李东
- 作品数：31 被引量：66H指数：5
- 供职机构：十堰市太和医院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金湖北省科技计划研究与开发项目湖北省教育厅重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学一般工业技术更多>>
- RNA干扰抑制土拨鼠肝炎病毒X基因表达被引量：4
- 2011年
- 目的:研究土拨鼠肝炎病毒(WHV)序列特异性siRNA对WHV X基因表达的抑制作用。方法:以WHV全长质粒为模板PCR扩增WHV X基因,克隆到pXF3H载体构建WHX-HA融合蛋白真核表达质粒(pXF3H-WHx);合成siRNA的模板序列,克隆到siRNA表达质粒psiRNA构建shRNA表达质粒(psiWx1、psiWx2);质粒pXF3H-WHx与psiWx1、psiWx2共转染Hela细胞,Western blot检测WHV X蛋白的表达。结果:Hela细胞中WHVX蛋白的表达受siRNA的抑制,psiWx1表达的siRNA抑制90%以上的X蛋白表达,并呈剂量依赖性,但是WHV X基因靶位点中2个突变的核苷酸可使这种干扰作用消失。结论:质粒表达的siRNA序列特异性抑制WHV X蛋白的表达。
- 孟忠吉吴珺张永红汤守兵李东柯昌征陈悦
- 关键词：土拨鼠肝炎病毒RNA干扰小干扰RNA
- 替诺福韦酯治疗耐药的慢性乙型肝炎及耐药原因分析
- 李东丁德平张银华康健马德强雷青
- RNA干扰上调天然免疫被引量：1
- 2013年
- 目的:研究特异性RNA干扰对于天然免疫的上调作用。方法:分别分离WHV感染的土拨鼠和WHV转基因小鼠原代肝细胞,转染针对WHV、小鼠β-actin和GAPDH的siRNA。Northern blot和Real-time RT-PCR分别检测原代肝细胞中WHV、MxA、MHCⅠ、β-actin、GAPDH、IFN-β和IP-10的mRNA水平。结果:针对WHV、小鼠β-actin和GAPDH的siRNA抑制靶基因mRNA伴随MxA、MHCⅠ、IP-10等干扰素刺激基因的上调表达。这种干扰素刺激基因的上调表达只有在靶基因被特异siRNA降解时出现,呈剂量和沉寂效应依赖性,而且可以被siRNA特异性抑制剂所阻断。结论:RNAi上调天然免疫可能增强siRNA的抗病毒效应,有可能在抗病毒RNAi研究中发挥重要作用。
- 孟忠吉张永红李东汤守兵柯昌征陈悦
- 关键词：RNA干扰土拨鼠肝炎病毒原代肝细胞天然免疫
- DNA疫苗诱导的免疫应答控制土拨鼠肝炎病毒复制
- 2015年
- 目的：研究DNA疫苗在嗜肝病毒慢性感染的个体诱导产生的细胞和体液免疫应答水平,及其对嗜肝病毒复制的抑制作用,探索打破病毒特异性免疫耐受的新途径。方法：利用土拨鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus,WHV）转基因小鼠模型,采用WHV核心抗原（WHV core antigen,WHc Ag）的真核表达质粒（p WHc Im和p CGWHc）作为DNA疫苗免疫3次后,分别采用流式细胞仪检测WHc Ag特异性细胞毒性T淋巴细胞（Cytotoxical T cells,CTL）,ELISA检测血清抗-WHc抗体水平,realtime PCR检测血清WHV DNA载量。结果：DNA疫苗在转基因小鼠体内诱导高水平的抗-WHc-Ig G2a抗体和WHc Ag特异性的CTL应答,而且DNA疫苗介导的免疫应答显著抑制WHV复制。与对照组相比,DNA疫苗处理使WHV转基因小鼠血清病毒载量下降2-3个Log值,其中p CGWHc免疫组的6只小鼠中3只血清DNA降至检测低限以下。结论：DNA疫苗可以在转基因小鼠体内诱导产生强烈的细胞和体液免疫应答,并控制WHV复制,提示DNA疫苗在打破嗜肝病毒特异性免疫耐受中具有重要作用,有可能开发成为乙型肝炎治疗的新方法。
- 孟忠吉张永红李东汤守兵柯昌征陈悦
- 关键词：土拨鼠肝炎病毒转基因小鼠DNA疫苗细胞免疫
- 连续离心式血浆置换治疗慢性乙型重型肝炎的疗效观察
- [目的]:研究采用连续离心血液成分分离机进行血浆置换治疗慢性乙型重型肝炎的临床疗效。[方法]:采用连续离心血液成分分离机进行血浆置换治疗慢性乙型重型肝炎患者126例,并与传统的膜分离式血浆置换治疗慢性乙型重型肝炎患者15...
