罗婉冰
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 采用CELⅠ酶粗提物高效鉴定CRISPR/Cas9介导的基因突变被引量：1
- 2017年
- CRISPR/Cas9是新兴的基因组编辑技术,该技术操作简单、效率高,已成为目前最主流的基因组编辑技术。利用该技术进行突变体创制,对基因功能研究和育种应用具有重要的意义,而快速、高效、低成本的基因编辑个体鉴定是其中的重要环节。本研究对影响CELⅠ粗提物鉴定CRISPR/Cas9介导的水稻基因编辑个体的条件,包括蛋白用量及作用时间、PCR反应缓冲液等条件进行了探索,并将整个检测体系集成于一管操作。同时,采用CELⅠ粗提物检测了CRISPR/Cas9介导水稻stn1突变的T_0代植株及后代,对杂合突变、纯合突变及双等位突变的鉴定策略进行了探讨;该方法检测正确率经测序验证达100%。上述结果表明,采用CELⅠ粗提物检测突变体与已有方法比较具有廉价、快速和高效的特点。
- 罗婉冰林秋鹏李晓霞周泽娇阳辉勇杜荣裕李洪清
- 关键词：突变体
- 斜纹夜蛾中肠糖代谢相关基因的克隆及表达模式分析被引量：1
- 2013年
- 斜纹夜蛾Spodoptera litura是一种世界性分布的重要农业害虫,在生长发育过程中要经历幼虫一蛹的变态发育过程。由于变态发育前后昆虫的食性发生了明显的改变,作为食物消化吸收的中肠也发生了解体和重建。与此相适应,昆虫中肠的各种物质和能量代谢也可能会相应地发生改变。为研究斜纹夜蛾中肠变态发育过程中糖代谢途径的变化情况,我们从斜纹夜蛾中肠EST文库中鉴定出了12个糖代谢相关基因,克隆了其中3个基因的全长cDNA,并应用半定量PCR和定量PCR的办法检测了其在幼虫-蛹变态发育期中肠组织的转录表达以及对激素和饥饿等因素的响应情况。结果表明:这3个基因(α-L-岩藻糖苷酶、N-乙酰葡萄糖胺-6-磷酸去乙酰酶和烯醇化酶基因)的开放阅读框分别为1 461,1 200和1 299 bp,预测的分子量分别为56.3,43.3和46.7 kDa。这12个糖代谢相关的基因在变态发育期的中肠组织中具有5种不同的mRNA表达模式:(Ⅰ)只在幼虫期高表达(唾液麦芽糖酶前体蛋白、糖基水解酶31家族成员蛋白、线粒体乙醛脱氢酶、β-1,3-葡聚糖酶基因);(Ⅱ)只在预蛹期高表达(β-葡萄糖醛酸酶、β-N-酰基氨基葡萄糖苷酶3基因);(Ⅲ)只在蛹期高表达(葡萄糖胺-6-磷酸异构酶基因);(Ⅳ)在预蛹期和蛹期高表达(α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶、N-乙酰葡糖胺-6-磷酸脱乙酰酶和α-L-岩藻糖苷酶基因);(V)在变态发育期恒定表达(烯醇化酶基因)。这说明,为适应变态发育斜纹夜蛾中肠糖代谢途径发生了明显的改变。保幼激素对这些基因的表达没有明显的影响,但蜕皮激素对Ⅰ类基因(如糖基水解酶31家族成员蛋白基因)具有一定的抑制作用,对Ⅲ类基因(如葡萄糖胺-6-磷酸异构酶基因)有显著的上调作用。此外,我们还发现饥饿对几乎所有这些基因的表达都有显著的抑制作用。这些结果表明,昆虫中肠变态发育过程中糖代谢相关�
- 罗婉冰何文婧黄玉秋胡丹黄立华冯启理
- 关键词：斜纹夜蛾变态发育糖代谢保幼激素饥饿中肠
