王瑜伟
- 作品数：32 被引量：28H指数：2
- 供职机构：重庆市中医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学历史地理更多>>
- 膳食节律和昼夜节律与儿童青少年心血管健康关联及机制的研究进展
- 2023年
- 儿童血压升高会导致儿童期的血管损伤、心脏代谢风险和器官损伤等不良健康效应,而且会增加个体成年后的高血压风险。肥胖已被认为是儿童血压升高的重要原因,研究通过回顾与总结国内外相关文献,分析膳食节律与昼夜节律的联系,探讨昼夜节律对儿童青少年代谢健康的作用及机制,旨在为儿童青少年心血管疾病防治提供科学依据,并为今后研究提供启示。
- 王瑜伟任艳玲陈昕袁双贵梁小华
- 关键词：昼夜节律膳食心血管系统儿童
- 颗粒溶素活性肽与增强型绿色荧光蛋白融合基因真核表达质粒的构建及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建人颗粒溶素(GLS)活性肽(9ku-GLS)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因的真核表达载体,并检测其在小鼠黑色素瘤细胞B16中的表达。方法经PCR扩增9ku-GLS基因,插入质粒pBudCE4.1中,经酶切及测序鉴定正确后,亚克隆至质粒pEGFP-C1中,将融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K转染B16细胞,采用荧光显微镜及RT-PCR法检测融合蛋白的表达。结果融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K经双酶切鉴定证明构建正确,转染B16细胞24h后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光,且经RT-PCR可扩增出267bp的目的基因片段。结论已成功构建9ku-GLS与EGFP融合基因的真核表达质粒,且在B16细胞中表达了融合蛋白。
- 何永林朱道银伊正君杨春徐蕾王瑜伟
- 关键词：颗粒溶素增强型绿色荧光蛋白融合基因真核表达黑色素瘤细胞
- 人脂质运载蛋白2研究进展被引量：1
- 2009年
- 人脂质运载蛋白2（lipocalin 2，Lcn2），属于Lcn家族的新成员。它存在于人体许多正常组织细胞中，可作为运铁蛋白介导转铁途径，并与免疫炎症反应、肿瘤发生发展以及肾脏疾病有关。
- 王瑜伟王爽朱道银
- 关键词：肿瘤肾疾病
- 人颗粒溶素活性肽和小鼠白细胞介素-12基因真核穿梭共表达质粒的构建与真核表达
- 2009年
- 目的构建含分枝杆菌复制子Orim,可分泌表达人颗粒溶素相对分子质量为9000的活性肽与小鼠白细胞介素-12(mIL-12)的真核穿梭共表达质粒,并检测其蛋白表达。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得相对分子质量为9000的颗粒溶素活性肽基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,经双酶切及插入片段测序对质粒进行鉴定。同时,将mIL-12亚克隆入pBudCE4.1另一多克隆位点,构建真核共表达质粒pBudCE41-S9K/mlL-12。然后,将分支杆菌复制子Orim亚克隆入真核共表达质粒pBudCE4.1-S9K/mlL-12,形成穿梭共表达质粒。采用RT-PCR、免疫细胞化学法,检测颗粒溶素活性肽在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌。ELISA检测mIL-12的表达。结果酶切、PCR及测序鉴定证实,颗粒溶素活性肽基因插入片段正确;RT-PCR和免疫细胞化学检测表明其可以在细胞中瞬时表达;ELISA检测细胞培养上清有mIL-12表达。结论成功构建穿梭共表达质粒pBM9,并能体外表达。
- 张黎王瑜伟何永林帖儒修
- 关键词：颗粒溶素白细胞介素12真核表达
- 维甲酸核受体RARα真核表达载体的构建、突变纠正及表达
- 2009年
- 目的构建维甲酸核受体RARα真核表达载体,并检测其在人肺腺癌细胞A549中表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中提取总RNA,以RT-PCR法扩增RARαcDNA,克隆至真核表达载体pDsRed1-C1中,测序结果显示RARα第1040位A→G,导致其编码蛋白的氨基酸发生改变。通过二次PCR将其纠正,重组载体RedC1-RARα转化大肠埃希菌Top10,筛选阳性克隆做酶切及测序鉴定。脂质体瞬时转染A549细胞,在荧光显微镜下观察RARα的表达。RT-PCR法检测RARα的mRNA水平表达。结果通过RT-PCR及二次PCR得到RARαcDNA,构建其真核表达载体,脂质体瞬时转染A549细胞得到了成功表达,RARα基因产物定位于细胞核内。结论成功构建维甲酸核受体RARα真核表达载体,且证实RARα编码蛋白定位于细胞核内,本研究结果为进一步探讨结核分枝杆菌固有免疫机制奠定了基础。
- 候艳陈全王瑜伟
- 关键词：二次PCR转染
- 结核分枝杆菌RpfA蛋白的原核表达、鉴定和纯化被引量：1
- 2008年
- 目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)复活促进因子A(Resuscitation-promoting factor,ARpfA)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfA基因(1 224bp),然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32aα(+)载体连接,转入大肠杆菌Top10;阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。测序正确后,将重组质粒转化到的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了RpfA蛋白;利用His-tag in-gel Stain对表达蛋白进行鉴定,最后对目的蛋白进行纯化。结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果与文献报道一致。经SDS-PAGE分析和His-tag in-gel Stain鉴定均发现66ku处有特异性蛋白条带。结论:成功克隆并构建了RpfA基因的重组表达质粒pET32α(+)-RpfA,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础。
- 徐蕾帖儒修王爽王瑜伟李娜何永林蒋仁举
- 关键词：结核分枝杆菌克隆纯化
- 稳定表达细胞内病原体抗性基因1的RAW264.7细胞克隆的建立被引量：3
- 2009年
- 目的:构建携带细胞内病原体抗性基因1(Ipr1),以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体,并导入鼠巨噬细胞RAW264.7中表达.方法:KpnⅠ和BamHⅠ双酶切重组质粒pET32a(+)-Ipr1及真核表达载体pEGFP-C1,Ipr1基因定向克隆入pEGFP-C1载体,构建重组质粒载体pEGFP-C1-Ipr1.脂质法转染体培养的RAW264.7细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察pEGFP-C1-Ipr1融合蛋白在细胞中的表达;PCR检测Ipr1基因转录水平的表达;West-ern Blot方法验证Ipr1蛋白水平的表达.结果:酶切鉴定获得一条约4700bp空载体条带及一条约1338bp目的片段,证明pEGFP-C1-Ipr1真核表达载体构建成功.pEGFP-C1-Ipr1转染RAW264.7细胞后,Western Blot可以检测到约Mr77×103的融合蛋白在RAW264.7细胞中表达,荧光显微镜下可观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达.结论:成功构建真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1-Ipr1,获得稳定的RAW264.7-Ipr1细胞克隆可表达Ipr1,为进一步研究Ipr1的功能奠定了基础.
