钊守凤
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
- 供职机构：浙江大学医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 钩端螺旋体属特异性表面蛋白抗原融合基因lipL32/1-ompL1/1原核表达系统的构建、表达和鉴定及酵母表达系统的构建
- 该研究中,我们采用自行设计的连接引物PCR构建了lipL32/1-ompL1/1融合基因,建立了lipL32/1-ompL1/1融合基因的大肠杆菌原核表达系统和毕赤酵母真核表达系统,采用Western blot鉴定了原核...
- 钊守凤
- 关键词：问号钩端螺旋体
- 文献传递
- 幽门螺杆菌临床菌株尿素酶B亚单位原核表达系统的构建及其重组蛋白免疫性的鉴定被引量：2
- 2003年
- 目的 :克隆幽门螺杆菌 (Hp) ure B基因并构建其原核表达系统。方法 :采用高保真 PCR从幽门螺杆菌临床分离菌株 Y0 6中扩增 ure B基因 ,T- A克隆后测定核苷酸序列 ,构建 p ET32 a的 ure B表达载体 ,在 E.coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的 IPTG诱导表达 ,采用 Hp全菌抗体的 Western blot和兔抗融合蛋白血清的免疫扩散试验鉴定其免疫性。结果 :所克隆的 ure B基因与报道的相应核苷酸序列同源性为 96.88%～ 97.82 % ,氨基酸序列同源性高达 99.65 %～ 99.82 %。p ET32 a- ure B- BL2 1DE3系统的 Ure B融合蛋白表达量高达细菌总蛋白的4 0 %左右。Ure B融合蛋白能与 Hp全菌抗体发生结合反应 ,免疫家兔能获得高效价抗体。结论 :本研究成功地构建了 Hp ure B高效表达系统 ,所表达的 Ure B融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性 ,可作为 Hp疫苗的抗原。
- 陈喆严杰毛亚飞钊守凤
- 关键词：幽门螺杆菌分子克隆
- 大肠杆菌LTB与霍乱弧菌CTB基因的克隆和表达及鉴定被引量：12
- 2003年
- 目的 :克隆大肠杆菌不耐热肠毒素 B亚单位 (L TB)及霍乱弧菌肠毒素 B亚单位 (CTB)基因 ,构建其表达载体。方法 :采用高保真 PCR分别从 E.coli4 4 815株与 V.cholerae东 74株基因组 DNA中扩增 L TB与 CTB基因 ,T- A克隆后测定核苷酸序列。分别构建 p ET32 a的 LTB及 CTB表达载体 ,在 E.coli BL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的 IPTG诱导表达。采用 SDS- PAGE及 GM1- EL ISA鉴定表达产物。结果 :所克隆的 LTB和 CTB基因与报道的相应核苷酸序列同源性分别为 99.12 %～ 99.71%和 98.5 4 %～ 99.4 2 % ,氨基酸序列同源性分别高达 97.5 8%～99.19%和 96.77%～ 99.19%。p ET32 a- L TB- BL2 1DE3和 p ET32 a- CTB- BL2 1DE3系统表达的融合蛋白产量分别占细菌总蛋白的 30 %和 10 %左右。GM1- EL ISA结果证实 LTB及 CTB融合蛋白均能与牛 GM1结合。结论 :本研究成功地构建了 LTB与 CTB表达系统 ,所表达的 L TB与 CTB融合蛋白具有粘膜免疫佐剂活性。
- 夏肖萍严杰钊守凤毛亚飞李淑萍
- 关键词：大肠杆菌LTB基因霍乱弧菌分子克隆免疫学
- 幽门螺杆菌动物感染模型的研究近况
- 2004年
- 动物感染模型对于幽门螺杆菌致病机制的研究、疫苗的研制和药物的筛选具有十分重要的作用.已报道的用于建立该菌动物感染模型的动物有小鼠、大鼠、蒙古沙鼠、豚鼠、猫、狗、悉生生物猪和灵长类动物等.此外也有人利用猫胃螺杆菌感染的小鼠、大鼠模型和鼬鼠螺杆菌感染的雪貂模型来研究幽门螺杆菌.本文就各种幽门螺杆菌动物感染模型的优缺点、适应范围及存在问题作一简要介绍.
