王锡忠
- 作品数：8 被引量：37H指数：4
- 供职机构：广州医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：广州市科技局重点攻关项目广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利用ELISA技术检测尘螨变应原的生物活性被引量：2
- 2006年
- 目的分析尘螨变应原溶液中抗原含量与ELISA结果的关系,探索利用ELISA技术分析变应原生物活性的方法。方法采用ELISA技术对变应原的生物活性进行动态分析,利用Excel软件分析抗原浓度与变应原活性的关系。结果当抗原含量在一定范围时,抗原含量与ELISA结果成正相关,利用双对数曲线分析抗原浓度与ELISA结果的关系,既能反映变应原的相对含量和活性,又能预测不同变应原溶液中变应原组成成分的差异。结论该方法可以用来比较尘螨变应原溶液的生物活性。
- 李文赵绮华王锡忠赖荷刘永平陈丽金
- 关键词：尘螨变应原ELISA生物活性
- 梭子蟹过敏原致敏组分的分析研究被引量：11
- 2005年
- 目的应用免疫印迹(Western blotting)的方法分析梭子蟹[Portunus pelogicus(Linnaeus)]的致敏组分,为蟹过敏原的纯化和标准化变应原疫苗的研制提供理论依据。方法取常规方法制备的梭子蟹浸出液,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,用考马斯亮蓝染色分析其抗原蛋白的组分,同时用对蟹过敏的病人血清进行免疫印迹。结果SDS- PAGE显示梭子蟹可辨有19条蛋白带,分子量在13kD-90kD之间,其中主带有9条,分子量是20.9kD、24.2kD、27.1kD、29.2kD、33.7kD、38.9kD、48.7kD、74.7kD、89.1kD。Western blotting结果表明,16例蟹过敏患者血清全部呈阳性反应,浸出液中共有5条致敏条带,其中分子量在74.4kD、48.7kD的是主要致敏组分,阳性反应率均为100%。结论梭子蟹74.4kD和48.7kD组分为主要过敏原。
- 赵绮华赖荷陈丽金王锡忠邹泽红
- 关键词：梭子蟹免疫印迹分析
- 屋尘螨致敏组分的研究被引量：3
- 2005年
- 目的研究屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)引起中国人群过敏的特异性变应原组分,为我国屋尘螨变应原的标准化提供依据。方法采用常规方法制备屋尘螨粗浸液,以48例螨过敏病人血清为探针进行Westen blot检测粗浸液中的致敏组分,并利用BandScan5.0软件分析血清阳性反应带(致敏带)结合特异性IgE的相对含量。结果免疫印迹杂交检测到屋尘螨的10条致敏带,相对分子质量(Mr)依次为103、99、68、62、57、37、33、29、25、15×103,其中致敏带1、2、4、5、6、7、8的阳性反应率超过95%;致敏带10的阳性反应率为47.9%,其结合特异性IgE的能力最强。结论屋尘螨的主要致敏组分既包括小Mr的变应原,也包括大Mr的变应原,现有的屋尘螨变应原的国际标准品不能普遍应用于中国人群,必须开发适合我国人群的尘螨变应原疫苗,本研究为开发适合我国人群的尘螨标准化疫苗提供理论依据。
- 赖荷赵绮华陈丽金王锡忠于陆赖乃楑
- 关键词：屋尘螨变应原
- 采用Western blotting的方法分析蚕蛹致敏原成份被引量：5
- 2006年
- 目的 应用Western blotting的方法检测蚕蛹（silkworm chrysalis）浸出液中致敏原的成份，为蚕蛹致敏原的研究和临床诊断提供依据。方法取蚕蛹浸出液，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶分离，再转印到PVDF膜上，封闭后将血清与膜条共同孵育，后与辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgE抗体反应，显色底物用对氨基联苯胺。结果SDS-PAGE显示蚕蛹可辨条带有12条，分子量在14～94kD之间，其中主带有8条，分子量依次为80kD、68kD、62kD、50kD、29kD、23KD、18kD、16kD。Western blotting结果表明，22例蚕蛹过敏患者血清全部呈阳性反应，浸出液中共有6条致敏条带，其中分子量68kD和29kD是主要致敏组份，阳性反应率均为100％。结论蚕蛹分子量68KD和29kD的组份为主要致敏组份，结果可为开发适舍我国特色的蚕蛹变应原提供依据。
- 赵绮华李文陈丽金王锡忠刘永平
