贾焕珍
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：首都医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PINK1与α-synuclein相互作用结构域鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:确定PINK1与α-synuclein相互作用的结构域。方法:将PINK1不同结构域质粒(pcDNA3.1-3xFlag-hPINK1WT,pcDNA3.1-3xFlag-hPINK1(G309D),pcDNA3.1-3xFlag-hPINK1(ΔN35),pcDNA3.1-3xFlag-hPINK1(ΔC145),pcDNA3.1-3xFlag-hPINK1(156～509),pcDNA3.1-3xFlag-hPINK1(Δ156～581),pcDNA3.1-3xFlag-vector)分别和pCMV-Myc-α-synuclein质粒共转染人胚肾HEK293T细胞,通过免疫共沉淀(Co-IP)技术验证PINK1与α-synuclein相互作用的结构域;同时进行免疫细胞化学染色,利用激光扫描共聚焦显微镜观察两种蛋白的共定位关系。结果:Co-IP实验结果表明PINK1与α-synuclein相互作用的结构域为PINK1的激酶结构域。免疫细胞化学实验也证实α-synuclein只与含激酶结构域的PINK1蛋白在细胞中存在共定位关系。结论:PINK1与α-synuclein相互作用的结构域位于其激酶结构域。
- 付越姣段春礼龚普盛贾焕珍张建亮赵春礼鲁玲玲赵焕英袁星星杨慧
- 关键词：PINK1Α-SYNUCLEIN免疫共沉淀
- 帕金森病相关基因α-突触核蛋白和PINK1对Nurr1的调节作用被引量：3
- 2015年
- 目的探讨帕金森病相关基因α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)和PTEN诱导的蛋白激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)对转录因子Nurr1的调节作用。方法利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的方法检测α-syn与Nurr1的相互作用。同时,在PINK1基因敲减的细胞模型中,通过双荧光素酶报告系统检测PINK1对Nurr1转录激活活性的调节作用。结果 FRET检测显示,CFP-α-syn与YFP-Nurr1之间发生了荧光共振能量转移的现象。其FRET效率大约为20.52%。提示α-syn与Nurr1之间可能存在直接的相互作用。对于PINK1基因敲减的细胞进行研究发现,在PINK1被抑制表达24 h或48 h后,Nurr1的活性显著下调。结论以往研究提示α-syn可能是Nurr1的抑制因子。研究显示α-syn可能与Nurr1直接结合而抑制其活性。而PINK1对Nurr1可能存在一个正性调节作用。因此,二者对Nurr1的调节可能存在一个相互协调、相互制约的关系。
- 鲁玲玲施予晴魏雨菲贾焕珍乔芳伟杨慧
- 关键词：帕金森病Α-突触核蛋白转录调控
- PINK1参与调节多巴胺的合成被引量：2
- 2012年
- 目的探讨PINK1基因对多巴胺合成的调节作用。方法用高压液相色(HPLC)电化学方法检测多巴胺(DA)含量,用Western blots和Real-Time PCR法检测DA合成限速酶酪氨酸羟化酶(TH)和多巴脱羧酶(DDC)的表达量,通过免疫共沉淀(Co-IP)和免疫组织化学染色观察PINK1和TH之间是否存在相互作用。结果 PINK1基因敲减后,细胞内DA水平为5.356±0.536μg/L,显著低于对照组的11.630±1.559μg/L(P<0.05);TH mRNA和蛋白的表达分别为0.371±0.140和0.195±0.062,显著低于对照组的1.009±0.152和0.386±0.044(P<0.05);DDC mRNA和蛋白的表达分别为0.396±0.124和0.149±0.029,显著低于对照组的1.100±0.070和0.323±0.037(P<0.05);免疫荧光化学检测PINK1和TH存在共定位,Co-IP显示PINK1和TH存在相互作用。结论 PINK1可以通过调控DA的合成酶TH和DDC的表达影响DA的合成。
- 贾焕珍鲁玲玲龚普盛付越姣赵春礼段春礼杨慧
- 关键词：PINK1RNA干扰酪氨酸羟化酶
- PINK1对酪氨酸羟化酶的表达调控被引量：1
- 2015年
- 目的探讨帕金森病相关基因PINK1对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达调控作用。方法分别建立PINK1基因敲减组(转染携带有PINK1小干扰RNA片段的质粒)和PINK1基因过表达(转染PINK1真核表达质粒载体)的MN9D细胞模型,通过实时定量PCR法(real-time RT-PCR)和Western blot法分别检测THmRNA水平和蛋白水平,以评测改变细胞内PINK1含量对于TH表达的影响。结果在转染后48 h检测时发现,PINK1基因敲减组较对照组TH mRNA水平下调可达76.3%(P<0.001);与对照组相比,蛋白水平亦明显降低,降低幅度达74.1%(P<0.001)。与此同时,检测到p-TH的蛋白水平也降低约75.1%(P<0.001),但是p-TH/TH的水平没有明显改变。在MN9D细胞中瞬时转染PINK1野生型及突变体G309D,发现过表达野生型PINK1组TH蛋白水平明显增加(增加115.9%,P<0.05),但是过表达PINK1突变体G309D组无明显差异(P>0.05)。结论 PINK1可调节多巴胺合成过程中的限速酶TH的转录及蛋白的表达,而其G309D突变体表现为此项功能的缺失。
- 鲁玲玲贾焕珍杨慧
- 关键词：帕金森病PINK1RNA干扰酪氨酸羟化酶
- 过表达PINK1抵抗鱼藤酮引起多巴胺神经元损伤的研究被引量：2
- 2012年
- 目的:明确在C57BL/6小鼠纹状体过表达野生型的人源帕金森相关蛋白PINK1能否减轻由侧脑室注射鱼藤酮引起多巴胺神经元损伤。方法:通过向C57BL/6小鼠(雄性,7周龄,18～20g)左侧纹状体中注射带有GFP人源野生型PINK1及突变体PINK1G309D的慢病毒包装颗粒,两周后向小鼠左侧侧脑室中定位注射鱼藤酮,通过蛋白质印迹,免疫组化和行为学的方法检测PINK1对鱼藤酮引起多巴胺神经元损伤的影响。结果:蛋白质印迹和免疫组化的实验都证明了在C57BL/6小鼠纹状体过表达野生型的PINK1对于鱼藤酮引起多巴胺能神经元的减少有明显的抑制作用(P<0.01),但对鱼藤酮引起的行为学损伤没有明显的改善作用。
- 龚普盛张建亮付越姣贾焕珍段春礼鲁玲玲赵春礼杨慧
