矫庆华
- 作品数：13 被引量：144H指数：8
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家科技重大专项“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 黑曲霉变异株A-828酸性植酸酶的生物合成和性质的研究被引量：2
- 2009年
- 经钴60及原生质体紫外联合诱变后,筛选出一株高产植酸酶的菌株(A-828),酶活力达到66,000U/mL,为出发株的17倍。通过滤膜超滤浓缩和Bio-gel P-150层析纯化,纯化倍数为11.2倍,活力回收率为37.7%。SDS-PAGE分析表明,变异株植酸酶的分子量约为66kDa,酶学实验结果表明:该酶的最适pH有两个,分别为2.5和5.5,但在2.5时所表现的活力是5.5时的5倍,酶的最适温度为55℃。在20-60℃保温20min,活力不改变。2mmol/L的Fe2+、Cu2+、Cr3+抑制了酶的活性,但同样浓度Ca2+、Mn2+、EDTA、DTT对酶的活力影响不显著。
- 曾继蛟李英伦王鸿宾石峰岳丽丽李运敏刘志刚矫庆华
- 关键词：纯化原生质体PHYB
- 植酸酶的研制与应用被引量：3
- 2002年
- 植酸酶能将饲料中不被动物吸收的植酸(肌醇六磷酸)水解,释放出可被畜禽利用的肌醇和游离磷。由于植酸螯合饲料中的铁、钙、锌等离子,并抑制淀粉酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶的活性,降低了动物体对矿物质和蛋白质的吸收。添加植酸酶可降低饲料成本,解除植酸的抗营养作用,提高磷、蛋白质和矿物元素的利用率,减少环境污染。该项目由黑曲霉经原生质体诱变获得了高产植酸酶菌株A-828,并建立了完整的发酵工艺和后处理工艺。
- 矫庆华
- 关键词：植酸酶植酸饲料添加剂
- 人溶菌酶工程菌株培养条件的研究被引量：10
- 1997年
- 人溶菌酶在食品工业和医药上具有广泛的用途,最近发现它在癌症的继承性免疫治疗上也有作用。为使人溶菌酶达到工业化生产,我们已成功地人工合成厂人溶菌酶基因,并构建了人溶菌酶基因的重组质粒和工程菌株。为提高该工程菌人溶菌酶的表达水平,我们对影响该工程菌表达人溶菌酶的培养条件进行探讨。
- 郭良栋钱世钧叶军矫庆华
- 关键词：菌株发酵
- 超耐热酸性α-淀粉酶基因在多型汉逊酵母中表达及与在毕赤酵母中表达的比较研究被引量：6
- 2006年
- 利用毕赤酵母的质粒载体pPIC9K将极端耐热古菌Pyrococcusfuriosus的超耐热酸性α-淀粉酶(Amy)基因转化到多型汉逊酵母HP-6中,获得重组汉逊酵母。经过甲醇进行诱导,表达产物的酶活性检测和SDS-PAGE电泳,证明α-淀粉酶(Amy)在多型汉逊酵母中利用AOX1启动子和α-因子信号肽有效表达并分泌到胞外。该酶的最适反应温度为90～100℃,最适作用pH为4.0～5.0,较之重组毕赤酵母的最适作用pH还低0.5。此外与毕赤酵母的重组蛋白相比,重组汉逊酵母α-淀粉酶不仅菌株筛选简便、周期短,而且具有更容易筛选到高拷贝转化子以及适用于大规模工业发酵等优点。
- 郝帅郭建强李运敏岳丽丽矫庆华
- 酸性植酸酶phyB在毕赤酵母GS115中的表达
- 2006年
- 通过PCR方法扩增得到无信号肽无内含子的酸性植酸酶phyB基因,将此基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K上,并转化毕赤酵母GS115感受态细胞,获得重组毕赤酵母.在甲醇的诱导下,该植酸酶phyB基因在毕赤酵母中得到表达.经SDS-PAGE凝胶电泳分析,该重组蛋白的相对分子质量为7.5×104,而该植酸酶在大肠杆菌DH5α表达系统中表达的相对分子质量为6.0×104,这可能是由于糖基化的结果.酶学性质检测发现,表达的植酸酶最适作用温度为65℃,比野生原始菌株的提高了10℃;诱导pH值为5.5时,蛋白的表达量最高,为10 528.6 U/mL,是野生菌株的2.8倍;最适作用pH值为2.5;在70℃条件下处理60 min,该酶的相对酶活力为40%,在75℃时处理10 min,该酶的相对酶活力为10%.
