林强
- 作品数：144 被引量：199H指数：8
- 供职机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 嗜水气单胞菌OmpA表面呈递鳜传染性脾肾坏死病毒抗原的研究
- 由传染性脾肾坏死病毒引起的虹彩病毒病和嗜水气单胞菌引起的败血症是影响鳜养殖业的主要疫病，给鳜鱼养殖业带来严重的经济损失。由于细菌具有增殖速度快、培养耗费低等优点，因此以细菌作为病毒抗原展示系统成为多联疫苗的研究方向。
- 付小哲方翔林强郭慧芝刘礼辉吴淑勤李宁求
- 关键词：传染性脾肾坏死病毒嗜水气单胞菌抗原呈递
- 大口黑鲈蛙虹彩病毒MCP蛋白多克隆抗体的制备与应用
- 2024年
- 【目的】制备大口黑鲈蛙虹彩病毒主衣壳(MCP)蛋白兔多克隆抗体,以期为该病毒蛋白功能研究奠定基础。【方法】对pET32a(+)MCP/BL21重组大肠杆菌进行诱导表达,将重组蛋白进行纯化、复性,以此为抗原免疫大耳兔制备多克隆抗体,ELISA检测抗体效价,间接免疫荧光试验(IFA)和Western Blot法分析MCP多克隆抗体的特异性。【结果】纯化的MCP重组蛋白条带特异;间接ELISA结果显示,制备的兔多克隆抗体血清效价为1∶1024000;IFA和Western Blot检测结果表明该多抗特异性良好,能够与大口黑鲈蛙虹彩病毒MCP蛋白发生特异性反应,IFA试验表明血清最适稀释度为1∶500。【结论】成功制备了大口黑鲈蛙虹彩病毒MCP兔多克隆抗体,该抗体可特异性识别大口黑鲈蛙虹彩病毒MCP蛋白。
- 王若瑄罗霞李宁求林强牛银杰梁红茹付小哲吕爱军
- 关键词：大口黑鲈多克隆抗体
- 影响草鱼出血病疫苗免疫效果因素风险评估被引量：3
- 2014年
- 应用模糊层次分析法,并结合流行病学调查、荟萃分析和德尔菲法,构建了由评估指标体系、风险因素权重、评分标准、综合评价函数等组成的草鱼出血病免疫预防风险评估模型,其中,评估指标体系包括疫苗品质(B1)、免疫程序(B2)、鱼体(B3)、池塘环境(B4)和饲养管理(B5)共5个准则层风险因素和疫苗品种(C1)、保存温度与有效期(C2)、运输存储条件(C3)、免疫时疫苗的存放(C4)、免疫时鱼体健康状态(C5)、免疫技术(C6)、免疫剂量(C7)、漏免的鱼数(C8)、鱼种来源(C9)、健康状态(C10)、鱼体规格(C11)、水温(C12)、溶氧(C13)、氨氮(C14)、亚硝酸盐(C15)、pH值(C16)、透明度(C17)、水色(C18)、底泥厚度(C19)、载鱼量(C20)、搭配模式(C21)、药物的使用(C22)、饲料(C23)、青草投喂(C24)等24个指标层风险因素;5个准则层风险因素权重值集合为W={0.267;0.102;0.131;0.263;0.237},24个指标层风险因素绝对权重集合为W={0.138;0.059;0.046;0.024;0.035;0.018;0.027;0.022;0.040;0.054;0.037;0.076;0.037;0.032;0.030;0.027;0.018;0.019;0.024;0.104;0.024;0.027;0.062;0.020};分别建立了定性和定量评估指标的评分标准,并以综合评价函数1i疫池塘发病风险,结果显示,3个发病池塘风险值分别为0.572、0.638、0.617,处于高度风险级别,与未发病塘存在极显著差异(P<0.01),评估结果较准确,表明该模型可应用于草鱼出血病免疫预防管理和决策。
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- 关键词：草鱼出血病疫苗免疫效果风险评估模型模糊层次分析法
- 一种鳜传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法
- 本发明公开了一种鳜传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法。本发明采用同步接毒的方式，病毒与鳜脑组织细胞系CPB成悬浮状态，互相接触的表面积大，使病毒通过更多的空间受体进入细胞；病毒在细胞分裂增殖的同时侵染细胞，从而获得高...
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- 文献传递
- 一种鳜传染性脾肾坏死病毒灭活快速检验试剂盒及检测方法
- 本发明公开了一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒灭活快速检测试剂盒和检测方法。该检测试剂盒和检测方法是通过对病毒mRNA的检测来监测ISKNV是否灭活，具体步骤是将灭活疫苗半成品或成品接种CPB细胞后7天，提取细胞总RNA，去除D...
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- 文献传递
- 一株大口黑鲈（Micropterus salmoides）蛙虹彩病毒（Ranavirus sp.）及其应用
- 本发明涉及一株大口黑鲈(Micropterus salmoides)蛙虹彩病毒(Ranavirussp.)及其应用，属于生物医药技术领域。所述大口黑鲈(Micropterus salmoides)蛙虹彩病毒(Ranavi...
