王凡 作品数:10 被引量:21 H指数:2 供职机构: 湖南中医药大学 更多>> 发文基金: 湖南省自然科学基金 湖南省中医药科研计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
三种补肾方含药血清对衰老骨髓间充质干细胞中COLⅠ和ALP的影响 被引量:1 2022年 目的研究健骨二仙丸、金匮肾气丸和六味地黄丸含药血清对衰老骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化过程中Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠ,COLⅠ)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达的影响,探讨3种补肾方治疗骨质疏松症的机制。方法将40只SD大鼠分为健骨二仙丸组、金匮肾气丸组、六味地黄丸组、空白对照组,每组10只。分别灌胃75.9 g/kg健骨二仙丸、89.1 g/kg金匮肾气丸、85.8 g/kg六味地黄丸和等体积生理盐水,每天定时灌胃2次,连续7 d,制备含药血清。用H_(2)O_(2)将P3代BMSCs处理成衰老细胞,采用β-半乳糖苷酶染色进行观察。衰老BMSCs分为6组:模型组、诱导组、健骨二仙丸含药血清组、金匮肾气丸含药血清组、六味地黄丸含药血清组、空白血清组,于诱导第4、8、12、16天采用Real-time PCR法和Western blot法检测COLⅠmRNA及蛋白表达水平,并在第4、8天时收集细胞上清液检测ALP活性。结果衰老BMSCs被β-半乳糖苷酶染色成深蓝色,而正常细胞颜色无明显改变。在第4、8、12、16天,与模型组比较,诱导组、空白血清组COLⅠ表达水平均升高(P<0.05);与诱导组、空白血清组比较,健骨二仙丸含药血清组、金匮肾气丸含药血清组COLⅠ表达水平均升高(P<0.05)。在第4、12天,与诱导组相比较,六味地黄丸含药血清组COLⅠ表达水平升高(P<0.05)。在第4、8天,与模型组比较,诱导组、空白血清组ALP活性表达均明显升高(P<0.05)。与诱导组、空白血清组比较,健骨二仙丸含药血清组、金匮肾气丸含药血清组、六味地黄丸含药血清组ALP活性表达明显升高(P<0.05)。结论健骨二仙丸、金匮肾气丸和六味地黄丸均能增加衰老BMSCs成骨分化过程中COLⅠ的表达和ALP活性。 黄勇 董克芳 王凡 杨强健关键词:健骨二仙丸 基于分子对接及实验验证探讨骨碎补总黄酮与脂肪因子结合防治绝经后骨质疏松症的作用机制 被引量:2 2022年 目的:通过分子对接技术及动物实验探究骨碎补总黄酮与脂肪因子结合防治绝经后骨质疏松症的作用机制。方法:从TCMSP数据库中筛选骨碎补总黄酮的有效成分,使用Autodook Tools对有效成分与脂联素(ADP)、瘦素(LEP)进行分子对接计算;将40只雌性SD大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、西药组、中药组,每组10只。采用背侧入路双侧卵巢摘除手术构造去势大鼠模型,造模2个月后连续给予相应药物干预12周,使用双能X线骨密度仪测定骨密度(BMD);采用ELISA法检测各组大鼠血清ADP、LEP、雌二醇(E_(2))水平。结果:分子对接结果提示骨碎补总黄酮有效成分中有6种成分与LEP具有较好的结合活性,有8种成分与ADP具有较好的结合活性。动物实验研究表明,与空白组比较,模型组大鼠BMD及血清E_(2)、ADP、LEP含量均明显降低(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组大鼠BMD及血清E_(2)含量均明显升高(P<0.05),西药组大鼠血清LEP含量明显升高(P<0.01),中药组大鼠ADP含量明显降低(P<0.01);与西药组比较,中药组大鼠血清E_(2)、LEP、ADP含量均明显降低(P<0.01),而中药组大鼠BMD与西药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:骨碎补总黄酮可能通过改善E_(2)分泌、调控ADP的表达、延缓BMD的流失来防治绝经后骨质疏松症。 