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杨兴元: 作品数：12 被引量：16H指数：3; 供职机构：中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技攻关计划更多>>; 相关领域：生物学农业科学更多>>

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肌抑素(Myostatin)基因突变体活性区的克隆、表达及活性的研究被引量：5: 2003年; 肌抑素Myostatin是肌肉发育的重要抑制因子 ,肌抑素的突变 ,使其抑制功能的全部或几乎全部丧失 ,表现为肌肉细胞的增大和肌纤维束的增加。采用PCR技术 ,从肌抑素天然突变的双肌牛皮尔蒙特 (Piedmontese)的基因组中扩增得到肌抑素突变体的活性区 ,并将其亚克隆到pMD18 T载体上 ,利用基因重组技术 ,构建原核表达质粒pET3 0a(+ ) action Myostatin ,在大肠杆菌中高效表达 ,采用亲和层析法纯化表达产物 ,并将其共孵育于离体培养的绵羊肌肉细胞 ,检测肌抑素突变体的生化活性。; 杨兴元侯健安晓荣关宏苟克勉杨树洪陈立栋陈永福; 关键词：MYOSTATIN基因突变体克隆肌肉细胞

牛碱性成纤维细胞生长因子基因在大肠杆菌中的表达及其表达产物的生物学活性: 2007年; 采用巢式PCR方法克隆了牛18ku-bFGF基因完整的编码序列,并构建了原核表达载体pET-28a-bFGF,将其转化大肠杆菌BL21,在25℃低温条件下,用0.5 mmol/L IPTG诱导表达5 h,用Ni-NTA亲和纯化细胞裂解上清液,经Western-blotting检测,结果显示,在特定的诱导条件下,重组牛bFGF基因在大肠杆菌中获得了表达,并且主要以可溶性状态存在于细胞中。经检测,纯化后的重组蛋白能显著促进成纤维细胞的增殖(P<0.05),其活性与商品用重组人18ku-bFGF没有差异(P>0.05)。表明,所获得的可溶性重组牛18ku-bFGF蛋白具有较高的生物学活性,可用于后续研究工作。; 刘华忠杨兴元李晴安晓荣陈永福钟杰平李琨; 关键词：原核表达活性检测

高效率基因打靶载体的构建及受体成肌细胞的制备: 2009年; 通过建立高效率"双无"(无启动子、无polyA)打靶载体MSTN-GFP和MSTN-neo及新生绵羊和胎儿成肌细胞的培养和鉴定,优化了培养条件,改善了细胞状态,为提高打靶效率及体细胞克隆提供了稳定的核移植供体;同时无启动子打靶载体的构建也有利于打靶后阳性细胞克隆的分子鉴定.; 张蕾杨兴元安晓荣陈永福; 关键词：成肌细胞基因打靶

myostatin基因打靶的成肌细胞制备被引量：4: 2009年; Myostatin(MSTN),β-转化生长因子超家族的一员,是肌肉生长的负调控因子,该基因自然突变的比利时蓝牛和皮尔蒙特牛出现双肌性状。基因敲除该基因,是实现家畜产肉量的提高的有效方法。通过建立无启动子打靶载体MSTN-GFP,MSTN-neo,转染新生和胎儿绵羊骨骼肌细胞,经过表达绿色荧光蛋白报告基因和G418筛选获得骨骼肌细胞克隆,PCR,Southern blot,DNA序列检测获得阳性细胞克隆,为制备myostatin基因敲除的体细胞克隆绵羊提供核移植供体。; 张蕾杨兴元安晓荣陈永福; 关键词：基因打靶 MYOSTATIN 成肌细胞

牛胚系基因中两种JH和Cμ抗体基因的克隆与分析被引量：1: 2005年; 根据NCBIGenBankTM中登录的2个牛抗体重链可变区J基因(JH)(序列号为AY158087,AY149283)的序列不同之处设计PCR引物,能从同一个体的Holstein牛基因组DNA中扩增得到与以上2个基因分别相同的序列,证明这2个JH基因的差异不是由于牛个体或品种不同引起的.提取牛脾脏总RNA,RT-PCR扩增IgMcDNA,测序结果显示:序列号为AY149283的JH基因中第六外显子JH6是一个功能基因,它可以编码牛IgM的部分CDR3区和完整的FR4区,从2种IgMcDNA克隆的测序结果可以看出,其恒定区序列分别与序列号为U63637和AY230207的2种抗体重链恒定区μ基因(Cμ)cDNA序列相同.PCR扩增JH-Cμ序列,测序结果表明:序列号为AY158087的JH基因是同以上2种Cμ基因分别串连在一起的(序列号分别为AY230207和U63637).以上结果证明:序列号为U63637和AY230207的2个Cμ基因分别与AY149283的JH基因串联在一起,都能够参与牛IgM的产生,它们与AY158087的JH基因共同存在于同一个体Holstein牛胚系基因中.; 李敏陈丽梅林爱星杨兴元安晓荣陈永福; 关键词：抗体

