石中全 作品数:31 被引量:94 H指数:7 供职机构: 重庆三峡医药高等专科学校 更多>> 发文基金: 重庆市教育委员会科学技术研究项目 海口市重点科技计划项目 国家级大学生创新创业训练计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 环境科学与工程 文化科学 生物学 更多>>
脓肿分枝杆菌非溶血性磷脂酶C的原核表达及活性鉴定 被引量:1 2012年 目的原核表达脓肿分枝杆菌非溶血性磷脂酶C,并检测其生物学活性。方法以脓肿分枝杆菌标准株(ATCC19977)基因组DNA为模板,PCR扩增非溶血性磷脂酶C基因,克隆至pQE-30载体,构建重组原核表达质粒pQE-30-MAB_0555,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Ni2+-NTA层析纯化后,采用杯碟法检测其生物学活性。结果重组原核表达质粒pQE-30-MAB_0555经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为53 000,纯化后蛋白浓度为0.40 mg/ml,具有溶解蛋黄中卵磷脂的酶活性,无溶血活性。结论成功地在大肠杆菌DH5α中表达了非溶血性磷脂酶C,为进一步研究其生物学功能及其在脓肿分枝杆菌致病机制中的作用提供了材料,也为研制脓肿分枝杆菌临床治疗药物及寻找新的药物作用靶点提供了思路。 王志刚 杨致邦 杜祎 石中全 邓西川 周雪关键词:脓肿分枝杆菌 原核细胞 基因表达 生物活性 TLR4对氧化低密度脂蛋白作用巨噬细胞后凋亡和炎症因子的影响 被引量:1 2018年 目的:研究Toll样受体4(TLR4)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作用后巨噬细胞凋亡和炎症因子的影响。方法:巨噬细胞Ana-1分为Con(不做处理)、ox-LDL(50 pg/ml ox-LDL处理)、TAK-242(50 pg/ml ox-LDL和20μmol/L的TLR4阻断剂TAK-242处理)。流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、核因子-κBp65(NF-κBp65)、TLR4蛋白水平,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞中ROS水平,ELISA检测培养液上清中TNF-α、IL-6、IL-1β水平。结果:ox-LDL处理后的Ana-1细胞中TLR4表达水平升高,而TLR4阻断剂TAK-242可以部分降低细胞中TLR4水平。ox-LDL细胞凋亡率从(6.12±0.95)%升高到(45.35±2.71)%,而TAK-242作用后的凋亡率降低至(29.59±4.23)%,同时ox-LDL细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κBp65水平和ROS水平均明显高于Con(P<0.05),而TAK-242细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κBp65水平ROS水平均明显低于ox-LDL(P<0.05)。ox-LDL细胞培养液上清中TNF-α、IL-6、IL-1β水平均明显高于Con(P<0.05),而TAK-242细胞培养液上清中TNF-α、IL-6、IL-1β水平均明显低于ox-LDL(P<0.05)。结论:巨噬细胞经过ox-LDL作用后细胞中TLR4表达升高,细胞凋亡增多,细胞分泌的炎症因子水平升高,细胞中ROS水平和NF-κBp65水平均升高,而敲低TLR4能够抑制ox-LDL的上述作用。 石中全 李国利 胡艳玲 马丽华关键词:巨噬细胞 凋亡 炎症因子 ROS 饮水中地塞米松污染对小鼠肠道菌群的影响 被引量:4 2016年 目的探讨水环境地塞米松污染对小鼠肠道菌群的影响。方法将20只Balb/c小鼠随机分为对照组和实验组,每组5只。实验低剂量组灌喂含0.035 ng地塞米松磷酸钠的饮用水,中剂量组为0.225 ng、高剂量组为2.25 ng,对照组灌喂不含地塞米松磷酸钠的饮用水。每日观察小鼠行为、皮毛、大便等的变化。灌喂第36 d处死小鼠,取回盲部组织提取细菌基因组DNA,扩增16S r DNA V6可变区,扩增产物变性凝胶梯度电泳(DGGE)后分析。切取DGGE图谱上的优势条带,扩增、纯化后克隆测序,其序列BLAST比对分析。结果各实验组小鼠均出现性情暴躁、斗殴打架、咬断尾部等现象。