吴睿哲 吴洁 刘凯 葛殊玮 伍强 王凡 曾景奇关键词:骨碎补总黄酮 绝经后骨质疏松症 脂肪因子 分子对接 基于分子对接及实验验证研究补肾健脾活血方通过Wnt信号通路防治骨质疏松症的作用机制 被引量:1 2022年 目的:通过分子对接技术及细胞实验探究补肾健脾活血方对过表达Wnt信号通路抑制性蛋白Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)及硬化蛋白(Sost)的MG63细胞中Wnt信号通路相关蛋白表达的影响,以探究补肾健脾活血方防治骨质疏松症(OP)的作用机制。方法:从TCMSP、BATMAN、Uniport数据库中筛选转化补肾健脾活血方的有效成分,GeneCards数据库中检索OP相关靶点,构建“成分-靶点-疾病”网络,使用CytoNCA插件对网络进行拓扑分析,筛选核心药物成分,使用Autodock Tools对有效成分与DKK-1及Sost进行分子对接计算;使用含药血清培养通过过表达质粒转染上述两种抑制性蛋白转染的MG63细胞,微量酶标法测定血清干预后细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性,流式细胞仪检测细胞钙离子浓度,Western blotting法检测Wnt3a、β-catenin的表达。结果:补肾健脾活血方主要活性成分中排名前5的活性成分与DKK-1均具有较好的结合活性,有2种成分与Sost具有较好的结合活性;ALP水平方面,除空载对照组外,经含药血清干预的细胞ALP水平较空白血清干预细胞升高(P<0.01);含药血清干预的各组细胞钙离子浓度均较经空白血清干预细胞降低(P<0.05);除过表达DKK-1+Sost组外,含药血清干预的细胞中Wnt3a及β-catenin蛋白水平较空白血清干预的细胞升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:补肾健脾活血方可能通过提高Wnt3a蛋白的表达量,抑制DKK-1及Sost对Wnt信号通路的抑制作用,影响成骨细胞中Wnt信号通路的表达,从而提高成骨细胞的活性及分化能力,以防治OP。 吴睿哲 吴洁 刘凯 葛殊玮 伍强 曾景奇 王凡关键词:骨质疏松症 补肾健脾活血方 WNT信号通路 分子对接 MG63细胞 基于加权基因共表达网络分析和分子对接探讨青娥丸治疗腰椎间盘突出症的作用机制 2024年 目的:基于加权基因共表达网络分析和分子对接探讨青娥丸治疗腰椎间盘突出症(lumbar disc herniation,LDH)的作用机制。方法:通过GEO数据库获取LDH相关数据集GSE124272,采用R软件构建加权基因共表达网络;通过模块基因与性状的关联分析筛选关键模块,以及模块基因与表型数据的关联分析筛选重要基因。利用中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)、中药分子机制生物信息学分析工具(Bioinformatics Analysis Tool for Molecular Mechanism of Traditional Chinese Medicine,BATMAN-TCM)数据库检索青娥丸的活性成分,基于Uniprot数据库筛选活性成分的作用靶点,采用Cytoscape软件构建“药物-活性成分-靶点”网络。通过DisGeNET、GeneCards数据库获取LDH疾病靶点,将其与模块基因、青娥丸靶点取交集,作为青娥丸治疗LDH的关键靶点;采用R软件进行基因本体(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析;采用AutoDockTools软件进行分子对接验证。结果:GSE124272数据集共涉及5495个基因,blue模块(R=0.63,P=0.008)可能是LDH的关键模块,筛选得到310个重要基因。青娥丸活性成分65个,排名前5的活性成分是补骨脂素、鞣花酸、原人参二醇、异补骨脂素、槲皮素。青娥丸作用靶点997个,LDH疾病靶点1127个,与关键模块基因取交集得到5个关键靶点,包括丝裂原活化蛋白激酶14(mitogen activated protein kinase 14,MAPK14)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)等。KEGG富集分析筛选得到125条通路,包括MAPK信号通路、破骨细胞分化、细胞凋亡等。分子对接显示,青娥丸关键成分与关键基因有较强的结合活性。