祝洪磊
- 作品数：9 被引量：13H指数：3
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：山东省农业良种工程项目国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 睾丸注射法制备携带猪PID1基因的转基因兔被引量：2
- 2014年
- 目的研究磷酸酪氨酸互作结构域1(PID1)基因与肌内脂肪含量的关系,探究睾丸注射法在转基因动物制备中的可行性。方法将携带猪PID1基因的重组质粒pIRES2-acGFP-PID1与转染试剂共孵育后,对新西兰兔进行了睾丸打点注射试验。对繁殖的F1代个体进行了活体荧光检测、PCR和western blotting检测,以及抽样屠宰进行肌内脂肪含量等检测;将F1代阳性个体互交,繁殖了F2代兔,对其进行了阳性率检测以及肌内脂肪含量检测。结果外源PID1基因和荧光蛋白基因在后代中均成功表达,其中,F1代阳性率为35.88%,F2代阳性率为34.33%;转基因阳性兔与阴性和空白对照兔相比,PID1蛋白表达水平有所增加,肌内脂肪含量有显著提高(P<0.05)。结论 PID1基因与肌内脂肪沉积密切相关,同时,进一步证明了睾丸注射法可以用于制备转基因动物,且外源基因可以稳定遗传。
- 祝洪磊石元曾勇庆陈伟徐正刚张哲杨云张天阳
- 关键词：转基因兔肌内脂肪
- RNA干扰沉默PID1基因在C2C12细胞中表达的研究被引量：3
- 2013年
- 构建和筛选对PID1(phosphotyrosine interaction domain containing 1,PID1)基因有RNA干扰作用的PID1-shRNA表达载体。据小鼠PID1 cDNA序列,优化设计了4条shRNA及1条阴性干扰序列,插入pGPU6/GFP/Neo载体中,得到pGPU6/GFP/Neo-PID1-1、pGPU6/GFP/Neo-PID1-2、pGPU6/GFP/Neo-PID1-3、pGPU6/GFP/Neo-PID1-4和pGPU6/GFP/Neo-PID1-NC。干扰载体转染C2C12细胞,以RT-PCR和Western blot技术检测shRNA对C2C12细胞中PID1 mRNA和蛋白表达的下调作用。结果表明:靶向PID1基因的4个shRNA重组质粒载体经测序分析,其shRNA编码序列与预期设计的完全一致,经酶切鉴定和测序分析证实,靶向PID1基因的shRNA重组质粒载体构建成功。进一步将构建的4个表达载体分别转染C2C12细胞,24 h后细胞中PID1基因mRNA表达水平依次下调(23.58±1.87)%、(75.44±0.77)%、(70.52±0.41)%和(56.60±3.13)%。48 h后细胞中PID1蛋白表达水平依次降低(30.15±5.05)%、(71.86±4.85)%、(67.93±2.28)%和(56.81±2.01)%。所筛选出的pGPU6/GFP/Neo-PID1-2、pGPU6/GFP/Neo-PID1-3和pGPU6/GFP/Neo-PID1-4三个表达载体均能高效地抑制转染细胞PID1 mRNA和蛋白的表达,为进一步研究PID1基因的功能奠定了基础。
- 杨伦徐正刚王慧陈其美陈伟胡艳霞石元祝洪磊曾勇庆
- 关键词：小鼠RNA干扰
- 莱芜猪前体脂肪细胞的原代培养及诱导分化研究被引量：6
- 2012年
