李冬兵
- 作品数：10 被引量：13H指数：2
- 供职机构：河南农业大学更多>>
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- 外源ABA处理大麦胚的均一化cDNA文库的构建被引量：3
- 2014年
- 构建外源ABA处理大麦胚的均一化cDNA文库是利用酵母双杂交方法筛选与靶蛋白相互作用蛋白的前提条件。为给大麦抗逆基因的研究及抗逆转基因大麦材料的创制奠定基础,利用5μmol·L-1ABA和蒸馏水分别处理大麦种子0h、6h、12h、24h,剥取大麦的胚,用热酚法提取总RNA,利用SMART原理进行反转录PCR并进行均一化处理获得ds-cDNA。经SfiⅠ酶切的ds-cDNA与pGADT7-Rec载体连接后,转化大肠杆菌感受态细胞DH10B构建文库。结果表明,文库的容量为1.1×106,插入片段大于1 000bp,集中在1 000~3 000bp之间,符合酵母双杂交文库的要求。
- 曹玲珑李冬兵熊大斌牛洪斌姜玉梅尹钧
- 关键词：外源ABA大麦CDNA文库
- 小麦冷休克蛋白基因TaCSP的克隆及表达分析
- 2014年
- 为深入研究小麦冷休克蛋白(cold shock proteins,CSPs)基因,根据大肠杆菌(E.coli)CSPs蛋白保守氨基酸序列,借助生物信息学技术检索小麦EST序列,采用同源序列法拼接了小麦3个冷休克蛋白基因,并以小麦叶片总RNA为模板,采用RT-PCR对其进行扩增;同时,采用荧光定量PCR对3个基因的组织表达特性以及ABA、低温、高温、干旱和盐胁迫条件下的表达模式进行了研究。结果表明,小麦3个冷休克蛋白基因TaCSP1、TaCSP2和TaCSP3全长分别为290、374和377bp,各编码69、69、80个氨基酸残基。序列分析表明,TaCSP1、TaCSP2和TaCSP3之间氨基酸相似性为72.9%~84.3%,与大肠杆菌来源CSPs的相似性为40.0%~79.7%。荧光定量PCR表达谱分析显示,TaCSPs在抽穗期小麦的根、茎、叶和幼穗中均能表达。胁迫分析表明,3个冷休克蛋白基因在小麦幼根中的表达,在低温和ABA处理下,表现为早期诱导、后期抑制,在高温、干旱和盐胁迫下,则表现为早期抑制、后期有所恢复。克隆获得的小麦3个冷休克蛋白基因在根组织中强烈表达,并受ABA和冷胁迫诱导,推测其在小麦抵御逆境胁迫过程中发挥重要作用。
- 曹玲珑李冬兵熊大斌邓利牛洪斌姜玉梅尹钧
- 关键词：小麦冷休克蛋白基因克隆
- 大麦衔接蛋白AP-3复合体HvMu3基因的克隆及表达分析
- 2013年
- 为研究大麦衔接蛋白AP-3复合体的功能,根据Mu3亚基的保守氨基酸序列,借助生物信息学搜索大麦EST序列,拼接了一个大麦(Hordeum vulgare)衔接蛋白AP-3复合体Mu3亚基基因(HvMu3),以大麦叶片来源的DNA做为模板,采用RT-PCR扩增HvMu3基因。采用半定量RT-PCR及荧光定量PCR(qRT-PCR)对该基因的组织表达特性以及ABA、NaCl和Cr6+胁迫条件下的表达模式进行分析。结果表明,HvMu3完整阅读框全长为4 439bp,包含8外显子和7内含子,编码417个氨基酸残基,其中含有1个MHD结构域,属于衔接蛋白AP-3复合体Mu3亚基的典型特征,是首次克隆获得大麦衔接蛋白AP-3复合体Mu3亚基基因HvMu3;HvMu3在供试样品的根、茎、叶、胚和胚乳中均能表达,以胚中表达量最高,根、茎和叶次之,胚乳中表达量最低,表明该基因在大麦的旺盛生长组织中表达强烈;HvMu3在大麦幼苗叶片中的表达受ABA、NaCl和Cr6+胁迫诱导,推测其在大麦的生长发育和抵抗逆境胁迫过程中发挥重要作用。
- 邓利李冬兵曹玲珑熊大斌尹钧牛洪斌
- 关键词：大麦基因克隆
- 脯氨酸对盐胁迫条件下大麦叶片Rubisco酶活性的影响被引量：2
- 2015年
- 研究了外源脯氨酸对盐胁迫下大麦叶片Rubisco酶活性的影响。结果表明,在盐胁迫条件下,添加外源脯氨酸可以延缓Rubisco羧化酶活性的降低及加氧酶活性的上升;添加外源脯氨酸可以缓解类囊体膜上核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶的富集,并提高幼苗叶片中超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶和过氧化氢酶等抗氧化酶类的活性。综合以上分析,脯氨酸能减缓Rubisco羧化酶/加氧酶活性的降低或上升,以及减少Rubisco在类囊体膜上的积累,对盐胁迫下的大麦提供有效的保护作用。
- 熊大斌曹玲珑李冬兵邓利尹钧牛洪斌
- 关键词：大麦盐胁迫脯氨酸
- 郑麦9023胚性悬浮细胞系的建立和植株再生被引量：2
- 2018年
