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王老七: 作品数：45 被引量：211H指数：7; 供职机构：河南牧业经济学院更多>>; 发文基金：河南省科技攻关计划河南省高等学校青年骨干教师资助计划项目国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学文化科学自动化与计算机技术更多>>

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猪圆环病毒Ⅱ型河南地方株ORF3的克隆及原核表达: 2014年; 为获得猪圆环病毒Ⅱ型ORF3编码蛋白,研究该蛋白的特性及功能,根据GenBank数据库中PCVⅡ的基因组序列设计引物,利用PCR从病料基因组DNA中扩增PCVⅡ河南地方株ORF3,将其克隆至表达载体pET-32a中进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测重组蛋白表达情况,采用Ni+NTA亲和纯化表达产物,透析复性后免疫日本大白兔制备多抗血清,并采用ELISA和Western blot方法检测多抗血清的效价和特异性。结果显示,PCR扩增获得全长315bp的ORF3,重组质粒经测序和双酶切证实构建正确;SDS-PAGE结果显示,ORF3能够在大肠杆菌中表达,产物的分子量约为30ku,以包涵体形式存在;纯化的重组蛋白具有较好的抗原性,制备的多抗血清抗体效价达1∶12 800以上,抗体特异性高,能与表达的ORF3编码蛋白结合。成功克隆了PCVⅡ河南地方株ORF3并实现原核表达,获得纯化的重组ORF3编码蛋白。; 郑鸣李华玮边传周王永芬王老七; 关键词：ORF3 原核表达

酶制剂对仔猪早期断奶后腹泻的影响被引量：10: 2002年; 杨雪峰聂芙蓉王老七王月影朱河水; 关键词：酶制剂仔猪早期断奶腹泻

断奶应激对仔猪免疫功能的影响被引量：11: 2007年; 将24头21日龄仔猪分为对照组和试验组,对照组14头(28日龄不断奶),分别于21、27、30、33、36、42、49日龄屠宰,每次宰杀2头,公母各1;试验组10头(28日龄开始断奶),分别于30、33、36、42、49日龄屠宰,每次宰杀2头,公母各1。结果表明:试验组与对照组相比,①仔猪在断奶后第2、5、8天,外周血淋巴细胞百分数分别下降4.6%(P>0.05)、27.0%(P<0.05)和22.0%(P<0.05);中性粒细胞百分数则分别上升10.3%(P>0.05)、50.0%(P<0.05)和28.9%(P>0.05);N/L值分别升高23.4%(P>0.05)、85.7%(P<0.01)和58.1%(P<0.05)。②仔猪断奶后第2、5天,血清γ-球蛋白含量分别下降7.9%(P>0.05)、4.8%(P>0.05);在断奶后第8、14、21天分别增加2.9%(P>0.05)、27.2%(P<0.01)和18.2%(P<0.05)。③在免疫后第7天,仔猪血清SRBC抗体效价低1.61个滴度(P<0.05);免疫后第14天,低0.5个滴度。④在断奶后第2、5、8、14、21天仔猪胸腺相对重量(脏器重/体重)分别下降54.6%(P<0.05)、47.6%(P<0.01)、48.3%(P<0.05)、39.8%(P>0.05)和38.8%(P>0.05);脾脏相对重量分别下降20.4%(P>0.05)、34.1%(P<0.05)、34.4%(P<0.05)、42.3%(P<0.05)和32.1%(P>0.05);肾上腺相对重量在断奶后第2、5、8天分别升高41.0%(P<0.01)、28.2%(P<0.05)和13.2%(P>0.05)。⑤组织学观察表明,试验组仔猪肾上腺皮质部肥大,整个皮质区有大量被染成空泡的脂肪微粒;同时大量红细胞散布于皮质区的束状带。; 王老七聂芙蓉; 关键词：断奶应激仔猪免疫功能

