆转倍数为3.55倍.结论:针对多药耐药基因BCRP,RNAi具有强大的逆转肝癌耐药细胞HepG2多药耐药的作用.为从基因水平逆转MDR展示了良好的前景.
- 李涛曾贵利陈龙吴进峰陈勇余少红王晓波龚建平
- 关键词：多药乳腺癌耐药蛋白RNA干扰肝细胞
