王凌凤
- 作品数：13 被引量：32H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 西尼罗病毒prM基因可溶性表达与抗原性鉴定
- 为进行西尼罗病毒(WNV)NY99株prM蛋白的免疫学研究,通过PCR方法扩增WNV NY99株prM基因,并将其克隆至原核表达载体pMALTM-c2X上,构建重组表达质粒pMALTM-c2X-prM,经IPTG诱导后得...
- 赵晶秦永丽孙恩成杨涛徐青元耿宏伟王凌凤蔡绪禹魏鹏王文世步志高吴东来
- 文献传递
- 西尼罗病毒prM基因可溶性表达与抗原性鉴定
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- 蓝舌病病毒17型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定被引量：13
- 2011年
- 为制备蓝舌病病毒(BTV)血清17型VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究用原核表达系统部分重叠表达的两段VP2蛋白共同免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术获得杂交瘤细胞,通过以重组VP2蛋为白包被抗原的间接ELISA筛选获得2株稳定分泌抗BTV17 VP2蛋白的MAbs杂交瘤细胞株,分别命名为3F4和4H10。Ig亚类鉴定2株MAbs均为IgG1/κ链。Western blot证明,2株MAbs均能识别重组VP2蛋白。间接免疫荧光试验表明:2株MAbs均与BTV17呈阳性反应,其中MAb 3F4与BTV1、BTV2、BTV3、BTV5、BTV8、BTV11、BTV13、BTV16、BTV23、茨城病病毒(IBAV)、牛轮状病毒(BRV)、牛呼肠孤病毒(RV)均呈阴性反应,但与BTV10和BTV24呈弱阳性反应。利用合成多肽对VP2抗原表位鉴定结果表明,MAb 3F4识别的抗原表位为540DPWNNR545,MAb 4H10识别的抗原表位为540DPWNNRA546。本研究结果为建立BTV17型特异性检测方法及VP2功能研究奠定了基础。
- 王凌凤杨涛孙恩成耿宏伟秦永丽赵晶蔡绪禹刘霓红李文京吴东来
- 关键词：VP2单克隆抗体抗原表位
- 5种脑炎类人兽共患病病毒多重PCR检测方法的建立
- 蔡绪禹康晓平刘洪李裕昌孙恩成王凌凤杨涛刘霓红步志高李文京杨银辉吴东来
- 蓝舌病病毒17型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定
- 蓝舌病(bluetongue,BT)是一种由蓝舌病病毒(bluctongue virus,BTV)引起的通过库蠓等昆虫传播的非接触性病毒性动物传染病。主要感染反刍动物,为畜牧业带来巨大的经济损失,是国内外动物疫病防疫监测...
- 王凌凤
- 关键词：单克隆抗体抗原表位原核表达
- 西尼罗病毒C基因可溶性表达与抗原性鉴定
- 孙恩成杨涛徐青元耿宏伟王凌凤蔡绪禹赵晶秦永丽魏鹏王文世步志高吴东来
- 蓝舌病病毒群特异性单克隆抗体的制备
- 本研究以原核表达的血清型17型蓝舌病病毒(BTV-17)的VP7蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,通过常规杂交瘤技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合,以BHK-21细胞繁殖的血清型12型蓝舌病病毒
- 耿宏伟杨涛马健男孙恩成王凌凤魏鹏秦永丽吴东来
- 抗东方马脑炎病毒结构蛋白E2单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定被引量：2
- 2011年
- 为制备抗东方马脑炎病毒(EEEV)结构蛋白E2的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究以Bac-to-Bac真核表达系统表达EEEV E2蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。以原核表达载体pET-30a表达并纯化的EEEV E2蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,获得4株稳定分泌抗EEEV E2蛋白MAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为6F3、6F11、7C11、8B11。Western blot与间接免疫荧光试验结果表明,获得的4株MAbs均与EEEV呈阳性反应,而与西方马脑炎病毒、乙型脑炎病毒以及登革热病毒1型～4型呈阴性反应。利用部分重叠的原核表达的短肽对E2蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb 6F11、7C11和8B11识别的抗原表位均为E-33(321EGLEYTWGNHPPKRVW336),而MAb 6F3无短肽与其反应,推测可能为构象表位。本研究结果为建立EEEV型特异性检测方法、研究E2蛋白结构功能及该病的进一步防制奠定了基础。
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- 关键词：东方马脑炎病毒E2蛋白原核表达真核表达单克隆抗体抗原表位
- 5种脑炎人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的建立被引量：9
- 2011年
- 为建立同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)5种人兽共患脑炎病病毒的多重RT-PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列设计特异引物,通过优化引物组合及PCR反应条件,建立可同时检测5种病毒的方法,扩增片段长度分别为411 bp(JEV)、945 bp(TBEV)、193 bp(EEEV)、545 bp(WEEV)和769 bp(CHIKV);该方法具有良好的特异性,对病毒核酸最低检测拷贝数分别为7.1×103、3.6×103、2.2×103、5.6×103和5.1×103。该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,为以上5种人兽共患脑炎病病毒提供快速检测手段。
- 蔡绪禹康晓平刘洪李裕昌孙恩成王凌凤杨涛刘霓红步志高李文京杨银辉吴东来
- 关键词：流行性乙型脑炎病毒森林脑炎病毒东方马脑炎病毒基孔肯雅病毒多重RT-PCR
- 西尼罗病毒C基因可溶性表达与抗原性鉴定
- 为进行西尼罗病毒(WNV)NY99株C蛋白的免疫学研究,通过PCR方法扩增WNV NY99株C基因,并将其克隆至原核表达载体pMALTM-c2X上,构建重组表达质粒pMALTM-c2X-C,经IPTG诱导后得到可溶
- 孙恩成杨涛徐青元耿宏伟王凌凤蔡绪禹赵晶秦永丽魏鹏王文世步志高吴东来