- 马德强李东孟忠吉陈悦
- 关键词：慢性乙型肝炎重型肝炎血浆置换
- 文献传递
- siRNA联合恩替卡韦在原代肝细胞中抑制土拨鼠肝炎病毒基因表达和复制被引量：1
- 2013年
- 目的:在原代土拨鼠肝细胞中研究siRNA联合恩替卡韦(ETV)对土拨鼠肝炎病毒(WHV)基因表达和复制的抑制作用。方法:分别设计合成针对WHV PreS1、S、C、X基因的4种siRNA,转染原代土拨鼠肝细胞,同时给予ETV处理,Southern和Northern印迹检测WHV病毒复制中间体和mRNA水平,realtime PCR检测细胞上清中WHV DNA。结果:4种siRNA对WHV基因表达和复制的作用显示出不同的动力学特征,siWHs和siWHx的抑制作用最强,而siWHpreS1和siWHc的活性相对较弱。在原代肝细胞中,首先出现的是WHV mRNA水平的降低,然后是WHV复制中间体水平的降低,siWHs和siWHx最高抑制60%～70%的mRNA和病毒复制中间体,同时抑制细胞上清中90%的WHV DNA。另外siWHx与ETV联合应用不仅可以增强抗病毒作用,而且可以防止ETV停药反跳。结论:siRNA在WHV自然感染的原代肝细胞中可以有效抑制病毒的基因表达和复制,因而siRNA有可能开发成为新的抗HBV药物,尤其适用于核苷(酸)类似物的联合应用。
- 孟忠吉张永红柯昌征李东汤守兵陈悦
- 关键词：土拨鼠肝炎病毒原代肝细胞核苷(酸)类似物
- RNAi通过PKR和TLR通路活化天然免疫
- 2013年
- 目的:研究特异性RNA干扰(RNA interference,RNAi)上调天然免疫的分子机制。方法:分别从土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)转基因小鼠和WHV慢性感染的土拨鼠分离原代肝细胞,转染针对WHV和小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),同时用特异性siRNA抑制剂和信号通路抑制剂,研究RNA活化蛋白激酶(RNA-activated protein kinase,PKR)、Toll样受体(toll-like receptor,TLR)3、7/8和视黄酸诱导基因Ⅰ(Retinoic acid-inducible gene-Ⅰ,RIG-Ⅰ)/黑色素瘤分化相关基因5(Melanoma differentiation-associated gene-5,MDA5)等信号通路在RNAi上调天然免疫中的作用,Real-time RT PCR检测靶基因和MxA的mRNA水平,Western blot检测信号通路分子磷酸化PKR、核因子κB(Nuclear FactorκB,NF-κB)和干扰素调节因子(interferon regulator factor,IRF)3的蛋白水平。结果:针对WHV和GAPDH的RNAi介导的黏病毒抵抗蛋白A(myxovirus resistance A,MxA)上调可以被PKR抑制剂和内体酸化抑制剂所阻断,特异性RNAi可以诱导PKR磷酸化和NF-κB与IRF3的核内转位。结论:特异性RNAi介导的靶RNA降解产物可能通过PKR和TLR-3,-7/8通路活化天然免疫。
- 孟忠吉张永红李东汤守兵柯昌征陈悦
- 关键词：土拨鼠肝炎病毒原代肝细胞天然免疫
- 乙型肝炎病毒对树突状细胞表型成熟和功能活化的影响被引量：5
- 2011年
- 目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)病毒粒子和抗原成分对树突状细胞(DC)成熟和功能活化的影响。方法:分离培养小鼠骨髓来源的DC细胞(BM-DC),在培养过程中加入含有HBV病毒粒子和抗原成分的培养基,流式细胞技术分析DC细胞表面分子的表达水平,病毒保护实验和细胞因子生物分析方法分别检测DC细胞培养上清中的干扰素(IFN)和肿瘤坏死因子(TNF)的表达水平。结果:培养基中加入HBV病毒粒子和抗原成分显著抑制DC细胞表面共刺激分子(CD40、CD80、CD86)和成熟标志分子(MHC-Ⅱ)的表达,降低DC细胞培养上清中IFN和TNF的水平。结论:HBV可以直接抑制DC的表型成熟和功能活化,有可能在HBV感染的慢性化机制中起重要作用。
- 孟忠吉张永红李东柯昌征汤守兵陈悦
- 关键词：树突状细胞乙型肝炎病毒免疫耐受
- 2013年全国法定传染病疫情特征分析及应对策略
- <正>目的分析2013年全国法定传染病痰隋特征。方法本研究依据中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会公开发布的2013年全国法定传染病疫情通报,对2013年全国法定传染病疫情进行数据分析。结果 2013年全国(不含港澳台...
- 康健汤守兵柯昌征李东孟忠吉陈悦
- 文献传递
- CpG联合恩替卡韦在体内诱导早期病毒学应答抑制土拨鼠肝炎病毒的复制
- 2016年
- 目的：研究CpG寡脱氧核苷酸对嗜肝病毒复制和基因表达的抑制作用及其作用机制,探索抗病毒治疗的新方法。方法：利用土拨鼠肝炎模型研究P类CpG的免疫刺激和抗病毒活性。土拨鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus,WHV）慢性感染的土拨鼠12只分为4组,分别接受CpG皮下注射（4 mg/kg,每周1次,共16周）、恩替卡韦（entecavir,ETV）饲养（0.5 mg·kg-1·d-1,共12周）、CpG联合ETV治疗,或不处理作为对照。在处理后的第1、2、3天,1、2、3、4、8、12、16、20、24和28周,采用定量PCR检测血清WHV载量和PBMC内ISGs mRNA的水平,ELISA检测WHs Ag（WHV surface antigen）水平,生物活性分析血清IFN水平。结果：相比对照组和CpG或ETV单独治疗组,CpG联合ETV治疗显著抑制WHV的复制和表达,出现早期病毒学应答并强烈抑制血清WHs Ag抗原水平。CpG联合ETV治疗组的4只动物中有3只在治疗的13~17周后血清WHs Ag低于检测下限。另外,接受CpG治疗的大部分动物血清中检测到IFN、PBMC中Mx A mRNA显著上调（10~100倍）。结论：P类CpG在慢性WHV感染的土拨鼠体内诱导天然免疫,从而产生强烈的病毒抑制作用。通过优化方法达到长期持续的病毒抑制效果,将促进在HBV感染的个体开展类似的研究,从而开发成为乙型肝炎治疗的新方法。
- 孟忠吉张永红柯昌征李东汤守兵陈悦
- 关键词：TOLL样受体CPG寡脱氧核苷酸土拨鼠肝炎病毒
