杨海泉
- 作品数：31 被引量：92H指数：4
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学农业科学更多>>
- 黑曲霉β-葡聚糖酶基因eglA6在乳酸克鲁维酵母中的表达及重组酶性质被引量：2
- 2021年
- 以黑曲霉(Aspergillus niger)高耐热葡聚糖酶编码基因eglA6在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)中的表达及重组酶性质为研究目的。利用乳酸克鲁维酵母表达系统,构建表达eglA6基因的重组菌K.Lactis GG799/pKLAC1-eglA6 SL105,重组菌摇瓶发酵酶活达到23.0 U/mL。重组酶AnEglA6K表观相对分子质量为5.6×10^(4),明显高于同一基因在巴斯德毕赤酵母中的表达产物。重组酶最适pH为5.0,最适温度为75℃,在80℃时酶活半衰期为65.0 min。以微晶纤维素为底物时重组酶比酶活约为0.5 U/mg。基因eglA6在乳酸克鲁维酵母中的表达产物与其在巴斯德毕赤酵母中的表达产物有明显差异,前者相对分子质量明显高于后者,热稳定性和结晶纤维素降解活性也高于后者。以乳酸克鲁维酵母为宿主表达eglA6基因获得的重组葡聚糖酶具有很高的耐热性,适合在饲料工业中应用。
- 王施岚徐楚涵姚雁杨梦莲德青美朵沈微杨海泉杨海泉陈献忠
- 关键词：黑曲霉乳酸克鲁维酵母糖基化
- 枯草芽孢杆菌普鲁兰酶基因的分泌表达及其在粉丝制作中的应用被引量：1
- 2022年
- 作者旨在研究枯草芽孢杆菌普鲁兰酶的分泌表达及表达产物的应用性能。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168菌株的普鲁兰酶编码基因BsP分别在大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌中进行表达,重组酶在两种宿主中均能利用自身结构分泌到细胞外。重组酶分泌到枯草芽孢杆菌细胞外的产物的酶学性质与积累在大肠杆菌胞质内的产物有明显的差异,分泌到枯草芽孢杆菌细胞外的重组酶BsBsP的比酶活为153.7 U/mg,是大肠杆菌胞质内产物的5.5倍。重组酶BsBsP最适pH为6.0,最适温度为45℃。重组酶BsBsP对直链淀粉无降解作用,为I型普鲁兰酶。在以土豆淀粉为原料的粉丝制作工艺中,以重组酶BsBsP水解芡糊淀粉可以有效降低粉丝断条率。枯草芽孢杆菌普鲁兰酶可利用自身结构实现高效分泌表达,重组酶适用于以淀粉为原料的粉丝制作。
- 祝冬君张锦雯姚雁单逸蓝杨梦莲沈微杨海泉杨海泉陈磊陈献忠
- 关键词：枯草芽孢杆菌普鲁兰酶分泌表达
- Significantly improving extracellular enzymes production in Escherichia coli by overexpressing D-alanyl-D-alanine carboxypeptidase
- Escherichia coli is the most widely used species of bacteria for recombinant protein production,but most of re...
- 卢潇刘龙杨海泉许菲
- 文献传递
- 代谢工程改造热带假丝酵母高效合成中链ω-羟基脂肪酸被引量：2
- 2022年
- 【目的】ω-羟基脂肪酸(ω-hydroxyfatty acid,ω-HFAs)是一种绿色安全无毒,具有良好生物相容性的理想生物降解材料,广泛应用于化工、食品、药学等方面,微生物发酵法生产ω-羟基脂肪酸具有重要的研究意义和应用前景。【方法】为了得到高产ω-羟基脂肪酸的代谢工程菌株,通过同源重组技术,连续敲除二倍体热带假丝酵母β-氧化途径中酰基辅酶A氧化酶基因(ACO)的同工酶POX基因,考察基因缺失对细胞生长以及合成ω-羟基脂肪酸能力的影响。【结果】基于脂肪醇氧化酶(FAO)基因缺陷菌株,成功构建了重组菌株F4PT(ΔPOX4,ΔPOX5),在碳源为葡萄糖的培养基中,重组菌株出现生长减缓,但在碳源为脂肪酸甲酯(C12–C14)的培养基中生长明显减缓,说明删除POX4、POX5基因使脂肪酸甲酯的代谢能力降低,其次通过摇瓶发酵实验,12-羟基十二酸和14-羟基十四酸的产量分别为3.01 g/L和8.69 g/L,转化率分别为11.44%和33.14%,达到积累ω-羟基脂肪酸的目的,并且代谢十四酸甲酯的能力是明显强于代谢十二酸甲酯。【结论】FAO、POX基因双缺失的热带假丝酵母可以明显积累ω-羟基脂肪酸,不同碳链的积累效率有差异,其中14-羟基十四酸的产量及转化率更高,重组菌株有定向转化十四酸甲酯为14-羟基十四酸的潜能。
- 王世杰张海冰沈微杨海泉夏媛媛曹钰陈献忠
- 关键词：热带假丝酵母精细化工品
- 分阶段调控关键因素提高白僵菌固态发酵产孢量被引量：2
- 2013年
