朱咏华
- 作品数：26 被引量：125H指数：7
- 供职机构：湖南大学生物学院更多>>
- 发文基金：湖南省科技计划项目国家自然科学基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学理学环境科学与工程更多>>
- 一种简单高效的水稻体细胞诱变育种新方法被引量：2
- 2013年
- 多样化种质资源的利用对于培育高产和理想农艺性状水稻品种显得非常重要.在本研究中,通过研究继代时间、2,4-D浓度和不同外植体对诱变和分化频率的影响,建立了幼穗为外植体、继代培养时间为3个周期(约75d)以及2,4-D的最佳诱变浓度为4.0mg/L的体细胞诱变育种方法.然后利用该方法诱变杂交水稻亲本株1S和中9B,分别成功选育了优良矮化突变株系SV14S和SV9B,为后续的杂交育种提供了优质种质资源.这些育种成果的取得进一步证实了该水稻体细胞诱变育种方法是一种简单高效的新型育种方法.
- 林建中杨远柱周波符辰建杜长青胡小淳唐冬英赵小英史江伟朱咏华刘选明
- 关键词：SATIVA育种
- 根癌农杆菌介导的丝状真菌简青霉遗传转化的研究被引量：4
- 2010年
- 利用根癌农杆菌LBA4404介导,建立了丝状真菌简青霉(Penicillium simpli-cissimum)H5的遗传转化系统.潮霉素抗性筛选、PCR和Southern blot分子鉴定等结果表明:筛选获得的转化子能够稳定遗传,外源的T-DNA以单拷贝随机整合到简青霉的基因组中.实验初步研究了农杆菌浓度、乙酰丁香酮浓度和共培养时间等因素对转化效率的影响,经过优化后转化体系的效率可达50个转化子/105个孢子.农杆菌介导的遗传转化方法在简青霉上的运用,将为研究该菌的基因工程改造提供强有力的工具.
- 朱咏华吴康郑芒靳冉廖红东刘选明
- 关键词：根癌农杆菌简青霉
- 金针菇谷氨酸脱氢酶基因的克隆及原核表达被引量：2
- 2013年
- 利用简并引物和RT-PCR方法从金针菇(Flammulina velutipes)幼嫩子实体中克隆获得FvGDH全长cDNA序列.构建入门载体pGWC-FvGDH,利用Gateway克隆技术的LR反应构建原核重组表达载体pDESTl7-FvGDH,转化大肠杆菌BL21(DE3).通过IPTG法诱导表达融合蛋白并进行表达条件优化.SDS-PAGE蛋白电泳分析表明,融合蛋白相对分子质量约为53 kD,与预测的一致.最佳表达条件为温度30℃、IPTG浓度0.4mmol/L、诱导4 h.融合蛋白表达量较高,实现了FvGDH的高效表达,并利用Western blotting对其特异性进行鉴定.FvGDH基因高效原核表达体系的成功建立,为进一步研究FvGDH的酶促动力学奠定了基础.
- 李磊杨远柱刘泓杜长青林建中朱咏华刘选明
- 关键词：原核表达SDS-PAGEWESTERNBLOTTING
- Mn^(2+)驱动的不同长度DNA片段PCR随机突变研究被引量：2
- 2013年
- 针对倾向错误的PCR技术中不同目的、不同长度基因的诱变种类一直缺乏准确参考的问题,以酵母spt15基因为研究对象,在标准的PCR反应体系中加入不同Mn2+摩尔浓度(0.125,0.250和0.500mmol.L-1)进行倾向错误的PCR,扩增spt15不同长度(分别约为200,500和700bp)的DNA片段,研究其突变频率,突变碱基数目及突变类型,以分析不同种类的突变所需的最佳条件.研究结果表明:长片段DNA的PCR突变率对Mn2+摩尔浓度更敏感;模板的长度对DNA PCR突变碱基个数也有较为明显的影响,低Mn2+摩尔浓度有利于单突变;Mn2+驱动的突变有明显的倾向性,其中A→G和T→C的突变居多.
