薛玉芹
- 作品数：15 被引量：14H指数：3
- 供职机构：江苏大学附属金坛医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核杆菌ESAT6真核表达载体的构建及表达
- 王英薛玉芹陈勇唐沽王雪梅方强
- 幽门螺杆菌hp0529基因缺陷株的构建及其功能初步研究被引量：1
- 2017年
- 目的:构建幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统hp0529基因缺陷株,并对其功能进行初步探讨。方法:采用同源重组原理,PCR技术扩增hp0529基因编码区两侧序列同源臂,构建含卡那霉素抗性标志的自杀质粒p Blue KM40-△hp0529;利用电穿孔法将其导入受体野生株中,通过卡那霉素筛选出hp0529基因缺陷株并经PCR及酶切方法鉴定;分别对缺陷株和野生株进行培养,观察其生长状况;并将两株细菌分别与胃上皮GES-1细胞共培养,检测hp0529基因缺陷株诱导GES-1细胞IL-8 mRNA水平的变化。结果:成功构建出幽门螺杆菌hp0529基因缺陷株;该基因敲除对细菌生长无明显影响,但对诱导GES-1细胞IL-8 mRNA表达有明显抑制作用。结论:成功构建hp0529基因缺陷株,该基因对细菌生长无明显影响,但能影响GES-1细胞IL-8 mRNA的表达。
- 唐国建李国民赵凯葛锁华蒋海燕薛玉芹邵世和
- 关键词：幽门螺杆菌IL-8
- 结核杆菌ESAT6蛋白的原核表达与纯化
- 王英薛玉芹陈勇唐洁王雪梅方强
- 外源性一氧化氮体外杀伤旋毛虫成虫的实验研究
- 目的：探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。<br> 方法：取感染旋毛虫的BALB/c小鼠肠组织，分离成虫，配制成虫悬液(1000条/ml)。48孔板中每孔加入100 μl成虫悬液，再加入各组试...
- 王小莉王媛媛方强薛玉芹夏惠沈继龙
- 关键词：体外培养旋毛虫成虫
- 外源性一氧化氮体外杀伤旋毛虫成虫的研究被引量：3
- 2012年
- 目的探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。方法取感染旋毛虫的BALB/c小鼠小肠组织,分离成虫,配制成虫悬液(1 000条/ml)。48孔板中每孔加入100μl成虫悬液,再加入各组试剂,终浓度分别为:亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、0.05、0.10、0.20、0.50和1.00mmol/L,1.00mmol/L SNP+0.15mmol/L血红蛋白(Hb)、1.00 mmol/LSNP+0.15 mmol/L硫酸亚铁(FeSO4)、1.00 mmol/L SNP+1.00 mmol/L L-半胱氨酸(L-cyst)、1.00 mmol/L SNP+0.15 mmol/LFeSO4+1.00 mmol/L L-cyst,设空白对照组和阳性对照组(1.00 mmol/L SNP+100μl肌幼虫悬液),每组设3个复孔。置37℃5%CO2培养箱中孵育,第4天收集各孔成虫,镜检并作番红染色,计算各组虫体死亡率。结果 SNP 0.02 mmol/L和0.05 mmol/L组旋毛虫死亡率分别为(1.4±1.2)%和(3.2±1.0)%,这两组与空白对照组的死亡率[(1.9±0.2)%]之间的差异无统计学意义(P>0.05)。SNP 0.10、0.20、0.50和1.00 mmol/L组虫体死亡率分别为(9.9±1.8)%、(37.7±2.5)%、(50.1±3.5)%和(80.8±1.1)%,与空白对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。SNP浓度在0.02～1.00 mmol/L范围内与旋毛虫成虫死亡率呈线性正相关(P<0.05)。在1.00 mmol/L SNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与仅SNP1.00 mmol/L实验组比较,成虫死亡率均有所下降,分别为(56.5±3.7)%、(72.7±5.6)%、(74.8±2.4)%和(69.8±2.3)%。SNP1.00 mmol/L组与SNP+Hb、SNP+FeSO4+L-cyst组旋毛虫成虫死亡率间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论外源性NO对体外培养的旋毛虫成虫有杀伤作用,而Hb、L-cyst+FeSO4可抑制该杀伤作用。