- 采用分阶段调控关键因素策略,对白僵菌固态发酵过程进行优化。优化后最佳发酵模式为:初始含水量为65%,发酵至48 h将含水量调为68%;发酵至20 h和40 h分别适当翻料;0～48h(适应期)发酵温度为25℃,48～108 h(快速生长期)发酵温度为24℃,108～168 h(稳定期)发酵温度为28℃;同时,48～108 h按通气比1:2通气,0～48 h和108～168 h不通气。采用上述关键因素调控策略后,白僵菌固态发酵产孢量达18亿孢子/g(干培养基),与优化前相比产孢量提高约360%,效果显著。
- 李华祥杨海泉李江华刘龙华兆哲堵国成陈坚
- 关键词：白僵菌固态发酵产孢量
- 微生物酶高效异源表达策略的最新研究进展被引量：3
- 2013年
- 酶是一种高专一性的生物催化剂,在化工、农业、医药、食品、纺织、饲料等领域具有广泛应用。常见的酶表达宿主包括大肠杆菌、芽孢杆菌、丝状真菌、酵母、乳酸菌等。不同类型的表达宿主具有不同的特点,如细菌宿主可用来快速地过量表达原核来源的酶,但真核来源的大分子蛋白由于翻译后修饰的原因往往不能在细菌表达系统中正确表达,仅可以在真核表达宿主中正确表达。近年来利用不同表达宿主实现工业酶的高效异源表达取得了很大进展。本文系统总结了在不同表达宿主中实现工业酶高效异源表达策略的最新研究进展,并对工业酶高效异源表达技术的发展趋势进行了展望。
- 杨海泉刘龙李江华堵国成陈坚
- 关键词：异源表达芽孢杆菌丝状真菌乳酸菌
- 代谢工程改造酿酒酵母高效合成游离脂肪酸
- 2024年
- 该文以酿酒酵母BY4741作为底盘细胞,通过系统代谢工程改造提高游离脂肪酸(free fatty acid,FFAs)的合成。首先,通过删除酰基CoA合成酶FAA1、FAA4以及FAT1的编码基因,提高FFAs的合成,酵母工程菌株FFAs达到384.4 mg/L。进一步,通过敲除POX 1、FAA 2和PXA 2基因,破坏了酵母细胞的β-氧化途径,使细胞外FFAs进一步提高,达到了394.9 mg/L。随后,通过敲除磷脂酸磷酸酶编码基因DPP 1,LPP 1,PAH 1,降低了磷脂酸(phosphatidic acid,PA)的去磷酸化水平,上调了获得的多基因缺失的酵母工程菌(Δfaa 1Δfaa4Δfat1Δpox1Δfaa2Δpxa2Δdpp1Δlpp1Δpah1)能够产生497.3 mg/L的细胞外游离脂肪酸,以及1332.2 mg/L的总脂肪酸。通过组合代谢工程产生的平台菌株,为未来发展脂质相关的细胞工厂提供了基础。
- 朱满志陈献忠沈微杨海泉夏媛媛
- 关键词：游离脂肪酸酿酒酵母磷脂酸
- 表面展示表达植酸酶的重组酿酒酵母构建及酒精发酵
- 2015年
- 以淀粉为原料的同步糖化发酵是目前乙醇生产的主要途径之一。然而原料中含有的植酸不仅影响酒精发酵效率,而且也会导致环境中难以被植物吸收的磷含量的增加,加剧环境污染。将来源于大肠杆菌的植酸酶基因与酵母编码α-凝集素C端编码序列连接并置于α-因子分泌信号肽下游,构建植酸酶表面展示表达重组载体pMGK-AG-phy并转化工业酿酒酵母,成功获得了在细胞表面锚定表达植酸酶的重组菌PHY。重组酵母的植酸酶表达水平达到6.4 U/g(菌体湿重),其最适温度为55℃,最适pH 4.0,在pH 3.5–4.5范围内具有较高的活性。以玉米粉为原料的同步糖化发酵实验表明,重组酵母PHY的生长速度高于出发菌株,同时酒精产量相较于出发菌株提高了3.7%。更为重要的是发酵后酒糟中植酸磷含量与对照相比降低了91%。构建的表面展示表达植酸酶的重组工业酿酒酵母能够有效降低植酸含量,提高了酒糟的利用价值,减少磷排放,对燃料酒精的环境友好生产具有重要的借鉴意义。
- 肖艳陈献忠沈微杨海泉樊游
- 关键词：酿酒酵母植酸酶燃料酒精
- 纤维微菌β-1,3-葡聚糖酶的克隆表达及对灵芝细胞壁的水解作用
- 2023年
- 该文旨在研究一种酶解灵芝(Ganoderma lucidum)菌丝体从而提高其胞内蛋白提取效率的方法。通过PCR方法扩增获得纤维微菌(Cellulosimicrobium sp.)CICIM6906的β-1,3-葡聚糖酶编码基因,该基因命名为bgl6906并与表达载体连接,构建重组质粒pET28a-bgl6906,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-bgl6906。重组菌在TB培养基中进行诱导表达,表达产物在自身信号肽引导下大部分分泌到细胞外。以茯苓多糖为底物时,重组酶BGL6906纯酶比酶活力为567.8 U/mg,最适pH为5.5,最适温度为50℃。重组菌在15 L发酵罐中发酵72 h胞外酶活力达到67 U/mL。重组酶BGL6906与果胶酶交替水解灵芝菌丝体培养物,可以有效水解细胞壁,获得部分原生质体。进一步辅助短时超声波破碎可以大幅度提高灵芝胞内产物的释放。
- 杨梦莲单逸蓝沈微朱新文杨海泉陈献忠陈磊夏媛媛
- 关键词：Β-1,3-葡聚糖酶分泌表达灵芝细胞破碎
- “十二岭”青梅酒降酸技术的研究被引量：2
- 2015年
- 发酵后＂十二岭＂青梅酒的总酸含量达35~40g/L,对该酒的降酸技术进行研究,结果表明：利用阴离子交换树脂D315处理青梅酒效果最好,可使青梅酒总酸含量降为12.6g/L,产品总酸含量达到标准规定的指标,风味色泽好。
- 黄星源郭正忠杨海泉
- 关键词：青梅酒