- 廖红东陆剑刘选明王磊朱咏华
- 关键词：突变锰离子DNA片段
- 基于聚乙烯醇/Fe_2O_3纳米颗粒的纤维素酶固定化被引量：13
- 2008年
- 以聚乙烯醇/Fe2O3磁性纳米颗粒为纤维素酶固定化载体,通过反复冻融的方法成功地实现了纤维素酶固定化.采用透射电镜、红外光谱仪、振动样品磁强度计对固定化酶复合体进行了表征,结果显示,固定化酶复合体为大小约1μm的微凝胶团,内含10nm左右的Fe2O3纳米颗粒.研究影响固定化因素后发现,当pH为6,固定化时间为11h,纤维素酶/PVA质量比为4,PVA/Fe质量比为50时,固定化纤维素酶效果最好.通过该方法固定后酶活回收率达42%,酶水解效率显著提高,经过5次反应后的固定化酶相对酶活力保留50%以上.因此,基于聚乙烯醇/Fe2O3纳米颗粒的纤维素酶固定有利于酶的循环使用并显著提高酶的使用效率,是一种有效固定化纤维素酶的新方法.
- 廖红东袁丽童春义朱咏华李杜刘选明
- 关键词：纤维素酶固定化聚乙烯醇
- 利用TAP标记分析酵母糖基磷脂酰肌醇转酰胺基酶复合物
- 2006年
- 糖基磷脂酰肌醇(GPI)转酰胺基酶复合物将GPI脂连接到新合成的蛋白质上,在酵母中包括GAA1,GPI8,GPI16,GPI17,CDC91五种亚基,皆为必需基因.采用含TAP标记转酰胺基酶亚基的酵母细胞株,利用TAP法在自然状态下提取、纯化分离蛋白复合物的优势,鉴定与靶蛋白相关联的蛋白.对Gp i8p,Gp i16p,Gp i17p进行了研究.实验结果表明,酵母只含一个拷贝的Gp i8p,Gp i16p,Gp i17p亚基,为进一步研究转酰胺基酶复合物的功能和作用机制提供了线索.
- 朱咏华赵李剑唐冬英
- 关键词：复合物
- 野葛地上部分用于生产燃料乙醇相关的各项成分检测与分析
- 2009年
- 通过测定野葛地上部分不同生长年限不同部位的纤维素、木质素、半纤维素、可溶性总糖含量,为合理开发葛属植物资源,如生产燃料乙醇等提供依据.分别采用酸解法利用FIWE3/6纤维素测定仪测量野葛地上部分不同部位的纤维素、木质素含量,盐酸水解法测定半纤维素含量,蒽酮比色法测定可溶性总糖含量.采用稻草和象草为对照.结果显示,野葛两年以上生藤茎中纤维素、木质素、可溶性总糖含量最高,分别为27.89%、23.43%和31.63%,两年以上生整株中半纤维素含量最高,为10.71%.相对于稻草和象草,野葛地上部分的可溶性糖含量很高.因此可利用两年以上生藤茎或整个地上部分为原料生产燃料乙醇,对全面开发利用野葛资源有积极的意义.
