李宏钊
- 作品数：11 被引量：18H指数：3
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- Raf激酶抑制蛋白与乳腺癌转移关系的探讨
- 研究目的： Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein, RKIP)是磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)家族的成员。具有多种生理学作用(1-7),对信号传导通路也具有重要的影响。研究发现R...
- 李宏钊
- 关键词：乳腺癌RAF激酶抑制蛋白转移抑制基因IL-8
- 文献传递
- 肌球蛋白轻链激酶对大鼠平滑肌细胞增殖的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)与大鼠平滑肌细胞增殖的关系及其可能机制。方法采用慢病毒转染方式上调或下调大鼠肺血管平滑肌细胞(PVSMC)表达MLCK水平,使用8肽胆囊收缩素(CCK-8)方法检测PVSMC增殖情况,同时检测内皮素受体(ETA-R)表达;使用Rho激酶抑制剂了解Rho激酶激活在MLCK导致PVSMC增殖中的作用。结果过表达MLCK可促进PVSMC增殖,同时上调ETA-R表达;干扰MLCK表达起相反作用。Rho激酶抑制剂可抑制MLCK导致的PVSMC增殖及ETA-R上调。结论 MLCK促进PVSMC增殖,可能是通过促进ETA-R实现。Rho激酶激活可能在MLCK促PVSMC增殖中起作用。
- 李德来邓为民李宏钊
- 关键词：肌球蛋白轻链激酶肺动脉高压平滑肌细胞增殖
- 人卵巢癌细胞系干/祖细胞分离及其鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的:自人卵巢癌细胞系SK-OV-3中分离干/祖细胞并进行鉴定。方法:采用无血清球形体形成法从SKOV-3中分离培养卵巢癌干/祖细胞;采用实时定量PCR和蛋折质印迹法测定球形体细胞干/祖细胞相关标志ABCG2、Oct-4、Nanog基因和蛋白的表达;流式细胞仪检测其耐药性;双层软琼脂检测其克隆形成能力;NOD/SCID小鼠检测其体内致瘤性。结果:球形体细胞表达干/祖细胞相关标志Oct-4、ABCG2、Nanog;对顺铂高耐药;在双层软琼脂上克隆形成率达(13.67±1.48)%;1 000个球形体形成细胞就能在NOD/SCID鼠中成瘤。结论:采用无血清培养基中球形体形成法从SKOV-3细胞系中可以分离出具有干/祖特性的卵巢癌细胞,可为今后研究卵巢癌的发生、发展、复发及其化疗药物筛选提供简便实用的体外模型。
- 王翠环杜涌瑞高燕顾欣赵惠丰李宏钊姚智邓为民
- 关键词：卵巢癌细胞系
- Raf激酶抑制蛋白增强卵巢癌细胞的化疗敏感性被引量：5
- 2010年
- 目的:探讨Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)对卵巢癌SKOV-3细胞化疗敏感性的影响。方法:以脂质体法将含有人全长RKIP基因的真核表达质粒pcDNA3.1-ssRKIP转染入SKOV-3细胞中,Western blotting检测SKOV-3细胞中RKIP蛋白的表达。不同浓度顺铂作用转染后的SKOV-3细胞,MTS法观察RKIP基因转染对顺铂处理后SKOV-3细胞增殖的影响,流式细胞仪检测RKIP基因转染对顺铂诱导SKOV-3细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:pcDNA3.1-ssRKIP转染的SKOV-3细胞RKIP表达明显升高。不同浓度顺铂处理细胞24、48、72h后,RKIP基因转染细胞增殖抑制率显著高于对照细胞(P<0.05)。用2.5μg/ml顺铂作用SKOV-3细胞24h后,RKIP转染细胞的凋亡率为(10.86±0.73)%,明显高于未转染细胞的(4.27±0.67)%和空质粒转染细胞的(4.02±0.43)%(P<0.01);在无顺铂作用情况下,RKIP转染细胞的凋亡率为(3.11±0.78)%,仍然高于未转染细胞的(1.51±0.13)%和转染空质粒细胞的(1.97±0.46)%(P<0.01)。细胞周期检测结果显示,RKIP转染细胞G0/G1期的比例下降,S期的比例增加,转染的SKOV-3细胞发生S期阻滞。结论:RKIP基因的转染可以增加卵巢癌SKOV-3细胞对化疗药物顺铂的敏感性。