DGGE图谱聚类分析表明各组小鼠回盲部均具有较稳定的菌群;主成分分析表明各组的优势菌群存在一定差异;菌群多样性分析表明,与对照组相比,低剂量组菌群的种类和数量明显增加(P<0.05);中、高剂量组种类和数量显著增加(P<0.01)。16S r DNA V6区序列分析显示实验组和对照组具有共有菌属15种、差异菌属2种,优势菌种类和比例发生了改变。对照组有乳杆菌属的细菌定植,而中、高剂量实验组乳杆菌属的细菌消失,却出现志贺菌属的细菌。结论饮水地塞米松污染可影响小鼠神经系统,使小鼠肠道内细菌的种类、数量及优势菌所占的比例发生改变,菌群多样性增加;抑制肠道益生菌的定植,利于肠道致病菌的入侵。 杨茜 李晓愚 斯丹 杨致邦 贺中原 张楠晨 张钐钐 石中全关键词:地塞米松磷酸钠 污染 肠道菌群 RDNA 脓肿分枝杆菌非溶血性磷脂酶C蛋白MAB_0555基因克隆测序及生物信息学分析 2012年 目的克隆脓肿分枝杆菌(Mycobacterium abscessus,M.abscessus)非溶血性磷脂酶C基因MAB_0555,并对其测序以及生物信息学分析,为进一步研究其生物学功能及其在脓肿分枝杆菌致病机制中的作用提供基础。方法以脓肿分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增非溶血性磷脂酶C的基因片段,克隆入pQE-30质粒,构建重组原核表达载体pQE-30-MAB_0555,将其转化入大肠埃希菌DH5α,并进行序列测定及利用生物信息学软件DNAstar 5.0分析其生物学特性。结果 PCR扩增获得长1440 bp的MAB_0555基因片段,编码479个氨基酸,DNAstar等软件预测其蛋白质相对分子量(Mr)约为53 kD,并显示出具有良好的抗原性。结论成功获得序列正确的脓肿分枝杆菌MAB-0555基因,为其重组蛋白的表达及其相关研究奠定基础。 王志刚 杨致邦 董蕾 杜祎 石中全 邓西川关键词:脓肿分枝杆菌 克隆 单纯疱疹病毒1型感染神经胶质细胞的代谢组学研究 2017年 目的研究单纯疱疹病毒1型(HSV-1)对人类少突胶质细胞(OL细胞)代谢的影响,从而探讨HSV-1感染的分子机制。方法将OL细胞随机分为两组,一组为感染组,感染HSV-1,一组为正常对照组,不感染HSV-1,运用核磁共振氢谱(~1H NMR)检测二组细胞培养液水相代谢产物,最后由偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)对数据进行分析。结果感染组与正常对照组细胞培养液水相代谢物的组成有显著差异:被HSV-1感染的OL细胞的培养液中,亮氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺增多,丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、乳酸减少。结论 HSV-1感染改变OL细胞的氨基酸代谢,HSV-1可能通过扰乱宿主细胞的代谢路径,促进自己的繁殖,并影响神经系统的功能活动。 马丽华 杨宏静 徐晓艳 石中全 邓榕关键词:单纯疱疹病毒1型 代谢组学 核磁共振氢谱 神经胶质细胞 过表达miR-10b促进肺癌细胞系A549增殖 被引量:2 2017年 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌及癌旁组织中miR-10b(miR-10b)表达水平及miR-10b是否通过调控锌指转录蛋白基因(KLF4)对肺癌细胞系A549恶性化的影响。方法 40例NSCLC患者病理切片,原位杂交检测肺癌及癌旁组织中miR-10b的表达量;对肺癌细胞系A549转染miR-10b mimics后,CCK-8法检测肺癌细胞增殖;real-time PCR及Western blot检测KLF4 mRNA及蛋白水平;软琼脂克隆形成实验检测过表达miR-10b对A549细胞的肿瘤恶性化程度的影响。结果肺癌细胞A549及肺癌组织中miR-10b的表达量分别高于正常肺上皮细胞16HBE及癌旁组织;过表达miR-10b模拟物的A549细胞中,KLF4蛋白水平显著下降(P<0.05);过表达的miR-10b可显著增加A549细胞的增殖速度及在软琼脂内的成瘤性。结论 miR-10b在不同类型细胞及组织中具有分布差异性、可能是通过抑制KLF4的表达促进肺癌细胞增殖及恶性化。 唐静 石中全 胡玲 李国利 冯晓灵 刘奉关键词:MIR-10B KLF4 增殖 柴胡解毒汤联合干扰素治疗慢性乙肝的疗效和对细胞因子的影响及机制 被引量:9 2017年 目的:观察柴胡解毒汤在治慢性乙型肝炎方面的临床疗效,并借此探讨该方对细胞因子的影响。