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表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的重组乳酸乳球菌及制法: 本发明提供的是一种表达猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteristisvirus，TGEV)纤突S蛋白的重组乳酸乳球菌的方法。根据猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融...; 唐丽杰李一经葛俊伟欧笛; 文献传递

传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统构建被引量：3: 2008年; 根据传染性胰腺坏死病毒(IPNV)VP3蛋白的全基因序列,设计并合成引物,以IPNV(ATCC VR-1318)细胞培养毒提取的核酸为模板,对传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统进行了构建研究。结果显示:进行RT-PCR扩增得到截短的VP3基因约615 bp目的片段,将其克隆到pMD18-T Simple载体,经酶切、PCR扩增和序列测定后显示目的片段正确;将目的片段分别亚克隆到乳酸菌细胞表面表达型载体和分泌表达型载体,电转化于干酪乳杆菌,获得了阳性重组菌株。结果表明,通过本实验方法可构建表达传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统,为实现IPNV VP3蛋白在乳酸菌中的表达及免疫原性研究奠定了基础。; 刘敏赵丽丽葛俊伟欧笛王相清刘弈张伟李一经; 关键词：VP3基因表达载体系统

以木糖为选择标记的乳酸菌表达载体的构建及猪细小病毒VP2基因的表达: 2010年; 为构建以木糖为选择标记的乳酸杆菌表达载体,根据GenBank登录的E.coli JM109 xylA和xylB基因序列设计引物,以E.coli JM109基因组为模板,扩增xylAB基因,与人工合成的多克隆位点序列MCS基因、去除氯霉素基因的乳酸菌载体质粒pPG2片段及以pPG2载体质粒为模板扩增的repA基因连接,电击转化于L.casei 393感受态细胞,获得以木糖为选择标记的乳杆菌表达载体并命名为pOXM2。为鉴定pOXM2载体表达蛋白的效果,以含猪细小病毒VP2基因的重组质粒pMD-VP2为模板,扩增VP2基因序列,与载体质粒pOXM2连接,产物电击转化L.casei393感受态细胞,获得阳性克隆子pOXM2-VP2。重组菌经诱导,并进行SDS-PAGE及western blot分析。结果表明,有约180ku重组蛋白得到了表达,而且表达的重组蛋白具有与天然病毒蛋白一样的免疫反应特异性。本研究结果表明已成功构建了以木糖为选择标记的乳杆菌表达载体并实现了外源基因的表达,为进一步研究以重组干酪乳杆菌作为口服疫苗或表达功能性蛋白奠定了基础。; 唐丽杰欧笛杨云清葛俊伟乔薪媛姜艳萍杨丽娟李一经; 关键词：干酪乳杆菌食品级载体

猪传染性胃肠炎病毒S蛋白在乳酸菌中的表达被引量：7: 2007年; 目的:构建猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的细胞内表达重组乳酸乳球菌,确定其最佳表达条件,为重组乳酸菌作为口服疫苗防治猪传染性胃肠炎奠定基础。方法:根据猪传染性胃肠炎病毒纤突(S)蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点,设计一对引物,进行PCR,获得含有TGEVS基因4个主要抗原位点的约2000bp目的片段,将其与表达载体质粒pNZ8048进行连接,通过电转化进入宿主菌乳酸乳球菌NZ9000细胞内,在乳链菌肽(Nisin)的诱导下进行表达,确定最佳表达条件;并通过SDS-PAGE进行检测和Western-blot分析表达蛋白活性。结果:成功获得了TGEVS蛋白在乳酸乳球菌细胞内的表达并且表达的蛋白具有TGE全病毒的抗原性。确定了乳酸乳球菌表达TGEVS蛋白的最佳表达条件为在以1ng/ml的乳链杆菌肽nisin诱导下,诱导后3h,重组蛋白表达效率达最高,重组蛋白约占菌体总蛋白含量的8.7%。结论:在乳酸乳球菌细胞内表达的重组TGEVS蛋白获得了理想表达,为进一步研制开发防治TGE口服疫苗提供物质基础。; 唐丽杰欧笛王荣军徐义刚钟涛李一经; 关键词：TGEV S蛋白乳酸菌

表达猪传染性胃肠炎病毒S基因的重组乳酸乳球菌的构建及免疫原性分析被引量：26: 2007年; 根据猪传染性胃肠炎病毒纤突(S)蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点,设计一对引物,进行PCR扩增,获得含有TGEVS基因4个主要抗原位点的约2000bp的目的片段,将其与分泌表达的载体质粒pNZ8112进行连接,通过电击转化进入宿主菌乳酸乳球菌NZ9000细胞内,在乳链菌肽(Nisin)的诱导下进行表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析,表明TGEVS蛋白在乳酸乳球菌中获得表达,所表达的TGEVS蛋白具有与TGE病毒一样的抗原特异性。间接免疫荧光试验表明重组菌表达蛋白定位于菌体表面。将表达TGEVS蛋白的重组乳酸乳球菌及空质粒菌株分别口服免疫BALB/c小鼠,收集粪便样品进行抗体检测,结果表明分泌型的重组菌pNZ8112-Sa/NZ9000免疫小鼠能够产生明显的抗TGEVsIgA抗体。; 唐丽杰欧笛葛俊伟徐义刚李一经史达夏春丽郁茵; 关键词：TGEV S蛋白乳酸乳球菌免疫原性分析

猪细小病毒VP2与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在干酪乳杆菌表面共表达被引量：2: 2009年; 将分别编码猪细小病毒(PPV)主要免疫保护性抗原VP2蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因插入乳酸杆菌细胞表面表达载体pPG中,成功构建了重组表达载体pPG-VP2-LTB,将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393,获得了表达猪细小病毒VP2-LTB融合蛋白的重组乳酸菌表达系统,经2%乳糖诱导,SDS-PAGE和Western-blot检测表明,有大小约78kD的蛋白得到了表达,具有与天然病毒蛋白一样的抗原特异性,全细胞ELISA结果表明,LTB同时获得了表达;间接免疫荧光实验及免疫胶体金定位试验结果表明,所表达的蛋白定位于干酪乳杆菌的菌体表面。本研究成果为猪细小病毒重组乳酸菌活菌口服疫苗的研制和LTB作为粘膜免疫佐剂作用的研究奠定了重要的物质基础。; 王相清欧笛任安琦葛俊伟乔薪瑗唐丽杰李一经; 关键词：猪细小病毒 VP2蛋白干酪乳杆菌共表达

猪传染性胃肠炎病毒纤突S蛋白干酪乳杆菌表达载体系统的构建被引量：2: 2007年; 根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)纤突(S)蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点,设计一对引物,进行PCR,获得含有TGEV S基因4个主要抗原位点的约2000 bp目的片段,将其分别与表达载体质粒pPG611.1和pPG612.1进行连接,通过电转化进入宿主菌Lacto-bacillus casei393细胞内,通过质粒提取、PCR鉴定、酶切鉴定和序列测定分析,表明TGEV S基因已成功插入到表达载体质粒中,获得了TGEV S蛋白干酪乳杆菌表达载体系统。; 唐丽杰王荣军钟涛徐义刚汪淼欧笛李一经; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒 S蛋白干酪乳杆菌表达载体系统

表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的重组乳酸乳球菌及制法: 本发明提供的是一种表达猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteristisvirus，TGEV)纤突S蛋白的重组乳酸乳球菌的方法。根据猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融...; 唐丽杰李一经葛俊伟欧笛; 文献传递

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欧笛