- 宋继文高燕林璨璨李宏钊姚智邓为民
- 关键词：RAF激酶抑制蛋白卵巢癌顺铂化疗敏感性
- 雄激素调节卵巢癌细胞IL-6基因启动子活性的研究
- 2007年
- 目的探讨雄激素诱导卵巢癌细胞IL-6基因启动子活化的分子机制。方法选择SKOV-3细胞作为研究模型,应用ELISA、RT-PCR及荧光素酶检测技术观察5α-二氢睾酮(5α-dihydrotest- osterone,DHT)对IL-6表达水平及IL-6基因启动子活性的影响,并对DHT诱导IL-6基因启动子活化的机制进行研究。结果(1)DHT可促进SKOV-3细胞IL-6分泌及相应mRNA的表达,该作用可被雄激素受体(AR)阻断剂氟他胺(nutamide,Flu)完全阻断,提示DHT诱导上述作用是AR途径介导的。(2)IL-6本身能以剂量依赖性的方式增强SKOV-3细胞IL-6基因启动子的转录活性,DHT也具有与IL- 6相似的作用。DHT的这种作用可被Flu完全阻断,也可被抗IL-6中和抗体部分阻断。(3)转录因子NF-IL-6、NF-κB及其亚单位p50、p65均可诱导SKOV-3细胞IL-6基因启动子的活性。DHT不改变NF- IL-6介导的IL-6基因启动子的转录活化,而增强NF-κB(p50+p65)及其亚单位p50、p65介导的IL-6基因启动子的转录活化。结论雄激素增强的IL-6基因启动子转录活性是AR途径介导的,同时有部分是通过IL-6的作用而实现。雄激素很可能通过AR与转录因子NF-κB或其亚单位p50和p65之间蛋白-蛋白的相互作用反式激活IL-6基因启动子的活性。
- 王越杨洁高燕李宏钊笪宇荣姚智
- 关键词：IL-6细胞转染卵巢癌
- RKIP基因与卵巢上皮性癌转移的关系被引量：2
- 2009年
- 目的探讨一种新的转移抑制基因——RKIP基因与卵巢癌转移的关系。方法应用免疫组化、RT-PCR及蛋白印迹法对卵巢肿瘤的组织标本（卵巢癌组织22份，卵巢交界性肿瘤组织8份，卵巢良性肿瘤组织10份）及卵巢癌细胞系小RKIP基因的表达情况进行检测。将含正义和反义RKIPcDNA的表达载体导入卵巢癌细胞系SKOV3，蛋白印迹法检测转染前后细胞中丝裂原激活的蛋白激酶／细胞外信号调节激酶的激酶（MEK）、细胞外信号调节激酶（ERK）活性的变化。应用四甲基偶氮唑蓝法、双层软琼脂集落形成实验、体外黏附实验、体外侵袭实验、流式细胞仪等观察RKIP基因对卵巢癌细胞生物学行为的影响。结果（1）22份卵巢癌组织中RKIP的表达以阴性（6份，27％）、弱阳性（9份，41％）为主，而10份卵巢良性肿瘤和8份交界性肿瘤组织以强阳性（分别为4份、2份）、阳性（分别为4份、5份）为主。（2）RKIP基因转染后，含正义cDNA的ssRKIP细胞的磷酸化MEK和磷酸化ERK蛋白表达水平下调，ssRKIP#1和ssRKIP#4细胞磷酸化MEK蛋白的相对表达含量分别为0．35和0．34，两者磷酸化ERK蛋白的相对表达含量分别为0．48和0．46。（3）ssRKIP细胞的增殖能力明显低于未转染细胞（P〈0．01）。（4）锚定非依赖性生长能力：ssRKIP#1、ssRKIP#4细胞的集落形成数（83．7±5．7、106．0±9．2）较其对照空载体pcDNA3．1（＋）转染细胞（158．3±14．6）明显减少，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（5）体外黏附能力：ssRKIP#1、ssRKIP#4细胞的黏附率[分别为（68．3±0．8）％、（64．1±0．9）％]明显低于未转染细胞[（100．0±1．1）％]，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（6）体外侵袭能力：ssRKIP#1、ssRK]P#4细胞的穿膜细胞数[分别为（24±5）、（25±4）个]明屁低于未转染细胞[（68±5）个]，分别比
- 王越杨洁高燕赵秀兰李宏钊姚智
- 关键词：卵巢肿瘤肿瘤转移细胞系肿瘤磷脂酰乙醇胺结合蛋白
