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血管形成抑制因子tumstatin_(45-132)的基因克隆、表达和生物学活性被引量：3: 2005年; 　目的: 克隆人tumstatin全长编码区基因及编码tum statin45-132的基因, 在大肠杆菌中表达。方法: 采用RT PCR从人胚肾细胞系 293细胞中克隆人的tumstatin全长编码基因, 继以PCR扩增tumstatin45-132 (45 -132位氨基酸 )编码基因, PCR产物克隆到pBV220载体中, 测序证实后, 转化E.coliBL21, 于 42℃进行热诱导表达。用SDS -PAGE分析表达产物, 对重组蛋白纯化后用内皮细胞增殖试验测定其生物学活性。结果: RT- PCR扩增出tumstatin全长编码基因, 以PCR扩增出tumstatin45-132的编码基因, 经序列分析证实与GenBank中的序列完全一致。以含有tumstatin45-132编码基因的表达载体转化E.coliBL21后, 可表达出相对分子质量(Mr)为 9 600的重组蛋白。表达产物的蛋白量占菌体蛋白量的 10%, 纯化后能抑制内皮细胞的增殖。结论: 成功克隆全长tumstatincDNA, 并在大肠杆菌中表达重组tumstatin45-132蛋白, 证实其具有抑制内皮细胞增殖的活性。; 罗以勤王梁华球谊焦炳华; 关键词：生物学活性

新型血管形成抑制因子Tumstatin<,45-132>的克隆和表达: 目的:克隆人Tumstatin全长编码区及编码Tumstatin<,45-132>的序列,在大肠杆菌重组表达并用内皮细胞增殖试验进行活性检测.方法:采用RT-PCR从人胚肾细胞系293细胞中克隆人的Tumstatin全长...; 罗以勤王梁华球谊焦炳华; 关键词：生物活性内皮细胞增殖; 文献传递

人Vasostatin及其融合人TRAIL的克隆表达与生物学活性研究: 新生血管的形成是从已有血管生成新血管的重要生理和病理过程，其可发生在胚胎形成、子宫内膜周期性变化、伤口愈合和肿瘤生长等环节。如果抑制新生血管形成，肿瘤细胞将发生凋亡或坏死，将为抗肿瘤治疗提供了一条新思路。　　 ...; 球谊; 关键词：融合蛋白; 文献传递

人肿瘤抑素(Tumstatin)在E.coli中的克隆、表达及活性分析被引量：4: 2005年; 从人胚肾2 93细胞中扩增肿瘤抑素(tumstatin)基因,进行原核表达,纯化和生物活性检测.利用原核表达载体pMAL c2在大肠杆菌BL2 1中表达肿瘤抑素,经AmyloseResin亲和层析柱和QSepharoseFastFlow柱纯化,通过体外内皮细胞增殖、内皮细胞凋亡和鸡尿囊绒膜新生血管生成试验检测其抑制活性.MBP tumstatin在BL2 1中表达率约2 0 % ,肿瘤抑素纯度可达95 % .肿瘤抑素可明显抑制内皮细胞增殖(IC50 约为15 μg ml)、诱导内皮细胞凋亡和抑制鸡尿囊绒膜新生血管生成.研究结果表明,肿瘤抑素对内皮细胞具有明显的抑制作用,提示其在肿瘤治疗中有潜在的应用前景.; 罗以勤王梁华球谊焦炳华

来氟米特对HaCaT细胞分泌α-肿瘤坏死因子、白介素-6和8的影响被引量：3: 2004年; 目的:研究来氟米特活性代谢产物A771726对角质形成细胞分泌α-肿瘤坏死因子TNF-α,白介素IL-6及IL-8的影响。方法:以体外培养的角质形成细胞株HaCaT为对象,以不同浓度A771726处理正常及TNF-α刺激后细胞,用生物活性法及ELISA方法测定培养上清中TNF-α、IL-6及IL-8的分泌变化情况。结果:正常情况下,HaCaT细胞可自发分泌TNF-α、IL-6和IL-8;药物作用后分泌水平下降;TNF-α诱导下,HaCaT细胞IL-6及IL-8表达量均增加,加入来氟米特后则表达量均受到抑制。结论:来氟米特可抑制角质形成细胞分泌TNF-α、IL-6及IL-8。; 郭志丽顾军唐玲球谊米庆胜

细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用被引量：5: 2003年; 目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性。方法:应用Stratagene BacterioMatch two hy-brid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒。重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标。结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500μg/ml以上)筛选下宿主菌呈转录激活状态,pTRG-TRAIL与pBT-OPG组共转化后在低浓度羧苄青霉素(250μg/ml以下)筛选下宿主菌呈转录激活状态,用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆。对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5或pBT-OPG与pTRG-Gal114组共转化后呈阴性。结论:所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域,而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证,所以细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究。; 张弛王梁华罗以勤张兴群高云史薇包晨颖球谊焦炳华; 关键词：相互作用可行性 TNF相关凋亡诱导配体质粒构建

选择性去除骨髓移植物中异基因反应性淋巴细胞被引量：5: 2004年; 目的:选择性去除骨髓移植物中异基因反应性淋巴细胞,诱导异基因特异性低反应性。方法:用携带有FasL基因的重组腺病毒转染BALB/c小鼠来源的DC,并与C57BL/6小鼠脾淋巴细胞共培养,通过混合淋巴细胞培养等方法检测异基因特异性低反应性。结果:转染FasL基因的DC诱导了对BALB/c异基因反应性T淋巴细胞凋亡,2次混合淋巴细胞反应显著降低,但并没有抑制针对第三方的反应。结论:转染FasL基因的DC体外可有效去除骨髓移植物中异基因反应性T淋巴细胞,移植用这种方法处理过的骨髓,有希望在抑制GVHD的同时,不影响移植物抗肿瘤复发和抗感染的功能。; 刘峰楼国良李永梅陈莉黄正霞杨宏斌朱杨王梁华球谊焦炳华; 关键词：FASL 树突状细胞移植物抗宿主病骨髓移植

细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用: 目的:探索应用细菌双杂交体系统在细胞外蛋白质之间相互作用分析的可行性。方法:应用StratageneBacterioMatch two hybrid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达...; 张弛王梁华罗以勤张兴群高云史薇包晨颖球谊焦炳华; 文献传递

新型重组抗肿瘤蛋白TNFα-L-Tumstatin45-132分子构建和生物学特征预测: 目的:构建人重组TNFα-L-Tumstatin45-132融合蛋白的表达载体并预测接头的合理性和可行性.方法:采用基因融合序列重叠延伸(SOE)策略,构建新型TNFα-L-Tumstatin45-132表达载体;应用核...; 罗以勤王梁华球谊焦炳华; 关键词：融合蛋白计算机模拟生物学特征生物活性; 文献传递

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球谊