胡思玉
- 作品数：14 被引量：44H指数：4
- 供职机构：厦门大学更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 探针熔解分析法检测结核分枝杆菌异烟肼耐药突变的应用和评价被引量：9
- 2011年
- 目的 评价PMA技术检测MTB对INH耐药突变的价值,调查INH耐药突变发生特征.方法 MTB标准株H37Rv来自国家结核病参比实验室,1株INH敏感株和1株katG S315TACC突变株来自厦门市疾病预防控制中心,7株含有已知INH耐药突变的结核耐药株来自深圳慢性病防治中心、河南省疾病预防控制中心、中国人民解放军第309医院和厦门市疾病预防控制中心.707份MTB临床分离株来自厦门市疾病预防控制中心、厦门市第一医院和漳州市疾病预防控制中心,126份MTB涂阳痰标本来自厦门市同安区疾病预防控制中心.MTB标准株H37Rv、7株MTB INH耐药株和833份临床标本均采用厦门致善结核分枝杆菌异烟肼耐药突变检测试剂盒热裂解法提取基因组DNA,1株INH敏感株和1株katG S315T ACC突变株采用AxyPrepTM细菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA.熔解曲线分析所检标本与野生型对照在katG315位密码子、inhA启动子区（- 17～-8位点）、ahpC启动子区（-44～-30以及-15 ～3位点）及inhA94位密码子的熔解温度（Tm值）差异判断标本是否发生INH耐药突变.3×105拷贝/反应的野生株和katG S315T ACC突变株以10倍梯度稀释至300拷贝/反应,分析PMA技术的灵敏度.用PMA技术检测7株含有已知INH耐药突变的结核耐药株,评价特异性,并就其中5种耐药突变进行重复性检验.测序验证PMA技术对833份标本INH耐药性的临床检测效能.结果 PMA技术从核酸提取到结果判断可在3小时内完成,在标准96孔实时PCR仪器上可同时检测46份标本.对野生株和katG S315T ACC突变株的灵敏度均为300拷贝/反应,能够同时区分9种INH耐药相关点突变或缺失,5种耐药突变的Tm值标准偏差均在0.5℃之内.检出的162份突变标本与测序验证结果均一致.临床标本验证突变率为19.4％（ 162/833）,在所检出的14种INH耐药突变katGS315T（ AGC →ACC）、inhA启动子区- 15C→T和katG S315N （AGC→AAC）这3种突变�
- 胡思玉牛建军权胜卯黄建炜李庆阁
- 关键词：异烟肼突变聚合酶链反应
- PCR熔解曲线法筛查结核分枝杆菌链霉素和乙胺丁醇耐药性被引量：4
- 2012年
- 目的利用PCR熔解曲线法快速筛查结核分枝杆菌（MTB）对链霉素、乙胺丁醇耐药性，并与药敏试验结果比较，评价其应用价值。方法收集深圳市2007-2009年331株MTB临床分离株，应用PCR熔解曲线法检测embB基因306、378-380、406和497、rpsL基因43、88及r阳基因513-517、905-908位点耐药突变，并与药敏试验结果比较。结果以药敏试验结果为标准，PCR熔解曲线法检测MTB链霉素耐药突变的敏感性为78．6％、特异性为90．1％、准确性为86．7％；检测MTB乙胺丁醇耐药突变的敏感性为83．0％、特异性为93．3％、准确性为91．8％。PCR熔解曲线法与药敏试验检测结果具有很好的一致性。结论PCR熔解曲线法能够快速、特异地检测MTB对链霉素、乙胺丁醇耐药突变，可用于临床筛查。
- 王峰胡思玉桂静崔运勇刘小立李庆阁
- 关键词：结核分枝杆菌耐药性链霉素乙胺丁醇
- 实时聚合酶链反应熔解曲线法快速检测耐多药结核分枝杆菌被引量：9
- 2011年
- 目的应用实时PCR熔解曲线法快速检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性，并与比例法检测结果进行比较。方法收集深圳市2007--2009年耐药监测项目、全国耐药基线调查项目和深圳市慢性病防治中心门诊患者临床分离株311株，采用实时PCR熔解曲线法检On,0rpoB基因耐药突变热点区、ahpC启动子区（硝～30及-15～-3位点）、inhA启动子区（-7～-8位点）、inhA94和katG315位耐药突变，并与耐药基因测序及表型药敏试验结果进行比较。以比例法药敏试验结果作为MTB药敏试验的金标准，评价实时PCR熔解曲线法的敏感度、特异度与金标准的符合率。结果实时PCR熔解曲线法2～3h即可完成检测，扩增和结果判定在1个反应管内完成。检测利福平耐药的敏感度为97．8％，特异度为97．1％，准确性为97．4％；检测异烟肼耐药的敏感度为86．6％，特异度为98．7％，准确性为92．6％。对耐多药MTB的检测敏感度为88．6％，特异度为100．O％，重复性为100．0％。结论实时PCR熔解曲线法检测MTB对利福平和异烟肼耐药性，与比例法检测结果比较具有很好的一致性，且具有快速、准确的优点，有较好的临床应用价值。
- 王峰崔运勇胡思玉桂静杨慧李庆阁刘小立
- 关键词：利福平异烟肼聚合酶链反应
- 探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变被引量：5
