汪志军
- 作品数：5 被引量：25H指数：2
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- Cyr61真核表达载体构建及在人原代培养软骨细胞中的表达研究
- 2013年
- 目的通过体外原代培养获得人软骨细胞,将重组真核表达载体pcDNA3.1-cyr61转染人软骨细胞,探讨外源性cyr61在软骨细胞中的表达效应。方法应用机械分离联合胶原酶消化法,原代培养获得人软骨细胞,镜下观察及扫描电镜分析软骨细胞形态,Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)免疫细胞化学及甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞表型;构建pcDNA3.1-cyr61真核表达载体,Fugene介导转染人软骨细胞,Western blot验证其表达效应;RT-PCR检测重组质粒转染后软骨细胞CollagenⅡ、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)基因mRNA表达改变。结果Ⅱ型胶原免疫细胞化学、甲苯胺蓝染色及形态学分析证实原代培养获得的细胞为人软骨细胞;酶切与DNA测序显示pcDNA3.1-cyr61重组质粒成功构建,Western blot检测表明外源性cyr61重组质粒能有效表达于人原代软骨细胞,且目的蛋白cyr61表达水平较空白组细胞明显升高;cyr61重组质粒转染软骨细胞后其CollagenⅡ、AggrecanmRNA表达呈明显增高。结论 Cyr61蛋白在人原代培养软骨细胞中呈表达缺失,外源性cyr61基因能有效表达于人软骨细胞,并且能增加软骨细胞CollagenⅡ、Aggrecan基因的mRNA表达,为进一步利用cyr61基因修饰软骨细胞增强其生物学功能奠定基础。
- 朱敏潘伟波洪盾王晨汪志军范厉龙吕海燕
- 关键词：软骨细胞原代培养CYR61基因转染
- 正常人关节软骨细胞的培养及冻存复苏的影响
- 2012年
- 目的观察正常人关节软骨细胞的体外培养及冻存后再复苏对人体关节软骨细胞活性所产生的影响。方法在无菌条件下取因创伤所致离断且无再植条件残肢的关节软骨组织,采用Ⅱ型胶原酶一次消化的方法获取原代软骨细胞后进行体外培养,并经10%DMSO冻存液冻存及常规复苏,过程中均用倒置显微镜定期观察软骨细胞的形态生长变化以及复苏后细胞的存活率。结果常规消化传代后的第2～4代间贴壁时间无明显差别,但较原代明显变短,生长速度加快,在形态上仍以三角或多角形为主,传代在5代以内的软骨细胞仍能保持正常的组织学形态,且复苏后软骨细胞的存活率能达95%。结论原代培养获得的正常人体关节软骨细胞在5代以内者可以较好地保留软骨细胞的特性和活性。
- 汪志军潘伟波朱敏范厉龙
- 关键词：软骨细胞冻存
- 双歧杆菌四联活菌对肝硬化患者血浆内毒素及肠黏膜通透性的影响被引量：22
- 2012年
- 目的:探讨双歧杆菌四联活菌对肝硬化患者血浆内毒素及肠黏膜通透性的影响。方法:将76例肝硬化患者随机分为对照组和观察组。对照组患者予以常规保肝对症支持治疗;观察组在此基础上加服双歧杆菌四联活菌片3片/次,每天3次,连用6周,其他治疗同对照组。分别在治疗前后观察两组患者肝功能、血浆内毒素及肠道通透性的变化。结果:治疗4周后,两组患者肝功能(ALT、AST、TB)和内毒素水平均较治疗前明显下降(P<0.05或P<0.01)。同时两组患者血浆二胺氧化酶和D-乳酸水平均较治疗前明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:双歧杆菌四联活菌可明显降低肝硬化患者的肠黏膜通透性,改善肠黏膜屏障功能,从而降低血浆内毒素的水平,改善肝功能,具有辅助治疗肝硬化的作用。
- 汪志军汤永志燕飞陈景丹刘均艳赵海红
- 关键词：肝硬化双歧杆菌四联活菌肝功能内毒素肠黏膜通透性
- 大鼠肝脏树突状细胞的分离纯化及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的探索从SD大鼠肝脏组织中直接提取树突状细胞(dendritic cell,DC)以供研究的方法。方法对SD大鼠肝脏先行二步灌流法灌流,再予密度梯度离心法离心,从而获得肝脏组织非实质细胞,接着应用大鼠树突状细胞特异性抗体OX62单抗分选出肝脏组织来源的树突状细胞,并且在光学显微镜及电子显微镜下观察其细胞形态,再结合流式细胞仪鉴定树突状细胞的表型。结果单只SD大鼠肝脏组织中可获得(0.7～1.0)×106个细胞,OX62单抗阳性率在60.92%～88.71%之间,顺利经过了其形态学及特异性表面标志角度的鉴定。结论初步建立了从SD大鼠直接分离提取肝脏组织树突状细胞的方法,为后期研究打下一定的基础。
- 燕飞汪志军李运华朱坚胜朱敏汤永志
- 关键词：肝脏树突状细胞
- 埃可病毒30型重组蛋白vp1表达及其在病原检测中的应用被引量：1
- 2012年
- 目的 表达埃可病毒30型vp1重组蛋白,建立埃可病毒特异性抗体的检测方法.方法 采用反转录聚合酶链反应(rt-pcr)方法获得埃可病毒vp1cdna,克隆至原核表达载体pet44a中表达,并用纯化的重组蛋白检测血清中埃可病毒抗体.结果 表达的重组蛋白vp1相对分子质量约为95 000,经western blot和酶联免疫吸附试验证实其具有良好的抗原性.结论 基因工程重组融合蛋白vp1可以作为诊断用抗原.
- 朱坚胜阮仙利汪志军周林福王昕昕王丽珍陈华忠王赓歌
- 关键词：重组蛋白质类酶联免疫吸附测定埃可病毒
