泮结超
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
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- 结核杆菌H37Rv株重组PstS1蛋白的表达纯化及其免疫反应性分析被引量：2
- 2011年
- 目的表达、纯化结核杆菌H37Rv株重组PstS1(简称rPstS1)蛋白,为结核病血清学诊断价值研究及亚单位疫苗研制提供物质基础。方法重组质粒pET15b-PstS1转化大肠埃希菌表达菌株BL21(DE3)plysE,IPTG诱导rPstS1蛋白表达。经SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定后,优化表达条件,用镍离子鳌合亲和层析柱纯化rPstS1蛋白,并用斑点金免疫渗滤法评价纯化蛋白的免疫反应性。结果成功构建了重组质粒pET15b-PstS1,相对分子质量为38×103的rPstS1蛋白约有30%以可溶性蛋白形式表达,经亲和层析后的rPstS1蛋白纯度为94.8%,有较好的免疫反应性。结论构建的重组质粒pET15b-PstS1能高效表达有免疫反应性的rPstS1蛋白,经亲和层析后可得到高纯度的纯化蛋白。
- 石君帆宋广忠泮结超漏磊君李召东
- 关键词：亚细胞定位结核
- 结核分枝杆菌融合蛋白血清学诊断价值评价
- 目的:研究融合蛋白ESAT6-38KDa-16KDa对结核病的血清学诊断价值,并与脂阿拉伯甘露糖抗原(LAM)及结核蛋白芯片的检测结果做比较,评价其应用价值。方法:表达、纯化重组融合蛋白,并分别以此和LAM为抗原包板,以...
- 漏磊君宋广忠泮结超石君帆丁建祖杨明瑾
- 关键词：融合蛋白ELISA
- 结核分枝杆菌rPstS1-HspX融合蛋白的表达、纯化及其免疫反应性分析被引量：1
- 2011年
- 目的构建结核分枝杆菌rpstS1-hspX（rph）融合基因及其原核表达载体pET-23b（＋）-rpstS1-hspX[pET-23b（＋）-rph]，表达、纯化rPstS1-HspX（rPH）融合蛋白，并分析其免疫反应性。方法采用基因拼接技术将PstS1和HspX编码基因通过多肽接头（GSGSG）的DNA序列进行连接，构建融合基因rph。将融合基因定向克隆人原核表达载体pET．23b（＋），构建重组原核表达质粒pET-23b（＋）-rph。将重组质粒转化大肠杆菌E-coli BL21（DE3）pLysE感受态细胞，IPTG诱导融合蛋白表达。SDS—PAGE和Western印迹法鉴定其表达情况。用镍离子鳌合亲和层析柱纯化融合蛋白，Western印迹法初步评价融合蛋白的免疫反应性。结果融合基因rph及其原核表达载体pET-23b（＋）-rph构建成功。融合蛋白rPH主要以可溶性非包涵体形式表达，相对分子质量为51000，表达量约占菌体总蛋白的23％。经亲和层析后得到了纯度达92％的融合蛋白。Western印迹证实融合蛋白能与结核病阳性血清发生特异性免疫反应。结论成功构建了原核表达载体pET-23b（＋）-rph，获得了rPH融合蛋白，为rPH融合蛋白在结核病诊断中的应用提供了依据。
- 宋广忠石君帆泮结超漏磊君李召东
- 关键词：结核分枝杆菌融合基因融合蛋白纯化免疫反应性
- 结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10融合蛋白的制备及其血清学诊断价值被引量：4
- 2010年
- 目的 表达、纯化结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10（rEC）融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的应用价值.方法 用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白,用ELISA法检测血清样本中的抗结核抗体,以37例PPD阴性患者正常血清A492＋2s为正常限值,评价rEC诊断的特异性及灵敏度.结果 rEC融合蛋白在大肠埃希菌中以可溶性非包涵体形式表达,表达浓度为0.19 mg/mL.rFC检测抗结核抗体在PPD阳性健康人群中的特异性为100%（30/30）,在痰涂片或细菌培养阳性和两法均阴性的结核病患者中灵敏度分别为75.56%（34/45）和67.3]%（35/52）.结论 结核分枝杆菌rEC融合蛋白以可溶性形式高效表达,具有较强的免疫反应性和较高的血清学诊断价值.
- 石君帆宋广忠泮结超漏磊君杨明瑾李召东
- 关键词：血清学诊断
- 结核杆菌重组抗原的克隆表达及其
- 石君帆曾肖芃宋广忠丁建祖闻礼永杨明瑾漏磊君严晓岚泮结超楼涤
- 简要技术说明本研究通过克隆表达及纯化结核杆菌H37Rv重组抗原及蛋白ESAT-6、Pst-S1、CFP10、KatG、CW、LAM等作为靶抗原，对其免疫原性进行鉴定，检测结核病人TB患者血清，观察其在免疫学诊断中的敏感性...
