肖凡
- 作品数：25 被引量：67H指数：4
- 供职机构：北京地坛医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 血管紧张素原基因T174M变异与肝硬化的相关性
- 2007年
- 目的：研究血管紧张素原（angiotensinogen，AGT）基因T174M分子变异与肝硬化的关系．方法：提取正常人64例和肝硬化患者65例白细胞基因组RDNA．通过PCR、限制性片段长度多态性和测序等技术，观察AGT基因型在肝硬化组和正常组分布的差异．结果：AGT基因T174M位点MT和TT基因型的频率在正常组和肝硬化组分别为82．8％、17．2％和84．6％、15．4％，两组之间不存在差异（Χ^2=0．077，P〉0．05）．结论：血管紧张素原基因T174M变异与肝硬化没有显著关系．
- 肖凡魏红山樊文梅李国力
- 关键词：血管紧张素原遗传多态性肝硬化聚合酶链式反应
- HBV相关糖基转移酶Glt25D2的核苷酸单糖结合活性分析被引量：2
- 2011年
- 目的体外克隆表达人类糖基转移酶Glt25D2,利用Biacore分析系统对其活化单糖及钙离子结合活性进行分析。方法构建Glt25D2原核表达载体pET32a-Glt25D2,转化大肠埃希菌BL21,克隆表达糖基转移酶Glt25D2。离心集菌,制备蛋白样品,进行SDS-PAGE电泳分析;融合蛋白线性梯度洗脱,Ni-NTA柱纯化,后做Western blot鉴定。用纯化后的Glt25D2融合蛋白包被CM5芯片,分别用不同浓度的活性单糖及钙离子灌注芯片,利用Biacore生物分子相互作用分析仪分析Glt25D2的活化单糖及钙离子结合活性。结果体外成功表达人类糖基转移酶Glt25D2融合蛋白。Biacore分析显示,该糖基转移酶与400、200、100、50μg/ml唾液酸的结合活性分别为108、71、50和20 RU,与200、100、50、0μg/ml钙离子的结合活性分别为37、20、10和0 RU。结论人类糖基转移酶Glt25D2重组蛋白具有较强的钙离子及唾液酸结合活性。
- 董芳张锦前肖凡朱新宇成军魏红山
- 关键词：糖基转移酶原核表达
- 应用基因表达谱芯片技术筛选GABA作用下肝星状细胞差异表达基因被引量：1
- 2007年
- 目的:应用基因芯片技术检测γ-氨基丁酸(GABA)对肝星状细胞(HSC-T6)基因表达谱的影响.方法:10μmol/L的GABA作用于HSC-T6细胞48 h,提取mRNA,逆转录为cDNA.双PBS作用的HSC-T6细胞为对照,进行cDNA芯片分析.结果:在4096个基因表达谱的筛选中,发现有11个基因表达水平显著上调,26个基因表达水平显著下调.结论:成功地应用基因芯片筛选GABA作用下肝星状细胞差异表达基因,证明GABA对肝星状细胞的表达谱有显著作用.
- 肖凡魏红山李国力张剑平宋川
- 关键词：肝星状细胞基因芯片技术
- O-糖基转移酶、Glt25D2与乙型肝炎包膜蛋白大蛋白的分泌有关
- 2013年
- 目的在前期研究结果提示Glt25D2与HBV包膜蛋白大蛋白(LHBs)在体外相互作用基础上证明Glt25D2是否与HBV LHBs分泌相关。方法采用激光共聚焦方法分析Glt25D2与LHBs在HepG2细胞内的定位。免疫共沉淀方法进一步证实Glt25D2与LHBs的相互作用。采用实时荧光定量PCR和Western blot方法分析mRNA和蛋白表达水平。应用ELISA方法检测细胞上清LHBs水平。实时荧光定量PCR方法检测上清HBV病毒载量。ELISA方法检测上清HBV LHBs水平。Western blot方法检测细胞中LHBs蛋白含量。Cobas Amplicor HBV Monitor Test方法检测细胞上清液HBV DNA载量。结果 Glt25D2与LHBs在体外相互作用,上调的Glt25D2高表达促进HBV DNA复制和LHBs表达,Glt25D2低表达抑制HBV DNA复制和LHBs表达。结论 Glt25D2与乙型肝炎包膜蛋白大蛋白的分泌有关。
- 肖凡董芳乔雍常路丝张仁雯成军魏红山
- 关键词：乙型肝炎病毒
- IL-33重组蛋白的应用
- 本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及IL‑33重组蛋白在制备治疗急性肝衰竭、减轻肝免疫损伤或减轻肝脏炎性损伤的药物中的应用。实验证明，IL‑33重组蛋白能显著促进脾脏Treg细胞中PD‑1、Ki67的表达，并促进肝脏Tr...
