目的了解湖北恩施地区和武汉地区手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)病原体肠道病毒71型(EV-A71)VP1的基因特征。方法收集2010年来自于恩施地区和武汉地区的78例HFMD患儿的咽拭子标本。通过标本接种病毒易感Vero细胞,对产生明显细胞病变效应的阳性标本进行初筛。利用PCR法对初筛阳性标本进行进一步鉴定,对阳性毒株VP1基因序列进行扩增,将其构建到pMD18-T载体上,最后对VP1全长序列进行测序。通过构建系统进化树分析2010年湖北恩施地区和武汉地区EV-A71病毒株的基因型,并分析探讨其与2010年中国大陆其他地区EV-A71病毒株之间的进化关系。结果从78例手足口病标本中分离得到9株EV-A71,进一步对其VP1序列进行系统进化分析发现所有EV-A71分离株均属于C4亚型。2010年恩施地区和武汉地区EV-A71病毒株与2010年中国大陆其他地区EV-A71病毒株在同一进化分支。本研究中分离自伴随震颤患者的EV-A71病毒株(wh64-CHN-10)的VP1-240位点氨基酸残基为丙氨酸,而其余分离自轻症手足口病患者的8株EV-A71病毒株的VP1-240位点为苏氨酸。结论 EV-A71是2010-2011年恩施和武汉地区手足口病的重要病原体之一,属于C4基因型,VP1-240位点的氨基酸可能影响EV-A71的毒力。