- 关键词：
- 关键词：抗原
- 单克隆抗体的制备及其应用研究进展被引量：2
- 2009年
- 抗体是机体免疫系统的重要效应分子,从第一代多克隆抗体(polyclonal antibody,PcAb)到第二代单克隆抗体的成功制备,人们投入了大量的临床应用研究。
- 泮结超石君帆
- 结核杆菌重组抗原的克隆表达及其免疫学诊断价值的研究
- 石君帆曾肖芃宋广忠丁建祖闻礼永杨明瑾漏磊君严晓岚泮结超楼涤
- 该研究通过克隆表达及纯化结核杆菌H37Rv重组抗原及蛋白ESAT-6、Pst-S1、CFP10、KatG、CW、LAM等作为靶抗原，对其免疫原性进行鉴定，检测结核病人TB患者血清，观察其在免疫学诊断中的敏感性和特异性。并...
- 关键词：
- 关键词：免疫学诊断基因工程
- 结核分枝杆菌融合蛋白ELISA方法检测被引量：1
- 2012年
- 目的探讨融合蛋白ESAT6-38kDa-16kDa对结核病的血清学诊断价值,并与脂阿拉伯甘露糖抗原(LAM)及结核蛋白芯片方法的检测结果进行比较,评价其应用价值。方法表达、纯化重组目的蛋白,分别以此蛋白和LAM为抗原包板,以酶标抗体为二抗,采用ELISA间接法检测肺结核患者血清、肺外结核患者血清及正常人血清,比较敏感性、特异性等,评价其对结核病的诊断价值。结果融合蛋白ESAT6-38kDa-16kDa、LAM、血清及酶标抗体的最佳工作稀释度分别为1、0.5μg/mL,1∶100、1∶4 000;分别用ESAT6-38kDa-16kDa和LAM检测761份结核病人血清,敏感性分别为76.9%、77.4%,特异性为89.2%、89.5%,差异均无统计学意义;ELISA法检测68份肺结核病血清标本融合蛋白,阳性检出率和阴性符合率与芯片检测结果有极高一致性。结论融合蛋白ESAT6-38kDa-16kDa作为抗原对结核病血清学诊断具有一定应用价值。
- 泮结超石君帆丁建祖漏磊君宋广忠杨明瑾范超明
- 关键词：融合蛋白酶联免疫吸附试验
- 结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10融合蛋白的构建和表达及其免疫反应性分析被引量：2
- 2011年
- 目的构建结核分枝杆菌H37Rv株esat．6-cfp-10（简称ec）融合基因及其原核表达载体pET-23b（＋）．esat．6-cfp-10[以下简称pE％23b（＋）-ec]，表达、纯化融合蛋白rESAT-6-CFP-10（简称rEC），并分析其免疫反应性。方法采用基因拼接技术将ESAT-6和CFP-IO编码基因用疏水甘氨酸接头（Gly4Ser），进行PCR扩增融合。构建TA克隆载体pMDR19-T-esat-6-cfp-10（简称pMD-19-T-ec），利用PCR、酶切和测序进行鉴定。经限制性内切酶NdeI、XhoI双酶切后将融合基因定向克隆入原核表达载体pET-23b（＋）。将构建正确的重导组质粒pET-23b（＋）-ec转化E-coliBL21（DE3）pLysE，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPm）诱导rEC的表达。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹法分析其表达情况。用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白。用Western印迹初步评价融合蛋白的免疫反应性。结果融合基因及其原核表达载体构建成功，融合蛋白以可溶性非包涵体形式表达，相对分子质量为21000，表达量约占菌体总蛋白的35％。经亲和层析后得到了纯度达97．2％的融合蛋白。Western印迹证实，融合蛋白能与确诊的肺结核患者血清发生特异性免疫应答。结论成功构建了原核表达载体pET-23b（＋）-ec，获得了rEC融合蛋白，为rEC融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础。
- 宋广忠石君帆漏磊君李召东泮结超John T.Belisle
- 关键词：融合基因
- 结核分支杆菌重组蛋白rCFP-10的表达、纯化及免疫反应性分析
- 2009年
- 目的表达、纯化结核分支杆菌H37Rv株重组蛋白rCFP—10，评价其免疫反应性，为结核病血清学诊断价值研究及亚单位疫苗研制提供物质基础。方法重组质粒pET23b—CFP-10转化E．coli表达菌株BL21（DE3）pLysE，IPTG诱导重组蛋白rCFP-10表达。经SDS—PAGE电泳和Westernblotting鉴定后，优化表达条件用镍离子鳌合亲和层析柱HisTrap^TMHP纯化重组蛋白，最后用斑点金免疫渗滤法初步评价纯化蛋白的免疫反应性。结果成功构建了重组质粒pET23b—CFP-10并且重组蛋白rCFP-10以可溶性形式高效表达，表达量约占菌体总蛋白的10％。经亲和层析后得到高纯度有免疫反应性的重组蛋白（纯度约为98．5％）。结论高纯度有免疫反应性的重组蛋白rGFP-10为新型亚单位疫苗的研发及其结核病血清学诊断价值研究奠定了基础。
- 宋广忠石君帆泮结超杨明瑾漏磊君John T. Belisle
- 关键词：CFP-10血清学诊断亚单位疫苗结核
