李发祥
- 作品数：11 被引量：6H指数：2
- 供职机构：湖南师范大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Pericardin蛋白的表达纯化以及多克隆抗体的制备
- 2012年
- Pericardin基因是果蝇心脏发育的标记基因,在果蝇心脏发育过程中起着重要的作用.从果蝇体内提取出总RNA,反转录得到果蝇的cDNA,将其作为模板.通过生物信息学分析,选择Pericardin基因抗原亲水区,选取特异性高的片段.将PCR片段克隆到原核表达pET28a(+)载体上,转入E.coli后通过IPTG(Isopropylβ-D-thiogal-actoside)诱导表达His融合蛋白,蛋白经分离纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.经Western Blot检测抗体的效价和特异性.结果显示,获得了Pericardin原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Pericardin多克隆抗体,为Pericardin功能的进一步研究奠定了基础.
- 赵碧峰唐雄卓李发祥肖丽娜杨荣江志钢吴秀山王跃群
- 关键词：果蝇原核表达多克隆抗体
- 斑马鱼基因ATF4多克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- ATF4是含有bZIP结构域的ATF/CREB转录因子家族成员,对胚胎的发育以及细胞的增殖、分化有重要的调节作用。制备ATF4的多克隆抗体对于研究其在斑马鱼心脏发育过程中的作用有重要的意义。研究首先通过生物信息学方法,选择ATF4基因中特异性强、具亲水性的一段核苷酸序列(1 017 bp),通过PCR扩增,将片段重组到原核表达载体pET-28a,然后转化入Rosetta菌株中。经测序鉴定正确后,用IPTG诱导表达融合蛋白,以该融合蛋白免疫小鼠,获得ATF4多克隆抗鼠血清。对该多抗血清抗体进行验证,具有很好特异性和较高效价,可以用作Western-blotting、免疫印迹等试验分析。
- 李发祥杨荣陈婷芳唐雄卓赵碧峰江志钢张义李永青吴秀山
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体
- 斑马鱼心脏标记基因VMHC多抗血清的制备被引量：2
- 2011年
- 斑马鱼基因VMHC(Ventricular myosin heavy chain)是心脏发育早期的标志基因,制备该基因多抗血清,首先通过生物信息学方法,选择VMHC基因中特异性强、具亲水性的一段核苷酸序列(3 772～4 221 bp),通过PCR扩增,将片段重组到原核表达载体pGEX-4T-1,通过原核诱导表达获得含有表达目的片段的融合蛋白,以该融合蛋白免疫小鼠,获得VMHC多克隆抗鼠血清.对该多抗血清抗体进行验证,结果具有很好特异性和较高效价,可以用作western-blot、免疫印迹等试验分析.
- 王琨满贤刘华友李志李发祥赵阳廖四芳吴秀山袁婺洲
- 关键词：标记基因融合蛋白
- 利用斑马鱼模型研究心脏组织高表达基因HDGC3在心脏发育中的功能
- 罗娜李发祥叶湘漓陈婷芳黄婷吴坚王琨吴秀山邓云
- 人类心脏和肌肉组织特异表达基因Smyd1的表达与抗体制备
- 2009年
- Smyd1基因是人类心脏和肌肉特异表达基因,制备该基因的多克隆抗体可以为进一步深入研究Smyd1在心脏发育过程中与其他因子相互作用提供检测工具.通过PCR方法扩增smyd1基因的编码区片段,并将其克隆至PGEX-4T-1上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,再通过5052法和IPTG法分别诱导表达GST-Smyd1融合蛋白.经比较,5052法诱导的蛋白表达量明显高于IPTG法.采用5052法大量诱导表达,通过割胶回收纯化融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot检测抗体活性.结果表明,实验获得了高质量的多克隆抗体.
- 谢岁岁王跃群万永奇邓云莫小阳李发祥李永青吴秀山
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 斑马鱼心脏发育候选基因Pygo1多克隆抗体的制备及检测被引量：2
- 2011年
- Pygo1是心脏发育候选基因,可能在斑马鱼心脏发育过程中起着重要的调控作用.利用生物信息学选择斑马鱼Pygo1基因抗原亲水区,将扩增出的PCR片段克隆到原核表达pGEMT-4T-1载体中,转入E.coli中后通过IPTG(Isopropylβ-D-thiogalactoside)分别诱导表达GST融合蛋白.蛋白经纯化分离后用于免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.用Western Blot检测抗体的效价和特异性.
- 唐雄卓江志钢赵碧峰李发祥谢华平邓云吴秀山
- 关键词：斑马鱼原核表达多克隆抗体
- 果蝇odd蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备研究被引量：1
- 2011年
- odd是一个新发现的心脏特异表达基因。为了进一步研究odd在心脏发育中的功能,根据已报道的odd基因序列,以果蝇cDNA文库为模板进行PCR扩增,将所得的odd部分编码区序列连接到pET-28a载体上构建原核表达载体;重组子经酶切测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导融合蛋白表达,Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,纯化后的His-odd融合蛋白免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体,Western Blot检测抗体活性。结果表明,获得了odd原核表达重组融合蛋白以及高效价的、特异性兔抗Odd多克隆抗体,为后续的odd功能研究奠定了基础。
- 张义叶湘漓鲁建鑫彭佩莹赵阳江志钢李发祥王跃群袁婺洲吴秀山邓云
- 关键词：ODD融合蛋白原核表达多克隆抗体
- 心脏和肌肉组织特异表达基因HDGC通过HDGC-TP2-GATA4信号途径调控心脏的发育
- 我们利用斑马鱼模型深入研究了心脏发育候选基因HDGC的功能。自制了人和斑马鱼HDGC抗体,通过Western blotting、免疫组化及整胚原位杂交结果表明,HDGC在斑马鱼胚胎发育的各时期均有表达,其中在心脏的心室和...
- 罗娜王琨吴坚李发祥黄婷陈婷芳邓云吴秀山袁婺洲
- 文献传递
- 利用斑马鱼模型研究心脏组织高表达基因HDGC3在心脏发育中的功能
- 我们以大规模筛选心脏发育候选基因的研究结果为基础鉴定出一个在心脏高表达的基因HDGC3。HDGC3基因在脊椎动物中高度进化保守,编码35KD蛋白,生物信息学分析表明,HDGC3编码蛋白含有三个跨膜结构域和一个cNMP结合...
- 罗娜李发祥叶湘漓陈婷芳黄婷吴坚王琨吴秀山邓云
- 文献传递
- 利用蛋白质免疫印迹技术研究POP3调控心脏发育的分子机制
- 脊椎动物的心脏发育过程，是一个多基因调控的复杂的信号网络，其中一些重要的调控因子在心脏发生中的作用引起了发育生物学届的广泛关注。通过鉴定出重要的调控因子，然后调出与其发生相互作用的蛋白，找出其参与的信号通路，对于揭示心脏...
- 李发祥
- 关键词：心脏发育细胞增殖分子机制
- 文献传递