- 为了建立莱芜猪前体脂肪细胞的体外培养体系,探索猪脂肪组织增生的生物学特征。本研究采集1日龄莱芜猪仔猪颈、背部皮下脂肪组织,采用胶原酶与胰蛋白酶相结合的方法,分离原代前体脂肪细胞,进行前体脂肪细胞的原代和传代培养,以及前体脂肪细胞诱导分化的研究,并采用Real-time PCR方法检测前体脂肪细胞分化过程中关键基因PPARγ的表达。结果表明,分离的猪原代前体脂肪细胞约8h后开始贴壁,贴壁的细胞呈短梭形或不规则的三角形,第3天多数细胞进入指数生长期,呈成纤维细胞样形态,细胞生长曲线近似S形;诱导培养结果显示,少量细胞在第2天开始出现脂滴,大多数细胞在第3天出现脂滴,第7～8天小脂滴逐渐融合成大脂滴,在第12天左右融合成大脂滴,油红O染色呈橘红色。在前体脂肪细胞分化过程中PPARγ基因mRNA的表达量逐渐增加,在诱导后的48h表达量最高,随后其表达丰度逐渐下降。本试验成功建立了莱芜猪前体脂肪细胞培养体系和体外诱导分化模型,为进一步研究莱芜猪前体脂肪细胞增殖与分化机制和猪体脂肪的沉积奠定基础。
- 胡艳霞曾勇庆崔志峰杨伦陈伟陈其美石元祝洪磊
- 关键词：莱芜猪前体脂肪细胞细胞培养诱导分化
- 睾丸注射法制备携带猪PID1基因的转基因兔
- 祝洪磊石元曾勇庆陈伟徐正刚张哲杨云张天阳
- 关键词：转基因兔肌内脂肪
- 应用抑制性消减杂交技术筛选影响猪肌内脂肪沉积相关基因的研究
- 肌内脂肪(IMF)是影响猪肉品质的一个重要指标，已有的研究表明IMF含量与肉的风味、嫩度等优良肉质性状呈正相关。近年来，人们在猪IMF沉积方面进行了大量研究，但影响IMF沉积的主效基因至今尚未确定。因此，本研究以IMF含...
- 陈其美杨伦崔景香杜金芳陈伟胡艳霞祝洪磊石元曾勇庆
- 关键词：肌内脂肪抑制性消减杂交差异表达基因
- 猪CuZnSOD基因启动子的克隆鉴定及分析被引量：3
- 2014年
- 猪铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)是一种重要的抗氧化酶,其功能已被广泛研究,但CuZnSOD基因的转录调控尚不明确。为了研究猪CuZnSOD基因的核心启动子区域,并对其转录调控机制进行探讨,运用PCR方法从猪基因组克隆CuZnSOD基因5′上游调控区853 bp的片段,然后通过巢式PCR方法获得5′末端逐渐缺失的启动子系列片段,并将这些片段定向插入到荧光素酶报告基因表达载体(pGL3-Basic)中。瞬时转染小鼠胚胎细胞(NIH/3T3),利用双荧光素酶报告基因检测不同长度启动子活性。检测结果显示,在CuZnSOD基因5′上游调控区-87 bp和-266 bp处分别存在2个潜在转录起始位点,-383 bp^+67 bp启动区活性最强,进一步缺失分析发现-75 bp^-32 bp区域内含有猪CuZnSOD基因转录所必需的基础启动子序列,其中存在多个潜在的转录因子结合位点,研究结果提示这些转录因子结合位点可能是参与CuZnSOD基因转录的重要调控序列。
- 石元陈伟曾勇庆祝洪磊徐正刚张哲杨云张天阳
- 关键词：启动子
- 睾丸注射法制备携带猪PID1基因的转基因兔的研究
- 随着生活水平的不断提高，人们对猪肉肉质的要求也越来越高，肌内脂肪(IMF)是影响肉质的重要指标之一。肉的嫩度、风味、多汁性都与之相关。从上世纪，人们追求的主要是瘦肉率，随着不断的选种选育，虽然瘦肉率得到了明显提高，但造成...
- 祝洪磊
- 关键词：转基因兔新西兰兔肉质性状
- 文献传递
- 猪CuZnSOD基因启动子的克隆鉴定及分析
- 石元祝洪磊曾勇庆陈伟徐正刚张哲杨云张天阳
- 关键词：启动子
- TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪ADD1 mRNA方法的建立与应用
- 近年来，随着人们生活水平的提高，猪肉的肉质问题得到了消费者和生产者重视，遗传基础是改善肉品质的关键。猪脂肪细胞定向和分化因子1(ADD1)在脂肪细胞分化中起着重要作用，准确度量脂肪组织中ADD1 mRNA的表达量成为许多...
- 崔景香胡艳霞杨伦陈其美杜金芳陈伟石元祝洪磊曾勇床
- 关键词：荧光定量RT-PCRTAQMAN探针