- 王小莉王媛媛方强薛玉芹沈继龙
- 关键词：外源性NO旋毛虫成虫
- 结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因的克隆与序列分析
- 2013年
- 目的:克隆结核分枝杆菌减毒株H37Ra培养滤液蛋白10(CFP10)基因,并对其进行序列分析。方法:自结核菌H37Ra株抽提基因组DNA为模板,以已知结核菌H37Ra株CFP10基因设计引物。通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增出结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,将其克隆至pTG19-T载体后,经PCR和双酶切鉴定后进行DNA序列测定,并以BLAST在线软件进行序列比对分析。结果:PCR产物电泳显示扩增片段约为300 bp,测序获得的片段开放编码框由303 bp组成,与H37Rv株CFP10基因同源性为100%,推导出编码氨基酸序列同源性为100%。结论:成功克隆结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,其基因序列与H37Rv株CFP10基因序列无差异。
- 薛玉芹王英陈勇李江艳李倩唐洁夏惠王雪梅方强
- 关键词：结核分枝杆菌克隆
- 密码子优化的结核分枝杆菌CFP-10真核表达载体构建及在Hela细胞中的表达
- 薛玉芹王英陈勇唐洁王雪梅方强
- 密码子优化的结核分枝杆菌CFP-10真核表达载体构建及在Hela细胞中的表达
- 研究背景:CFP10抗原是结核分枝杆菌 RD1区编码的低分子量分泌蛋白,仅存在于致病性分枝杆菌中,存在多个T细胞抗原决定簇,可强烈诱导结核病患者PBMC的增殖,产生大量的IFN-γ,具有良好的抗原性和免疫保护性,是结核病...
- 薛玉芹王英陈勇唐洁王雪梅方强
- 关键词：结核分枝杆菌CFP-10密码子优化重组质粒HELA细胞
- 文献传递
- 结核分枝杆菌CFP-10的克隆与高效可溶性原核表达
- 研究背景:培养滤液蛋白CFP10,是结核分枝杆菌 RD1区编码的核心抗原之一,仅存在于致病性和一些非典型的分枝杆菌中,而不存在BCG和非致病分枝杆菌中,可强烈诱导T细胞的增殖和IFN-γ的产生,使得CFP10蛋白成为结核...
- 薛玉芹王英陈勇唐洁王雪梅方强
- 关键词：克隆
- 结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6的构建、鉴定及免疫效应评价被引量：4
- 2013年
- 目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-PCR法检测ESAT-6 mRNA的表达、间接免疫荧光法检测ESAT-6蛋白表达。重组质粒经体内电转染免疫小鼠后,采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ及抗ESAT-6特异性抗体IgG的水平;流式细胞术检测小鼠淋巴细胞增殖水平;ELISPOT检测产生IFN-γ的淋巴细胞频数。结果构建的重组质粒pVAX1/ESAT-6经双酶切于3000 bp和300 bp处各见1条带,测序结果显示插入序列与ESAT-6基因序列无差异。重组质粒转染Hela细胞后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳于约300 bp处见目的条带,间接免疫荧光检测显示特异性绿色荧光。重组质粒免疫小鼠后,血清中抗ESAT-6特异性抗体IgG水平较对照组(空质粒组和生理盐水对照组)明显升高;血清中IFN-γ水平、小鼠脾淋巴细胞增殖水平及产生IFN-γ的淋巴细胞数明显均高于对照组(空质粒组和生理盐水对照组)。结论成功构建了结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6,该疫苗可有效诱导小鼠产生特异性细胞免疫和体液免疫效应。
- 王雪梅王英薛玉芹陈勇陶志勇夏惠唐洁方强
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT-6DNA疫苗细胞免疫体液免疫