- 王瑜伟朱道银李娜
- 关键词：转染脂质体细胞克隆
- 夏枯草硫酸多糖下调miR-886-5p对肺结核模型大鼠的干预效果及作用机制
- 2024年
- 目的研究夏枯草硫酸多糖下调miR-886-5p对肺结核模型大鼠的干预效果及作用机制。方法50只大鼠随机选取10只为正常组,其余40只建立肺结核模型,喂养4 w后每组随机抽样2只,取肺组织苏木素-伊红(HE)染色,发现肺组织可见大量炎性细胞浸润为建模成功。建模成功后将建模成功的38只大鼠分为模型组(14只)、低剂量组(12只)、高剂量组(12只)。低剂量组给予夏枯草硫酸多糖60 mg/kg,高剂量组给予夏枯草硫酸多糖100 mg/kg,均4 d/1次,共3次。正常组、模型组给予生理盐水。各组均连续灌胃2 w。对比分析各组miR-886-5p、氨基转移酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平及转化生长因子(TGF)-β1/Smad3通路蛋白表达量。结果相比与正常组,模型组、低剂量组、高剂量组miR-886-5p、ALT、AST、TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,低剂量组、高剂量组miR-886-5p、ALT、AST、TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.05);与低剂量组相比,高剂量组miR-886-5p、ALT、AST、TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,低剂量组、高剂量组TGF-β1、Smad3表达量显著降低(P<0.05)。结论肺结核模型大鼠通过夏枯草硫酸多糖下调miR-886-5p表达后可减轻肺结核组织病变,降低炎症反应,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3通路有关。
- 蒋琳华陈秀琴王瑜伟
- 关键词：肺结核
- 小鼠单链白细胞介素-12重组卡介苗的构建与表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建携带小鼠白细胞介素-12基因的重组卡介苗(Bacille calmette-guerin,BCG),并鉴定该重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。方法:以分子生物学方法构建携带小鼠IL-12基因和分支杆菌复制子OriM的真核穿梭共表达质粒pBM12,以电转化的方式将pBM12质粒转入BCG构建重组BCG,抽提质粒进行PCR鉴定重组菌;将重组菌感染巨噬细胞,通过RT-PCR了解重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。结果:电转化方式可将pBM12导入BCG,抽提质粒鉴定出与mIL-12基因相符的目的条带。以该重组BCG感染小鼠巨噬细胞,96h后用RT-PCR法也扩增出1632bp左右的基因条带。结论:成功构建含pBM12的重组BCG。该重组BCG能向小鼠巨噬细胞递呈携带基因。
- 张黎王瑜伟何永林李娜王爽帖儒修
- 关键词：白细胞介素12重组卡介苗真核表达
- 抑制Coronin-1基因表达的siRNA载体的构建和筛选
- 2010年
- 目的:构建和筛选能高效、特异性抑制Coronin-1基因表达的siRNA表达载体。方法:提取鼠巨噬细胞总RNA,RT-PCR扩增Coronin-1基因目标序列,克隆入pSEB-HUS真核表达质粒,构建pSEB-HUS-C重组质粒。将设计、合成的3条siRNA及阴性对照分别克隆入pSEB-HUS-C,构建重组pSEB-HUS-C1、pSEB-HUS-C2、pSEB-HUS-C3及pSEB-HUS-CN质粒。将干涉质粒瞬时转染A549细胞,通过绿色荧光信号观察、实时定量PCR和Western blot法检测其对Coro-nin-1基因表达的影响。结果:经双酶切及测序证实,所构建siRNA表达载体目的基因大小、序列与预期相符。经瞬时转染A549细胞后,其中的pSEB-HUS-C3能明显抑制Coronin-1 mRNA的表达和Coronin-1蛋白的合成,抑制率分别是75.9%和75.1%。结论:成功构建并筛选出高效、特异性抑制Coro-nin-1表达的siRNA表达载体,为进一步研究Coronin-1在巨噬细胞中的作用奠定基础。
- 严莎陈全吕玉春侯艳王瑜伟
- 关键词：RNA干扰结核分支杆菌