方法:选取2015年9月至2016年3月重庆三峡高等专科学校附属医院收治的慢性乙型肝炎患者90例,随机分成对照组和观察组,每组45例。对照组采用干扰素注射,1次/d,连续2周后,再改为隔日1次,连用3个月;观察组在使用干扰素基础上采用中药柴胡解毒汤治疗,2次/d,同样治疗14 d后观察2组治疗的临床疗效、肝功能比较、药物不良反应、血清IL-1β、IL-6、5-HT及TNF-α水平的变化、HBs Ag、HBe A、HBV-DNA阴转率等情况。结果:1)治疗后观察组有效率86.67%,对照组有效率68.89%,2组有效率比较,差异有统计学意义(P<0.05);2)2组与治疗前比较,肝功能指标均有明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组ALT、AST及TBIL值均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);3)不良反应中,对照组出现10例(33.00%),观察组4例(8.80%),观察组不良反应明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);4)2组患者在治疗前,检测的血清IL-1β、IL-6、5-HT及TNF-α含量比较,差异无统计学意义(P>0.05),而组间治疗后比较,观察组明显低于对照组,治疗后,上述指标均较治疗前下降,但观察组下降更明显,差异有统计学意义(P<0.05);5)观察组HBs Ag阴转率为24.4%、HBe Ag阴转率为33.3%、HBV-DNA阴转率为48.8%均明显高于对照组,对照组HBs Ag阴转率为15.5%、HBe Ag阴转率为11.1%、HBV-DNA阴转率为28.9%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:柴胡解毒汤在治疗慢性乙肝方面有显著的临床效果,且不良反应较传统干扰素明显降低,值得推广,同时,该药对细胞因子等指标也有明显降低作用,考虑其可能是通过类似机制起作用。 石中全 马丽华 李国利 刘璟关键词:柴胡解毒汤 慢性乙肝 细胞因子 疗效 临床医学专业专科免疫学与病原生物学课程改革探索 2018年 免疫学与病原生物学作为基础医学与临床学科的桥梁,是临床医学专业必修课之一。针对该课程在实际教学中存在的教师难讲,学生难学的问题,本课程团队在教学活动中通过调研,以临床岗位需求为导向,以临床医学专业人才培养方案为依据,制定了具有专业针对性的课程标准,通过改进教学及评价方法,优化教学内容,逐步培养学生临床思维能力。 石中全 李国利 刘璟 胡艳玲 罗军关键词:免疫学与病原生物学 教学改革 课程 转录因子p53通过激活Ⅰ型干扰素通路抑制登革病毒感染 被引量:2 2014年 目的:探讨转录因子p53在登革病毒感染中的作用。方法用逆转录病毒载体介导的RNA干扰技术构建p53低表达的人肝癌细胞株HepG2,并采用Western blot 进行鉴定。设定野生组和干扰组,分别用2型登革病毒感染。采用Vero细胞噬斑法检测病毒滴度;间接免疫荧光检测病毒增殖;流式细胞术检测病毒感染后细胞凋亡;酶联免疫吸附试验检测IFN-β分泌。结果与野生组比较,干扰组p53表达明显下调,表明构建p53低表达的HepG2细胞株成功。登革病毒感染24 h后,干扰组病毒滴度比野生组高100倍;免疫荧光显示干扰组发绿色荧光的细胞数明显多于野生组,说明p53抑制了登革病毒的感染。但是,登革病毒感染24 h后两组凋亡细胞的数目并没有明显差异,而野生组IFN-β分泌量增加6倍。结论转录因子p53抑制登革病毒感染可能不是通过促进细胞凋亡,而是通过激活Ⅰ型干扰素通路来发挥作用。 李国利 张俊磊 胡艳玲 孙厚良 石中全 李小山 刘佳 饶贤才 胡福泉关键词:登革病毒 P53 细胞凋亡 干扰素 废水中地塞米松污染的探讨 被引量:8 2012年 目的探讨废水中地塞米松污染的状况,为治理水环境污染提供依据。方法采集医院、养猪场、城市废水厂废水、街道地表水及江水,采用固相萃取-高效液相色谱法检测其地塞米松含量。结果医院、废水厂处理前后的废水、养猪场的废水、医院旁的街道地表水中含有一定浓度的地塞米松,以养猪场废水池的废水中含量最高,为(1050.90±11.67)ng/L,其次为专科医院处理前的废水,为(452.05±8.10)ng/L,废水中含量的不同可能与地塞米松的应用量有关。结论城市废水中存在不同量的地塞米松,废水处理中应引起重视,并采取相应的措施。 石中全 周裕珍 杨致邦 戴维 尚金川 邓西川 何东平关键词:废水 地塞米松 污染 固相萃取-高效液相色谱法