- IFN-γ在沙眼衣原体呼吸道感染中免疫防御机制的探讨被引量：4
- 2007年
- 目的:检测与IFN-γ作用相关的酶吲哚胺2,3二氧化酶(IDO)、诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)和NADPH氧化酶(ox)gp91在沙眼衣原体呼吸道感染中的表达及与机体防御的关系,探讨衣原体感染中IFN-γ免疫防御作用的机制。方法:用沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)通过鼻腔感染C57BL/6(H-2b)小鼠,用过氧化物酶连接的鼠抗衣原体脂多糖单抗染色HeLa229细胞,检测衣原体在肺组织的生长;用RT-PCR检测衣原体感染后第7及14天小鼠肺组织IFN-γ、IDO、iNOS和gp91 NADPHox mRNA表达。结果:MoPn呼吸道感染后小鼠肺组织匀浆衣原体活性测定,于感染后第2天,HeLa229细胞内可见有衣原体包涵体生长,IFU值增高,于感染后第7天IFU达最高水平,以后逐渐下降,至感染后21天基本恢复到基线水平。与未感染的对照组比较,Th1细胞因子IFN-γ于感染后第7天表达显著增高,感染后14天有所降低,但仍维持较高水平;同时衣原体感染可显著诱导与IFN-γ作用相关的三种酶IDO、iNOS和gp91 NADPHox在小鼠肺组织的表达,感染后第7及14天,IDO,iNOS及gp91 NADPHox的表达与对照组比较均有显著差异,其中IDO和gp91 NADPHox于感染后第7天mRNA表达增高显著(P<0.01),14天略有下降(P<0.05)。结论:衣原体呼吸道感染诱导Th1细胞因子IFN-γmRNA高表达,参与宿主对衣原体的清除及机体免疫防御,此作用可能与其相应的酶IDO、iNOS和gp91NADPHox表达增高有关。
- 布晓坤李宏钊邢冬红黄焕军白虹
- 关键词：沙眼衣原体IFN-ΓIDOINOSNADPHOX
- 乳腺癌患者血清HGF和Bcl-2的表达及临床意义被引量：1
- 2013年
- 目的研究乳腺癌患者血清HGF及Bcl-2水平在诊断和预后中的临床意义。方法检测44例原发性乳腺癌患者以及15名对照者血清HGF及Bcl-2水平,分析它们与临床病理参数的关系,并对血清HGF及Bcl-2进行ROC曲线分析。结果患者血清HGF水平为(1 198.8±76.3)pg/mL,高于对照组的(884.7±66.9)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.05),且随着肿瘤分期的上升逐渐增高(P=0.036)。患者血清Bcl-2水平为(12.8±2.0)ng/mL,也高于对照组的(5.1±0.4)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.05),Bcl-2水平在I级肿瘤、无淋巴结转移及绝经后患者中较高,但差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析显示HGF和Bcl-2诊断的AUC值分别为0.695和0.842。结论血清HGF和Bcl-2检测有助于原发性乳腺癌诊断及预后。
- 贾颖陈兴国邓为民李宏钊
- 关键词：肝细胞生长因子基因,BCL-2
- Raf激酶抑制蛋白乳腺癌转移关系的探讨
- 目的：Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein，RKIP)是磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)家族的成员。具有多种生理学作用(1-7)，对信号传导通路也具有重要的影响。研究发现RKIP是...
- 李宏钊
- 关键词：乳腺癌RAF激酶抑制蛋白转移抑制基因白细胞介素-8免疫组化
- 封闭细胞膜上葡萄糖转运子4胞内羧基端抑制其胞外区活性位点
- 目的探讨外源性PI(3,4,5)P3作用下,GLUT4是否被细胞内的某个蛋白封闭,从而阻碍了它转运葡萄糖的活性。方法应用稳定表达含myc表位的GLUT4的L6骨骼肌细胞株(L6-GLUT4myc),通过检测myc表位从而...
- 牛文彦谢云李宏钊姚智
- 文献传递