遗传标记AFLP在西门塔尔牛、延边牛、南阳牛品种鉴别中的应用被引量：5: 2003年; 分子遗传标记AFLP是建立在PCR和RFLP技术上的一项新的DNA指纹技术,可广泛应用于种系鉴定、遗传多样性检测、群体分类研究、构建遗传图谱、标定目的基因等方面。其最适应范围是利用AFLP技术鉴定品种的质量和纯度,进行基因型的指纹鉴定。本文利用遗传标记AFLP,选用已发表的牛AFLP标记引物,通过PCR方法获得多态性丰富、重复性好的西门塔尔牛、延边牛、南阳牛等3个牛品种的AFLP的DNA指纹图谱,并对其进行比较。结果表现:3个牛品种都有其特殊的指纹图谱,而且有其特异的条带,西门塔尔牛(188kb)、延边牛(321kb、212kb)、南阳牛(556kb、384kb),从而为这3个牛品种的鉴别提供了依据。; 杨兴元许尚忠于汝梁周忠孝; 关键词：延边牛南阳牛 DNA指纹技术指纹图谱

抗牛精子sp18蛋白单链抗体基因的克隆及表达: 2004年; 应用重组噬菌体抗体技术，从小鼠抗牛精子sp18蛋白的A5杂交瘤细胞系中分离总RNA，构建重组噬菌体抗体库。以牛精子作为包被抗原，经过三轮“亲和吸附-洗脱-扩增”淘选后，用phage-ELISA筛选出特异性阳性克隆。取其中特异结合牛精子细胞的重组噬菌体抗体pCSA1克隆进行序列测定。将其ScFv(single chain fragment variable)因克隆到pET-30a(+)上，用IPTG进行诱导表达，成功得到了抗sp18单链抗体基因蛋白。; 杨树洪杨兴元侯健安晓荣陈永福; 关键词：单链抗体基因克隆基因表达噬菌体展示

牛Myostatin突变体基因Pro区和生物活性区的克隆、表达与功能研究: 肌肉生长抑制素,属TGF-β超家族,是肌肉生长的一个负调控因子,肌抑素基因的突变造成'双肌'现象,显示肌抑素基因在物种进化中的高度保守性.肌肉生长抑制素的突变动物由于肌纤维数目的增加和肌纤维的变粗在骨骼肌的产量上显示大量...; 杨兴元; 关键词：肌肉生长抑制素原核表达肌肉细胞; 文献传递

牛α(1,3)-半乳糖转移酶基因片段的克隆及一种全新的无启动子打靶载体的构建: 2003年; 利用La-PCR的方法,从牛的基因组中成功地获得分别约为2.4kb、15.0kb的两段扩增产物。两个片段分别克隆于pCR—XL—TOPO载体。测序结果表明所克隆的两片段均为牛α(1,3)GT基因的基因组序列。其中2.4kb片段位于5～7外显子之间,包括了完整的第五及第六内含子;15.0kb片段位于3～4外显子,包括了完整的第三内含子。15.0kb、2.4kb片段分别作为打靶载体的5’、3’同源臂,使用融合基因策略构建了一种全新的无启动子打靶载体7zf—neo17.4。电击转染牛胎儿成纤维细胞以期敲除牛的α(1,3)—GT基因。; 陈立栋林爱星张雅丽杨兴元安晓荣陈永福; 关键词：启动子打靶载体克隆基因打靶

遗传标记AFLPs在西门塔尔牛、延边牛、南阳牛品种鉴别中的应用: 分子遗传标记AFLP是建立在PCR和RFLP技术上的一项新的DNA指纹技术,可广泛应用于种系鉴定、遗传多样性检测、群体分类研究、构建遗传图谱、标定目的基因等方面.其最适应用范围是利用AFLP技术鉴定品种的质量和纯度,进行...; 杨兴元许尚忠于汝梁周忠孝; 关键词：南阳牛延边牛指纹图谱分子遗传标记; 文献传递

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