- 2011年
- 目的 评价探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变的应用价值，为临床检测提供指导依据。方法 613份痰标本于2009年9月至2010年4月收集自厦门市疾病预防控制中心、厦门市第一医院和漳州市疾病预防控制中心。结核分枝杆菌H37Rv标准株来源于国家结核病参比实验室。37株包含结核与非结核分枝杆菌的标准盘由中国药品生物制品检定所提供。首先采用梯度稀释的野生型标准株H37RvDNA考察探针熔解曲线分析法的分析灵敏度，然后用标准盘验证其检测特异性，最后以测序法为对照方法，采用613份结核分枝杆菌的标本评价该方法的临床应用价值。结果 探针熔解分析法可检测到3拷贝／反应，且能特异检测结核分枝杆菌。613份结核分枝杆菌的检测结果显示，符合要求的583份标本的试剂盒检测结果与测序结果完全一致，其中embB306突变菌株数为34株，embB378—380突变菌株数为23株，embB406突变菌株数为3株，embB497突变菌株数为3株。结论 探针熔解分析法检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变特异性好，灵敏度高，能有效地检测临床标本常见乙胺丁醇耐药突变位点，是值得推广的快速检测方法。
- 郑蓉蓉陈晓云付军张向东温慧欣胡思玉牛建军李庆阁
- 关键词：乙胺丁醇突变聚合酶链反应
- 深圳市结核分枝杆菌异烟肼耐药流行株的基因分析被引量：2
- 2010年
- 异烟肼（INH）和利福平（RFP）是抗结核药中的一线药物,近年来出现了大量耐药结核分枝杆菌,在中国INH-耐药率高达17.6%[1].INH耐药相关的最主要基因为katG,其次为inhA、ahpC和inhA94.为了解深圳地区INH耐药流行株的主要基因突变类型,本研究对深圳地区303株结核分枝杆菌的katG、inbA、oxyR-ahpC基因进行序列分析.
- 崔运勇王峰刘小立桂静胡思玉杨慧
- 关键词：结核分枝杆菌耐药异烟肼
- 实时PCR在结核分枝杆菌异烟肼耐药突变分子诊断中的应用研究
- 结核病是全球范围内危害最为严重的慢性传染病之一，在众多结核治疗药物中，异烟肼作为一线药物广泛使用，导致耐异烟肼结核发生率高，危害面广。本论文着重建立异烟肼耐药突变检测体系，并评价其应用，为最终建立起适合临床应用的异烟肼耐...
- 胡思玉
- 关键词：结核分枝杆菌异烟肼耐药突变分子诊断实时荧光定量PCR技术
- 一种基因稀有突变的定量检测方法
- 一种基因稀有突变的定量检测方法，涉及一种基因的检测方法，尤其是涉及一种基因稀有突变的定量检测方法。提供一种基因稀有突变的定量检测方法。1)根据需要定量检测的基因稀有突变，设计并制备相应的引物序列，引物的3’末端为突变位点...
- 李庆阁郭奇伟阮力胡思玉
- 文献传递
- 荧光PCR熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌异烟肼耐药突变
- 目的：评估荧光PCR熔解曲线法对结核分枝杆菌异烟肼耐药突变的诊断价值。方法：检测1096株结核临床分离株，并与比例法药敏试验比较，评估荧光PCR熔解曲线法的临床灵敏度和临床特异性。结果：荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆...
- 胡思玉李辉李国利刘小立牛建军王峰权胜卯许晔李庆阁
- 关键词：结核分枝杆菌异烟肼耐药突变
- 应用探针熔解分析法检测结核分枝杆菌rpoB基因突变
- 2011年
- 摘要：目的研究结核分枝杆菌利福平耐药突变实时PCR检测试剂盒（探针熔解分析）的临床应用价值。方法用37株非结核分枝杆菌考察该方法的特异性，用菌株H37Rv考察其检测限，并检测962份结核分枝杆菌培养标本的rpoB基因利福平耐药决定区突变，检测结果经测序验证。结果37株非结核分枝杆菌中仅有3株出现耐药突变峰，检测限考察结果表明该方法每反应可重复检出30个菌。
- 牛建军张轶温慧欣刘歆胡思玉李庆阁
- 关键词：RPOB基因突变非结核分枝杆菌耐药突变实时PCRH37RV
- 应用探针熔解分析法检测结核分枝杆菌rpoB基因突变被引量：3
- 2011年
- 目的 研究结核分枝杆菌利福平耐药突变实时PCR检测试剂盒（探针熔解分析）的临床应用价值.方法 用37株非结核分枝杆菌考察该方法的特异性,用菌株H37Rv考察其检测限,并检测962份结核分枝杆菌培养标本的rpoB基因利福平耐药决定区突变,检测结果经测序验证.结果 37株非结核分枝杆菌中仅有3株出现耐药突变峰,检测限考察结果表明该方法每反应可重复检出30个菌.用该试剂盒检测962份标本,检出突变株186份,野生株751份,扩增失败标本25份.选取2009年11月以后的标本中试剂盒检出为突变的标本112份,并数字表法随机选取200份试剂盒检出为阴性的标本,进行测序验证,除5份测序失败其余107份标本的DNA序列分析结果与试剂盒检测结果一致.结论 该试剂盒准确快速,方便易行,是检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的有力工具.
- 牛建军张轶温慧欣刘歆胡思玉李庆阁
- 关键词：分子探针技术