结论:青娥丸可能通过补骨脂素、鞣花酸、原人参二醇等活性成分作用于MAPK14、MMP-9、IL-1β等关 金晖 葛殊玮 彭广 吴洁 吴睿哲 曾景奇 王凡关键词:青娥丸 GEO 分子对接 孙达武教授治疗老年性骨质疏松症临证经验 2024年 “全国十大骨伤名师”孙达武教授从事中医药防治骨伤科疾病七十余年,临证经验丰富,主张从脾肾论治骨伤科疾病,认为老年性骨质疏松症的主要病因病机为肝肾亏虚,脾失健运,先后天不足而致筋骨失养、痿废不用,因虚致瘀而出现骨骼脆性增加、周身肌肉疼痛。治疗上运用补肾健脾活血法,重在补益脾肾二脏,兼以活血化瘀止痛。附验案1则,以资佐证。 彭广 葛殊玮 王凡 孙绍裘关键词:骨痿 老年性骨质疏松症 补肾健脾活血法 名医经验 经皮穿针治疗GartlandⅢ型小儿肱骨髁上骨折的临床观察 被引量:2 2011年 肱骨髁上骨折是儿童肘部最常见的骨折。本病可分为伸直型和屈曲型;合并神经血管损伤及造成后遗症的的几率同样占肘部损伤中的首位。由于本病常合并神经、血管损伤,如处理不当,易发生关节功能障碍、肘内翻畸形及缺血性挛缩等,将给患儿留下严重的后遗症[1]。 于淼 孙绍裘 徐无忌 王凡关键词:小儿 肱骨髁上骨折 三种补肾方含药血清对衰老骨髓间充质干细胞成骨分化及Runx2表达的影响 被引量:2 2023年 目的探究3种补肾方(健骨二仙丸、六味地黄丸、金匮肾气丸)含药血清对衰老骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化及Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor2,Runx2)表达的影响,研究3种补肾方治疗骨质疏松症的机制。方法将40只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组(等体积生理盐水)、健骨二仙丸组(75.9 g/kg)、六味地黄丸组(85.8 g/kg)及金匮肾气丸组(89.1 g/kg),每组10只,分别灌胃用于制备含药血清。建立对数增长的P3代BMSCs。500μmol/L 30%H_(2)O_(2)处理以建立氧化衰老BMSCs模型。cck-8法检测衰老BMSCs代谢活性。衰老BMSCs分为模型组、诱导组、空白血清组、健骨二仙丸含药血清组、六味地黄丸含药血清组、金匮肾气丸含药血清组,共6组。在诱导第4、8、12、16天,观察各组细胞形态学变化,Western blot法检测Runx2蛋白表达,RT-PCR法检测Runx2 mRNA相对表达量。结果与正常BMSCs比较,H_(2)O_(2)处理后的BMSCs活性显著降低(P<0.05)。对比模型组,诱导组和空白血清组衰老BMSCs在分化过程中,茜素红染色增多;对比诱导组及空白血清组,各含药血清组衰老BMSCs在分化过程中,茜素红染色增多;且除模型组外,各组随着时间推移,茜素红染色不断增加。在第4、8、12、16天,对比模型组,诱导组、空白血清组Runx2 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);对比诱导组、空白血清组,健骨二仙丸含药血清组、金匮肾气丸含药血清组Runx2 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05)。在第4、8、12天,对比诱导组,六味地黄丸含药血清组Runx2 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。在第4、12、16天,对比空白血清组,六味地黄丸含药血清组Runx2 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论健骨二仙丸、六味地黄丸、金匮肾气丸均可促进Runx2的表达,并促进衰老BMSCs往成骨方向分化。 杨强健 董克芳 王凡 林少如 黄勇 李为关键词:健骨二仙丸 金匮肾气丸 成骨分化 独活寄生汤联合中药封包治疗寒湿痹阻型腰椎间盘突出症临床观察 被引量:4 2023年 目的:观察独活寄生汤联合中药封包治疗寒湿痹阻型腰椎间盘突出症的临床效果。方法:选取符合纳入标准的寒湿痹阻型腰椎间盘突出症患者60例,按随机数字表法分为两组各30例。对照组行中药封包治疗,治疗组在对照组基础上加用独活寄生汤治疗,两组治疗周期均为3周。