- 卢曼曼刘曙光王会朱咏华刘选明
- 关键词：野葛纤维素木质素半纤维素可溶性总糖
- 水稻内生放线菌OsiRt-1的分离鉴定及对稻瘟病的防治作用被引量：24
- 2016年
- 【目的】从水稻中分离、筛选并鉴定出对稻瘟病真菌具有拮抗性能的内生放线菌,对高抗菌株进行稻瘟病生防效果评定,初步探讨其作用机制。【方法】采用4种分离培养基对水稻内生放线菌进行分离,用平板对峙法筛选出对稻瘟病菌拮抗性能最好的菌株,结合其菌落形态、生理生化及16S rRNA基因序列分析进行鉴定;用环境扫描电镜(SEM)观察拮抗菌对稻瘟病菌菌丝形态影响,用菌丝生长速率法对拮抗菌发酵滤液进行抗菌活性评价;大田条件下,喷洒拮抗菌孢子液于水稻,检测其稻瘟病控制效果;同时,对拮抗菌进行产酶和次级代谢产物分析,检测其聚酮合酶基因(PKSⅡ型)和非核糖体多肽合成酶基因(NRPS)。【结果】从1 800个水稻样品中分离出117株内生放线菌,从中筛选出拮抗性能最好的菌株Osi Rt-1,鉴定为米修链霉菌Streptomyces misionensis。该菌株使稻瘟病菌菌丝出现畸形,其无菌滤液对病菌菌丝生长的抑制率为28.06%;大田条件下,Osi Rt-1对水稻苗瘟、穗瘟均有较好防效,其中对苗瘟防效为7.76%,穗瘟防效高达25.65%,损失率降低了17.46%。与之对应,Osi Rt-1处理过的水稻地上部分,Osi Rt-1所占内生放线菌的比例明显高于未处理水稻。该菌株具有可能降解真菌细胞壁的纤维素酶、蛋白酶活性,同时可产生植物生长促进剂铁载体、IAA、ACC脱氨酶。菌株Osi Rt-1呈现PKSⅡ型和NRPS阳性。【结论】菌株Osi Rt-1是一株具生防潜力的内生放线菌,在农业上具有实际研发价值。
- 王真真徐婷袁珊珊廖红东杨远柱曾夏冬李燕胡小淳柳倩曾嘉锐朱咏华刘选明
- 关键词：稻瘟病生物防治
- Pannonibacter phragmitetus T1菌对Pb^(2+)的吸附特性被引量：7
- 2011年
- 以pannonibacter phragmitetus T1菌作为生物吸附剂,研究细菌代谢活性、培养时间、溶液pH值、菌体用量、温度、吸附时间、初始金属浓度等因素对其吸附重金属Pb2+的影响,并进一步研究吸附机理。结果表明,培养12 h的灭活T1菌体在Pb2+浓度为150 mg/L、pH值为6、T1菌添加量为0.5 g/L、温度为30℃的条件下,对Pb2+的最大吸附量为68.35 mg/g;灭活T1菌对重金属Pb2+的吸附过程较快,90 min即达到吸附平衡,Pb2+的吸附符合Pseudo-second order模型和Langmuir等温吸附模型。结合红外光谱分析,灭活pannonibacter phragmitetus T1菌对Pb2+是表面吸附,羟基和酰胺基是与Pb2+络合反应的主要基团。
- 苏艳蓉柴立元杨志辉尤翔宇朱咏华
- 关键词：铅离子
- 用植物提取物筛选与酵母甾醇乙酰化循环相关的物质
- 2009年
- 为了确定酿酒酵母中乙酰/脱乙酰循环是否参与细胞对某些甾体化合物或其类似物的毒性解除过程,将野生型(BY4742)、脱乙酰酶SAY1单突变体(say1Δ)、乙酰基转移酶ATF2单突变体(atf2Δ)和SAY、ATF2双突变体(atf2Δsay1Δ)酵母菌分别培养在含21种不同植物提取物的培养基中,比较其生长状况.结果显示,在含80 mg/mL黄芪提取物的培养基中,细胞生长必须依赖一个完整的乙酰化/脱乙酰循环的作用;而在含20 mg/mL生姜提取物的培养基中,其生长则必须依赖ATF2(乙酰化作用)的缺失.可以推测甾醇乙酰化/脱乙酰循环途径很可能间接参与了某些甾族化合物或其类似物的解毒过程.
- 朱咏华王磊陈英毅李蔚廖红东蔡立军周苹
- 关键词：酵母甾醇解毒植物提取物