- 关键词：蚕蛹十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳免疫印迹分析致敏原
- 粉尘螨变应原的分析被引量：1
- 2008年
- 目的对粉尘螨（Dermatophagoides farinae）变应原进行分离和鉴定其特异性变应原组分。方法采用ELISA检测粉尘螨变应原的生物活性。按常规方法制备粉尘螨浸出液，经SDS-PAGE分离，测定各组分的相对分子质量（MT）；同时用对螨过敏的60例病人混合血清（建立血清库）作探针进行Westernblot，鉴定其特异性变应原组分。结果SDS-PAGE显示粉尘螨有15条蛋白带，MT在14×10^3～109×10^3之间，其中主带有9条，MT分别为109×10^3、100×10^3、86×10^3、62×10^3、56×10^3、36×10^3、28×10^3、19×10^3、14×10^3；Westernblot结果表明，浸出液中共有5条致敏条带，其MT分别为109×10^3、100×10^3、36×10^3、28×10^3、14×10^3；经ELISA检测粉尘螨浸出液具有生物活性。结论粉尘螨的特异性变应原有5条，分别为109×10^3、100×10^3、36×10^3、28×10^3、14×10^3．其浸出液有稳定的生物活性。该研究为开发适合我国人群的粉尘螨标准化试剂提供了试验依据。
- 赵绮华李文陈蕴光周萍于陆王锡忠
- 关键词：粉尘螨变应原免疫印迹
- 梭子蟹变应原的分离、纯化与鉴定被引量：12
- 2007年
- 目的：对梭子蟹（Portunus pelogicus（Linnaeus））变应原进行分离,鉴定其主要及次要变应原,采用蛋白纯化技术获取梭子蟹天然的主要变应原并进行鉴定,为标准化变应原疫苗的研制提供理论依据.方法：取常规方法制备梭子蟹浸出液,经SDS-PAGE分离,测定各组分的相对分子量;同时用26例对蟹过敏的病人血清进行Western blot,鉴定其主要及次要变应原;利用快速制备液相色谱（FPLC）纯化技术（凝胶过滤层析和离子交换层析）获取主要变应原并作鉴定.结果：SDS-PAGE显示梭子蟹有19条可辨蛋白带,分子量在13 000～90 000之间,其中主带有9条,分子量是20 900、24 200、27 100、29 200、33 700、38 900、48 700、74 700、89 100;Western blot结果表明,26例蟹过敏患者血清全部呈阳性反应,浸出液中共有5条致敏条带,其中分子量在74 400、48 700的是主要变应原,阳性反应率均为100%;纯化后获取了74400、48700的主要变应原;经过免疫鉴定证实其具有免疫活性.结论：梭子蟹74 400和48 700的变应原为主要变应原,层析技术可以对分子量为74400和48700的主要变应原成分进行纯化.
- 赵绮华王锡忠陈丽金李文刘永平
- 关键词：梭子蟹变应原SDS-PAGEWESTERNBLOTFPLC
- 利用ELISA技术评估尘螨变应原的稳定性被引量：1
- 2006年
- 目的检测尘螨变应原的稳定性。方法利用ELISA技术检测在37℃处理后尘螨变应原的稳定性。结果尘螨变应原溶液在37℃处理6d后,利用人抗血清可以检测到其活性下降,而使用兔抗血清时尘螨抗原生物活性的变化在37℃处理45d后仍未检测到。结论尘螨变应原的稳定性应利用IgE抗体来检测,表明尘螨变应原的生物活性在37℃处理45d的过程中逐渐下降。
- 李文赖荷赵绮华王锡忠刘永平
- 关键词：尘螨变应原酶联免疫吸附试验
- 刺苋花粉特异性变应原成分的分析研究被引量：4
- 2005年
- 目的:分析刺苋花粉的抗原成分以及刺苋花粉特异性变应原组分,为刺苋花粉变应原的纯化和标准化变应原疫苗的研制提供理论依据.方法:取刺苋花粉浸出液,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分离,以16例刺苋花粉过敏的病人血清为探针,进行免疫印迹(Western blotting),检测刺苋花粉浸出液的致敏组分.结果:SDS-PAGE显示可辨蛋白条带有11条,分子量在15～80 kD之间,其中主带有9条,分子量依次为18 kD、24 kD、29 kD、35 kD、39 kD、40 kD、42 kD、62 kD、78kD.Western blotting结果表明,16份刺苋花粉过敏患者的血清全部呈阳性反应,浸出液中共有4条致敏条带,其中主要致敏蛋白的分子量是78 kD和40 kD.结论:刺苋花粉78 kD和40 kD的变应原为主要特异性变应原.
- 赵绮华陈丽金王锡忠刘永平
- 关键词：变应原SDS-PAGEWESTERNBLOTTING