比较两组患者治疗前后视觉模拟量表(VAS)评分、日本骨科协会评估治疗分数(JOA)评分、Oswestry功能障碍指数问卷表(ODI)评分。结果:治疗3周后,治疗组总有效率为93.33%,高于对照组的73.33%(P<0.05);治疗后,两组患者的VAS、JOA与ODI评分明显改善(P<0.05),且治疗组各评分改善优于对照组(P<0.05);治疗结束1个月后,治疗组复发率为3.57%,对照组复发率为27.27%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:独活寄生汤联合中药封包治疗寒湿痹阻型腰椎间盘突出症效果较好,可改善患者功能障碍情况,提高生活质量,明显缓解疼痛,降低复发率。 伍强 孙绍裘 彭广 吴洁 金晖 葛殊玮 曾景奇 王凡关键词:腰椎间盘突出症 中药封包 寒湿痹阻 独活寄生汤 红景天苷抵抗骨细胞凋亡的作用和对绝经后骨质疏松患者的影响 被引量:9 2020年 目的研究红景天苷通过缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)介导的自噬抵抗骨细胞凋亡的作用机制及对绝经后骨质疏松患者的影响。方法 (1)将纳入的绝经后骨质疏松患者随机分为2组:对照组和试验组,各30例。对照组每天口服给予钙尔奇D1片(每片含钙600 mg、维生素D 125 U),试验组在对照组基础上加服红景天苷煎剂20 g,1次/天,治疗3个月。测定2组患者治疗前后腰椎和股骨的骨密度(BMD)、血清氧化应激(ROS)水平。(2)体外培养MLO-Y4骨细胞系,将细胞分为5组:正常组(不加任何处理),西药组(醋酸泼尼松5μg·mL^-1),联合组(醋酸泼尼松5μg·mL^-1+红景天苷20μmol·mL^-1),第1干预组(联合组基础上+inhibitor-NC)和第2干预组(联合组基础上+HIF-1αinhibitor)。以荧光法检测细胞内ROS水平,以流式细胞术检测细胞凋亡,以蛋白质印迹法检测HIF-1α、Beclin-1、噬微管相关蛋白3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)和自噬微管相关蛋白3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白表达量。结果 (1)试验组和对照组患者的ROS分别为(415.27±89.61)和(784.59±106.84)pg·mL^-1;这2组的股骨BMD分别为(0.87±0.04)和(0.77±0.04)g·cm^-2;这2组的腰椎BMD分别为(0.99±0.04)和(0.86±0.02)g·cm^-2;试验组与对照组相比,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05)。(2)正常组、西药组、联合组、第1干预组和第2干预组的细胞凋亡率分别为(9.27±1.24)%,(36.42±2.63)%,(16.35±1.56)%,(16.35±1.56%)和(31.71±2.83)%;西药组与正常组比较,或联合组与西药组比较,或第2干预组与第1干预组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常组、西药组、联合组的HIF-1α蛋白表达量分别为0.85±0.04,0.55±0.04和0.70±0.05;西药组与正常组比较,或联合组与西药组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常组、西药组、联合组、第1干预组和第2干预组细胞的Beclin-1蛋白表达量分别为0.85±0.04,0.57±0.06,0.76±0.08,1.02±0.14和0.70±0.09;这5组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值分别为 张申尧 董克芳 王凡关键词:红景天苷 骨质疏松 氧化应激 自噬 综合治疗慢性骨髓炎合并足及足趾畸形30例 2011年 慢性骨髓炎(chronic osteomyelitis)是由化脓性细菌经血液循环或由外伤直接侵入骨组织引起的感染。其特点是感染引起骨组织增生、硬化、坏死,形成死骨、死腔、窦道,脓肿反复发作,缠绵难愈,病程漫长,有的可长达数十年, 王凡 刘振云 于淼关键词:骨髓炎 足畸形 中西医结合疗法