- 肖凡高美欣韦何锐魏红山
- 胶原糖基化Glcα1和2Galβ1修饰基因(GLT25D1)敲低小鼠模型的制备与基因型鉴定
- 2018年
- 目的建立介导胶原糖基化Glcα1、2Galβ1修饰基因(GLT25D1)敲低小鼠模型,为研究其在肝脏疾病中的作用奠定基础。方法基于Cre-loxp重组酶系统,采用胚胎干细胞线性打靶技术,获得同源重组的干细胞,繁殖嵌合体,获得杂合子GLT25D1^(+/-)小鼠。随后将GLT25D1^(+/-)小鼠自交。通过PCR凝胶电泳技术对子代小鼠的基因型进行鉴定。采用Western blot技术检测GLT25D1在WT型小鼠(wild type,WT)和杂合子GLT25D1^(+/-)小鼠各组织的表达。比较WT和GLT25D1^(+/-)小鼠的生育情况、子代小鼠基因型比例及出生20天的体重差异。结果 GLT25D1^(+/-)小鼠配笼繁殖的264只子代小鼠中,杂合子GLT25D1^(+/-)小鼠152只,WT小鼠112只,无GLT25D1-/-小鼠。GLT25D1^(+/-)小鼠数量和WT小鼠数量的比值低于孟德尔遗传定律的2∶1(χ~2=9.818,P=0.002)。Western blot示GLT25D1蛋白在WT小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑和淋巴结等重要组织中均有表达,其中在肝、脾和肺中高表达,肾和淋巴结中度表达,心和脑弱表达,GLT25D1^(+/-)小鼠各组织表达水平均低于WT型小鼠。WT和GLT25D1^(+/-)小鼠在外观和行为上无显著差异,GLT25D1^(+/-)小鼠出生后20天体重显著低于WT型小鼠(t=2.520,P=0.0177)。GLT25D1^(+/-)小鼠交配后平均每窝出生的鼠仔数目为4只,低于WT小鼠平均鼠仔数7只(t=-8.482,P<0.001)。结论 GLT25D1基因敲低后会导致GLT25D1-/-胚胎致死,且影响部分GLT25D1^(+/-)小鼠正常出生,GLT25D1^(+/-)小鼠出生后20天体重减轻,繁殖能力下降。
- 叶小慧李玉凤张一帆何玲玲张曼卡马慧敏肖凡黄玉波魏红山
- 关键词：糖基化胶原纤维化小鼠
- 乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）：一种新的抗病毒治疗血清学预测指标
- 2010年
- 背景阅读：乙型肝炎病毒（HBV）的外膜蛋白不仅能组装成病毒包膜。而且还能组装成不舍有核酸的小球形颗粒和亚管状颗粒。管状颗粒的数目要远远多于HBV病毒颗粒。在慢性肝炎患者血清中有22nm大小的小球形颗粒、管状颗粒和42nm的Dane颗粒。其中只有42nm的Dane颗粒含有HBV基因组。
- 肖凡董芳杜冰李学永成军魏红山
- 关键词：抗病毒治疗血清学DANE颗粒慢性肝炎患者
- 糖基转移酶C3ORF39的亚细胞内定位及组织分布特征研究
- 2013年
- 目的 Notch分子是一个高度糖基化修饰的信号分子,但催化其O-葡聚糖中木糖转糖基反应的糖基转移酶至今未能明确。本研究旨在克隆表达人类糖基转移酶61家族中的C3orf39,初步明确其细胞内定为及部分组织分布特征。方法体外克隆表达C3ORF39重组蛋白,免疫新西兰兔制备该重组蛋白的多克隆抗体;采用免疫组织化学方法明确该基因编码的糖基转移酶在部分组织细胞中的分布特征。构建荧光重组蛋白编码质粒,转染HepG2细胞,利用激光共聚焦显微镜观察该糖基转移酶可能的亚细胞定位。结果制备的C3ORF39重组蛋白多克隆抗体具有较高的免疫活性和特异性。免疫组织化学分析显示,该糖基因主要表达与肝细胞、肠上皮细胞、肾小管上皮细胞和胃腺体上皮细胞;部分表达于淋巴结、脾脏、间质细胞。激光共聚焦观察显示,该糖基转移酶定位于内质网-Golgi体分泌途径上游。结论糖基因C3orf39定位于分泌途径中的内质网或cis-Golgi体部分,广泛表达与上皮组织和部分间质细胞。
- 魏红山李学永肖凡郝晓花黄玉波杜雅菊
- 关键词：糖基转移酶NOTCH信号途径肝细胞癌
- 平分型GlcNAc糖基化修饰的生物学功能被引量：1
- 2009年
- 平分型GlcNAc（bisecting N—acetylglucosamine）修饰是糖蛋白N-聚糖核心的常见分支修饰形式，哺乳类动物该糖基化修饰由β1，4-N-乙酰葡糖氨基转移酶Ⅲ催化。该修饰对分子结合、信号传导、生殖发育以及肿瘤细胞的生物学行为都有重要影响。相应地，针对平分型GlcNAc修饰N-聚糖的检测也正逐步成为糖生物学领域内的研究热点之一。
- 董芳肖凡魏红山
- 关键词：糖蛋白糖基转移酶
- 隐源性肝炎相关新基因CHBP2的原核表达及蛋白纯化
- 2007年
- 目的:构建隐源性肝炎相关新基因CHBP2原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达,并纯化CHBP2融合蛋白。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以提取的Huh7细胞mRNA为模板,扩增获得CHBP2基因片段,连接到pGEM-T载体,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a(+)-CHBP2,转化大肠杆菌BL21,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,获得CHBP2融合蛋白的可诱导性表达,通过SDS-PAGE电泳、Western blot免疫印迹分析证实蛋白表达的特异性,超声破碎表达细菌,SDS-PAGE分析,利用镍离子亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。结果:成功构建原核表达载体pET-32a(+)- CHBP2,并将CHBP2融合蛋白成功表达,通过Western blot免疫印迹,证实了蛋白表达的特异性。SDS-PAGE分析表明其为包涵体表达,并对蛋白成功进行了纯化和复性,获得了表达蛋白的纯品结论:成功表达、纯化CHBP2蛋白,为研究CHBP2蛋白的生物学功能打下了基础,
- 李锟叶进肖凡李国力洪源魏红山
- 关键词：隐源性肝炎原核表达蛋白纯化