- 为建立高效稳定的小麦遗传转化体系,以小麦郑麦9023的幼胚为外植体诱导愈伤组织,研究了培养基中不同质量浓度2,4-D、KT对愈伤组织诱导和愈伤组织继代培养的影响,进而完成整个植株再生的进程。结果表明:以小麦郑麦9023的幼胚作为外植体来诱导愈伤组织,诱导效果最好的培养基是含有3.0 mg/L 2,4-D的MS培养基,出愈率最高达92.5%;愈伤组织进行继代培养的最佳培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮系继代时间为16 d;悬浮系中的成熟胚在基本培养基上可以发育成正常的植株。所建立的悬浮系可以用来进行小麦基因工程遗传改良和体细胞无性系突变体的筛选。
- 李冬兵吕桂珍牛洪斌尹钧
- 关键词：小麦郑麦9023胚性悬浮细胞系植株再生
- 不同小麦品种穗发芽特性的鉴定及TaRHA2b基因序列差异分析被引量：3
- 2019年
- 为了开发新的抗穗发芽分子标记,以50个发芽指数具有显著差异的小麦品种为材料,进行穗发芽特性的鉴定,同时对这50个小麦品种的RING finger E3连接酶基因TaRHA2b的核苷酸序列进行测定,然后进行比对分析。结果表明,50个小麦品种的抗穗发芽能力有明显差异;不同小麦品种间TaRHA2b基因序列的长度变化不大,但是存在6个单核苷酸多态性位点,其中第47位碱基的差异造成EcoICRⅠ/Ecl136Ⅱ和SacⅠ/SstⅠ这2个酶切位点的差异。
- 李冬兵左宁吕桂珍杜红旭牛洪斌尹钧
- 关键词：小麦穗发芽分子标记
- 小麦h型硫氧还蛋白Trx-h酵母双杂交诱饵载体的构建和自激活检测被引量：2
- 2014年
- 为构建小麦h型硫氧还蛋白Trx-h酵母双杂交诱饵载体,并检测其对酵母细胞的自激活作用。利用RT-PCR扩增TaTrx-h基因的ORF区域,并与pGBKT7载体连接构建诱饵载体pGBKT7-Trx-h,利用PEG/LiAC法转化酵母AH109后,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无自激活作用。结果表明,含pGBKT7-Trx-h质粒的酵母在SD/-Trp-Leu培养基上能正常生长,说明诱饵载体表达产物对酵母细胞无毒性作用;在SD/-Trp-Leu-His-Ade培养基上不能生长,说明诱饵质粒无自主激活报告基因的作用。因此,可以利用该诱饵载体通过酵母双杂交方法筛选与Trxh蛋白相互作用的蛋白。
- 曹玲珑李冬兵熊大斌邓利牛洪斌姜玉梅尹钧
- 关键词：小麦硫氧还蛋白诱饵载体自激活
- 马铃薯C-8,7甾醇异构酶基因原核表达载体的构建和表达
- 2013年
- 为研究甾醇异构酶的功能以及制备抗体,分别构建了马铃薯C-8,7甾醇异构酶基因StSI1携带和去除信号肽序列的原核表达载体pGEX-StSI1b和pGEX-StSI1c,并在大肠杆菌BL21(DE3)工程菌株中优化了融合蛋白GST-StSI1b和GST-StSI1c的诱导表达条件.结果表明,在0.1,0.5,1.0 mmol.L-1的IPTG诱导下,2种融合蛋白GST-StSI1b和GST-StSI1c均能有效表达,并以1.0 mmol.L-1IPTG诱导的效果最好;从诱导表达的时间来看,3种浓度IPTG诱导3 h后融合蛋白均开始表达,且表达量随着诱导时间的延长而逐渐增加,但在诱导9 h后的表达量增加幅度不大,因此确定诱导融合蛋白GST-pStSI1表达的最佳IPTG浓度为1.0 mmol.L-1,诱导时间为9 h.
- 白润娥邓利曹玲珑李冬兵熊大斌牛洪斌尹钧
- 关键词：马铃薯原核表达
- TrxS基因过表达对大麦种子抗老化能力的影响被引量：1
- 2013年
- 为探索TrxS基因对转基因大麦种子耐贮藏能力的影响,以转TrxS基因大麦纯合株系Y002及其非转基因受体(CK1)为材料,采用高温高湿老化处理法,研究了TrxS基因过表达对转基因大麦种子耐贮藏性的影响。结果表明:(1)与非老化处理(CK2)相比,老化处理导致大麦种子发芽率和发芽势显著下降(P<0.05),转基因株系Y002种子发芽率和发芽势的降低速率慢于非转基因种子(CK1),处理3d时Y002种子的发芽势和发芽率分别比CK1高20.00%和22.20%(P<0.05);(2)大麦种子中MDA、羰基含量和相对电导率等氧化损伤指标均随着老化处理时间的延长而增加,转基因株系Y002的上述指标增加率普遍低于CK1,处理3d时Y002的MDA含量、羰基含量和电导率分别比CK1低22.69%、15.02%、17.75%(P<0.05);(3)在老化处理条件下,转基因种子的抗氧化酶活性高于CK1,处理3d时Y002的CAT活性与处理2d的POD活性分别比CK1高23.77%和43.27%(P<0.05)。以上结果说明,TrxS过表达能有效缓解高温高湿处理对大麦种子造成的氧化损伤,增强转基因大麦种子的抗老化能力。
- 邓利李冬兵曹玲珑熊大斌赵楠李巧云尹钧
- 关键词：大麦过表达抗氧化酶
- 转RHA2b基因抗穗发芽小麦的创制及其抗性机制
- 小麦穗发芽(Preharvest sprouting，PHS)是指小麦成熟期在潮湿环境下籽粒在穗上直接发芽的现象。穗发芽对小麦生产的负面影响主要体现在降低产量、恶化品质和降低种用价值。目前，大多数小麦品种的抗穗发芽能力都...
- 李冬兵
- 关键词：小麦品种选育基因表达