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- 基于病毒mRNA监测的传染性脾肾坏死病毒灭活快速检验方法建立及其应用被引量：1
- 2017年
- 为建立传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)灭活快速检验方法,从ISKNV感染CPB细胞系转录谱筛选并经q RT-PCR验证表达量最高的病毒ORF099基因作为快速检测靶基因。以质粒p MDORF099为标准品,采用q PCR方法绘制了CT值与质粒拷贝数的标准曲线,其线性方程为CT=–3.42lgx+39.455,最低检测限为3拷贝/μL,结果显示组间和组内变异系数均小于2%,表明该方法具有较高的灵敏度和较好的重复性。将ISKNV病毒悬液10倍稀释成100~103拷贝/m L,分别取1 m L病毒稀释液接种CPB细胞,在第7、9和11天提取细胞总RNA,经基因组DNA去除试剂盒去除残留DNA后采用qRT-PCR方法检测ORF099基因转录本,结果显示在第7天即可从接种1个拷贝病毒的细胞中检测出ISKNV ORF099转录本。将3个浓度梯度(0.05%、0.1%、0.2%)的甲醛灭活ISKNV制备的模拟样品以及实验室制备的3批次ISKNV细胞灭活疫苗样品接种CPB细胞9 d,采用上述快速检验方法进行检测。0.05%、0.1%甲醛灭活模拟样品可检测到ISKNV ORF099基因转录本,其他样品均未检测到。而细胞盲传实验显示,0.1%终浓度甲醛灭活ISKNV接种细胞盲传3代未出现CPE,鱼体安全实验显示接种鱼体后无临床发病症状和实验鱼死亡,表明本研究建立的病毒灭活快速检验方法比细胞盲传法和鱼体安全实验具有更高的灵敏度,与传统检测方法相比具有灵敏度高、耗时短、检测效率高等优点,对提高ISKNV灭活疫苗生产效率具有重要意义。
- 张醴溪杨圆圆方伟付小哲林强林强刘礼辉梁红茹刘礼辉吴志新梁红茹
- 关键词：传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗MRNA荧光定量RT-PCR
- 斑点叉尾鮰败血症3种病原多重PCR检测方法的建立被引量：3
- 2016年
- 【目的】建立可同时快速检测斑点叉尾鮰败血症3种病原(嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和鮰爱德华菌)的多重PCR检测方法。【方法】根据嗜水气单胞菌溶血素基因(Hly)、维氏气单胞菌脱氧核糖核酸酶Ⅰ基因(DNaseⅠ)以及鮰爱德华菌溶血活化基因(Eha)的保守序列,设计3对特异性引物,优化并建立斑点叉尾鮰败血症3种主要病原菌的多重PCR方法,对其特异性和灵敏度进行考察,并将其用于临床样品的检测。【结果】建立的多重PCR方法,当Hly基因、DNaseⅠ基因以及Eha基因的引物浓度分别为1.0,1.0和0.5μmol/L,退火温度为59.5℃时,各目的片段均可较好地扩增。特异性试验结果表明,建立的多重PCR方法可从嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和鮰爱德华菌分别扩增出1 091,262和450bp的目的片段,从多种细菌DNA的混合种也可扩增出上述目的片段,而对其他对照组的扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明,建立的多重PCR最低可分别检测出200CFU/mL的嗜水气单胞菌、300CFU/mL的维氏气单胞菌和200CFU/mL的鮰爱德华菌;对临床样本的检出率为100%,与传统生物学检测结果的符合率为100%。【结论】建立的多重PCR检测方法特异、灵敏、快速,可单独或同时检测斑点叉尾鮰败血症嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和鮰爱德华菌3种主要病原菌,也可以用于其他水生动物上嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和鮰爱德华菌的检测。
- 刘礼辉张德锋李宁求付小哲林强石存斌
- 关键词：斑点叉尾鮰败血症嗜水气单胞菌维氏气单胞菌多重PCR
- 基于层次分析法的牡蛎养殖过程中副溶血弧菌风险评估模型建立和初步应用被引量：6
- 2017年
- 副溶血弧菌是一种重要食源性致病菌,牡蛎是其主要携带者之一。为了量化评估牡蛎养殖过程中副溶血弧菌感染的风险,采用德菲尔法、层次分析法和多指标综合体系评价法,将专家经验知识和现代数学方法结合,构建了由评估指标体系、风险因素权重、评分标准、综合评价函数等组成的牡蛎养殖过程中副溶血弧菌风险评估模型。其中,评估指标体系包括水质、养殖管理、健康状况等3个准则层和水温、盐度、pH、氨氮、亚硝酸盐、溶解氧、养殖模式、养殖密度、场址选择、日常管理、细菌感染、病毒感染、寄生虫感染等13个指标层风险因素;3个准则层风险因素权重值集合为W={0.5278,0.3325,0.1396},指标层风险因素中水温(0.2270)、盐度(0.1368)和养殖密度(0.1409)等权重值较高,为影响副溶血弧菌感染的主要风险因子;分别建立了定性和定量评估指标的评分标准。以广东阳江某牡蛎养殖场为例,运用多指标综合体系评价法对该模型进行验证,得出该牡蛎养殖场春季、夏季、秋季和冬季副溶血弧菌感染发生风险概率为分别0.2281、0.5833、0.2723和0.1347,评估结果与实际调查结果相符,说明该模型可用于牡蛎养殖中副溶血弧菌感染风险估算。
- 林强李宁求付小哲刘礼辉梁红茹石存斌
- 关键词：牡蛎副溶血弧菌风险评估层次分析法
- 用于区分鳜鱼弹状病毒vRNA、cRNA和mRNA的引物组合及试剂盒
- 本发明提供了用于区分鳜鱼弹状病毒vRNA、cRNA和mRNA的引物组，所述引物组包括用于反转录的引物和用于荧光定量扩增的引物，所述荧光定量扩增的引物序列如SEQ ID NO:4～9所示。本发明通过在鳜鱼弹状病毒vRNA、...
- 林强李宁求付小哲梁红茹刘礼辉牛银杰
- 文献传递