鸡传染性法氏囊病的对流免疫电泳诊断技术被引量：2: 2001年; 本试验建立了诊断鸡传染性法氏囊病的对流免疫电泳 (CIE)技术。试验结果表明 ,该法的敏感性较琼脂凝胶沉淀试验至少高 4倍 ,并具有快速、敏感、特异等特点。鸡传染性法氏囊病 (IBD)是一种由传染性法氏囊病毒引起的急性高度传染性疾病。肉鸡感染后死亡率很高 ,通常死亡率约为 10 % - 90 % ,如并发其他疾病 ,则死亡率更高。早期快速准确的诊断是防治本病的基础。; 贾国锋王老七杜桂欣陶海静韩金峰; 关键词：传染性法氏囊病对流免疫电泳

建立环介导间接PCR同时检测3种主要猪源性病毒被引量：4: 2011年; 【目的】建立同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的环介导间接PCR方法,实现3种病毒快速检测。【方法】根据GenBank数据库中猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的核苷酸序列设计3对特异性探针,利用PCR技术分别标记于大豆Lectin基因片段的两端形成3种不同的报告基因,此标记的报告基因与3种待测靶标基因经杂交、缺口补平、环化后,采用1对引物反向PCR扩增报告基因,建立了PCV2、CSFV和PRRSV的环介导间接PCR检测方法,扩增片段大小分别为564 bp、434 bp和338 bp,该方法即可用于单病毒检测又可用于多病毒检测。【结果】灵敏度和特异性试验结果表明,无论是单病毒检测还是多病毒检测,该法都具有高度特异性,与其它病原检测无明显交叉反应;对PCV2、CSFV和PRRSV 3种病毒同时检测的底限分别为0.8、25和6.2 pg.μL-1,和单个病毒的检测灵敏度相同。利用环介导间接PCR和常规PCR对20份临床样本进行比较检测,结果表明,无论单病毒检测还是多病毒检测,其结果均与常规PCR检测结果完全一致。【结论】环介导间接PCR检测技术可用于PCV2、CSFV和PRRSV 3种病毒的同时检测,是一种简便快速、灵敏、特异的病原学诊断工具。; 郑鸣边传周王老七; 关键词：猪圆环病毒2型猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒

环介导间接PCR鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒方法的建立被引量：7: 2013年; 建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)环介导间接PCR检测方法,用于该病毒的感染检测和高致病性毒株与低致病性毒株的鉴别诊断。根据GenBank数据库中PRRSV中国流行株ORF7和ORF1a基因序列的保守性,设计2对特异性探针,分别标记于大豆Lectin基因两端,作为报告基因,经过一步链置换反应后,采用反向PCR扩增报告基因,建立PRRSV环介导间接PCR检测方法,该方法扩增HP-PRRSV可得大小为193bp和355bp的特异片段,扩增LP-PRRSV可得大小为193bp和442bp的特异片段。试验结果表明,该方法能成功鉴别HP/LP-PRRSV,可检测出5.6TCID50/mL LP-PRRSV和18TCID50/mL HP-PRRSV的病毒RNA,HP/LP-PRRSV混合感染不影响检测灵敏度,与CSFV、PPV、PRV、PCV2、ETEC和Haemophilus parasui等常见猪源性病原的检测无明显交叉反应;对20份临床样本进行比较检测,环介导间接PCR检测出14份PRRSV阳性样本,其中4份LP-PRRSV、9份HP-PRRSV和1份LP/HP-PRRSV,与常规PCR检测结果一致。环介导间接PCR是一种简便快速、灵敏、特异的病原学诊断工具,适合PRRSV感染的快速检测和HP/LP-PRRSV鉴别诊断,尤其适合HP/LP-PRRSV混合感染的鉴别。; 郑鸣李华玮边传周王永芬王老七; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒报告基因