- 唐升斌矫庆华谢达平
- 关键词：毕赤酵母GS115
- 人工合成人溶菌酶基因在大肠杆菌中表达被引量：25
- 1997年
- 人工合成人溶菌酶基因在大肠杆菌中表达矫庆华钱世钧叶军郭伟（中国科学院微生物研究所，北京１０００８０）利用ＤＮＡ重组技术生产自然界不能或难以得到的多肽产品用于医药、农业、食品工业等领域，目前在生物领域已有了很大的进展。近年来，科学工作者经体外合成人溶菌...
- 矫庆华钱世钧叶军郭伟
- 关键词：溶菌酶溶菌酶基因基因表达
- 超耐热酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在酵母细胞中的表达被引量：37
- 2006年
- 用PCR方法扩增来源于极端嗜热厌氧古菌Pyrococcus furiosus中的超耐热酸性α-淀粉酶的结构基因，将该结构基因引入载体pPIC9K中，将重组质粒pPIC9K—Amy转化大肠杆菌DH5α细胞，测序结果表明，克隆到的α-淀粉酶结构基因为1305bp，其编码的成熟肽为435个氨基酸。将正确构建的重组质粒转化毕赤酵母GS115细胞，得到酵母工程菌株。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下，超耐热酸性α-淀粉酶在甲醇酵母中大量表达并分泌到胞外，该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导，随着诱导培养时间的增加，在培养基上清液中的单位体积酶活力相应上升，在诱导培养7d后酶活力达到最大值。该酶最适反应温度为90-100℃，最适反应pH值为4．5—5．5。该酶具有非常好的温度稳定性，在100℃条件下热处理5h。仍具有60％以上的酶活力。该酶的这些优点使其非常适于在工业生产上应用。
- 郭建强李运敏岳丽丽邱阳生矫庆华
- α-氨基酸酯水解酶产生菌的筛选及其合成头孢立新的研究被引量：1
- 1990年
- 酶法合成头孢立新的研究已有不少报道,并对酶的来源、测定方法、特性和应用等作了详细阐述。我们也作了大肠杆菌 AS1.76酶法合成头孢立新的研究,收率为86.9%,但侧链苯甘氨酸甲酯盐酸盐用量较大,且回收困难,阻碍了该法进一步推广。研究发现铜绿假单孢菌 AS1.204用以合成头孢立新可以解决这一问题。
- 王媺芝王祯祥乐华爱韩文珍矫庆华
- 关键词：氨基酸酯水解酶假单孢菌
- 微小毛霉凝乳酶的纯化和性质被引量：21
- 1989年
- 微小毛霉(Mucor pusillus)凝乳酶经乙醇分步沉淀、CM-纤维素、DEAE-Sephadex A25和Sepharose 2B柱层析提纯后,酶的比活由296提高到3429u/mg,蛋白质收率为17.9%。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫扩散法证明酶的纯度达到均一。酶的分子量为41800道尔顿。酶对血红蛋白的Km值为0.019mmol/L。酶的等电点为pH4.3。对酶的氨基酸组成和含糖量也进行了测定。酶的化学修饰表明:酪氨酸、组氨酸、色氨酸、精氨酸以及巯基与酶的活性无关,天冬氨酸的羧基是酶的必需基团,故此酶是一种典型的天冬氨酸蛋白酶。
- 钱世钩张纯青矫庆华田开荣孟广震
- 关键词：凝乳酶微小毛霉提纯干酪
- 人溶菌酶基因的合成和克隆被引量：20
- 1994年
- 用固相亚磷酰胺法合成了人溶菌酶的全基因,全长为409bp,它包括了编码人溶菌酶的结构基因,起始密码子ATG,终止密码子TAA、TGA,以及两端的Bam HI和SphI的识别顺序。整个基因分成24个寡聚核苷酸片段进行合成,每个片段长度分别为26至38个核苷酸,然后用两种方法酶促连接成完整的人溶菌酶基因。基因克隆到M13载体上。用点杂交和限制酶酶切分析确定阳性克隆株。用双脱氧链终止法进行序列分析,证实所合成的人溶菌酶基因序列与设计的完全一致。
- 钱世钧于颖田开荣矫庆华孟广震
- 关键词：人溶菌酶DNA合成基因克隆