H9N2亚型禽流感病毒和新城疫病毒混合感染环介导间接PCR鉴别方法的建立与评估被引量：6: 2019年; 根据GenBank中禽流感病毒(AIV)的HA基因和新城疫病毒(NDV)的F基因序列保守性,分别设计2条序列相邻的特异性探针,标记于不同大小的拟南芥TOC1基因片段两端,作为报告基因,建立了AIV和NDV双重环介导间接PCR鉴别方法,AIV和NDV扩增片段大小分别为200,270 bp。结果表明,所建立的方法对AIV和NDV核酸样品可扩增出特异性目的片段,而传染性法氏囊病病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡痘病毒(FPV)和鸡马立克病病毒(MDV)的核酸样品未见明显扩增;对AIV和NDV核酸样品检测的最低极限质量浓度分别为25.0,12.5μg/L;该方法特异性好、灵敏度高,2种病原同时检测不影响检测特异性和灵敏性。97份临床样本检测结果表明,环介导间接PCR对AIV和NDV的检出率分别为15.5%和27.8%,分别高于常规PCR的12.4%和23.7%,接近于SybrGreen实时PCR的15.5%和28.9%;Kappa一致性检验显示,环介导间接PCR、SybrGreen实时PCR 2种方法对AIV和NDV检测的结果高度符合,Kappa值分别为κ=0.92和κ=0.87。本试验成功建立了AIV/NDV双重环介导间接PCR检测方法,适用于临床上2种病原的快速鉴别诊断。; 郑鸣郭宏伟李华玮赵绪永王老七魏露露郑保亮王永芬; 关键词：禽流感病毒新城疫病毒

副猪嗜血杆菌间接血凝诊断液的制备被引量：5: 2007年; 【目的】建立一种便于检测副猪嗜血杆菌抗体的方法。【方法】将分离纯化的副猪嗜血杆菌5型超声裂解后,致敏双醛处理的健康绵羊红细胞,制成副猪嗜血杆菌5型间接血凝诊断液,检测该诊断液的活力及特异性。【结果】该诊断液特异性强,仅与副猪嗜血杆菌5型阳性血清发生凝集反应。活力也比较高,达到1:512以上,可以用其进行副猪嗜血杆菌疫苗免疫后抗体检测。【结论】该间接血凝诊断液成功制备为广大兽医化验人员提供一种简单、快速、经济的检测副猪嗜血杆菌抗体的方法。; 王老七陶海静杨武章; 关键词：副猪嗜血杆菌间接血凝试验诊断液

一种同步检测猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的方法: 本发明公开了一种同步检测猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的方法，利用PRRSV、PCV2和CSFV3种病毒核酸设计3对特异性探针，利用PCR制备探针标记的报告基因，然后再通过报告基因的环化和反向PCR扩增...; 边传周郑鸣王永芬王老七; 文献传递

猪干扰素α、β和γ的融合表达及活性被引量：12: 2012年; 【目的】研制高效的猪基因工程干扰素制剂用于猪病毒性和肿瘤性疾病的防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)技术将PoIFN-α、PoIFN-β和PoIFN-γ成熟肽基因进行连接,形成3种融合基因PoIFN-α/β、PoIFN-α/γ和PoIFN-β/γ,并构建到原核表达载体pET30a进行融合表达,用细胞病变抑制试验和淋巴细胞转化试验测定融合蛋白rPoIFN-α/β、rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ的生物学活性,同时与非融合干扰素rPoIFN-α、rPoIFN-β和rPoIFN-γ进行比较分析。【结果】成功构建了3种融合基因,并在大肠杆菌中实现表达,经纯化、复性得到3种具有生物学活性的融合蛋白rPoIFN-α/β、rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ。细胞病变抑制试验结果表明,无论是在Marc-145还是在PK-15细胞上,3种融合蛋白均具有较强的抗病毒活性,其抗PRRSV或VSV活性明显高于非融合的rPoIFN-α、rPoIFN-β和rPoIFN-γ,体现出一定的叠加效应;MTT法检测淋巴细胞转化试验结果显示,rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ能有效刺激淋巴细胞转化,具有良好的免疫学活性;而rPoIFN-α/β效果不明显。说明Ⅰ型与Ⅱ型PoIFN之间能协同调节免疫,而Ⅰ型的不同亚型之间无明显协同作用。【结论】3种融合干扰素具有较强的抗病毒活性,可以用于猪病毒性和肿瘤性疾病的防治,其中rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ还具有较强的免疫增强作用,可被开发成新型的免疫增强剂。; 郑鸣边传周王老七王永芬; 关键词：抗病毒活性

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