- 钊守凤严杰
- 关键词：幽门螺杆菌螺杆菌感染小鼠大鼠模型
- 应用尿激酶溶栓治疗内瘘阻塞
- 2003年
- 目的:探讨应用尿激酶溶栓治疗内瘘阻塞的效果及安全性。方法:在血栓处局部静脉推注尿激酶20万u溶栓,30min后局部静脉滴注0.9％氯化钠注射液250mL+尿激酶30万u,观察再通情况。结果:64例患者成功再通55例,失败9例,再通患者平均再通时间2.2h。结论:应用尿激酶静脉注射进行内瘘阻塞溶栓安全性较好,值得推广。
- 曹玉孙伟牛珉钊守凤郭海燕曹志红
- 关键词：尿激酶溶栓治疗内瘘阻塞
- 佩尔地平治疗高血压急症的临床观察
- 2002年
- 曹玉王志綦秀芬钊守凤
- 关键词：佩尔地平高血压急症
- 问号钩端螺旋体属lipL32/1-ompL1/1融合基因的真核表达及其表达产物的免疫反应性被引量：4
- 2005年
- 目的 :构建问号钩端螺旋体 (简称钩体 )的融合基因 lip L32 / 1- omp L1/ 1真核表达系统并鉴定表达产物的免疫反应性。方法 :采用连接引物 PCR构建融合基因 lip L32 / 1- omp L1/ 1,克隆测序后构建 lip L32 / 1- omp L1/ 1的毕赤酵母真核表达系统 p PIC9K- lip L32 / 1- omp L1/ 1- P.pastoris GS115。用 MM和 MD平板分离 His+ Mut+型菌落 ,YPD平板筛选出 G4 18高抗性的 His+ Mut+ 转化子。以酵母裂解酶处理的高拷贝转化子 His+ Mut+ 克隆裂解产物为模板 ,5 'AOX1和 3'AOX1为引物 ,用 PCR检测所构建的毕赤酵母工程菌株染色体 DNA中的目的融合基因。在 BMMY培养基中用甲醇诱导目的重组蛋白 r L ip L32 / 1- r Omp L1/ 1表达。采用硫酸铵沉淀 ,Ni- NTA亲和层析提纯培养物上清液中的 r L ip L 32 / 1- r Omp L1/ 1。采用 SDS- PAGE和 Western blot分别检测 r L ip L 32 / 1- r Omp L 1/ 1的产量及其免疫反应性。结果 :获得的 lip L32 / 1- omp L1/ 1融合基因约为 1794 bp。其核苷酸和氨基酸序列与原始lip L32 / 1和 omp L1/ 1基因型比较 ,相似性分别高达 99.94 %和 10 0 %。所构建的真核表达系统可分泌 r Lip L32 / 1-r Omp L1/ 1,SDS- PAGE后位于预期位置处 ,产量约占上清总蛋白的 4 0 %。r Lip L32 /
- 严杰钊守凤毛亚飞阮萍罗依惠李淑萍李立伟
- 关键词：问号序列同源性真核表达
- 前列地尔脂微球制剂治疗不稳定性心绞痛50例被引量：3
- 2003年
- 目的 :探讨前列地尔脂微球制剂 (LipoPGE1)对不稳定性心绞痛 (UAP)的临床疗效。方法 :采用随机、单盲的方法进行前瞻性试验。将 71例伴有心电图ST T改变的UAP患者随机分为治疗组和对照组。治疗组 5 0例 ,在常规治疗基础上加用LipoPGE11 0 μg,Qd;对照组 2 1例行常规治疗。 结果 :治疗组有效率为 94% ,显著优于对照组的 71 .4% (P <0 .0 5 )。两组治疗后心肌缺血次数、心肌缺血时间、最长持续时间、室性早搏次数、阵发性室速次数以及血小板聚集率均较治疗前减少 ,且治疗后各项指标治疗组显著优于对照组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 )。结论 :在常规治疗的基础上加用LipoPGE1对UAP的疗效明显优于常规治疗 ,LipoPGE1是一种治疗UAP疗效确切、安全性较高的药物。
- 曹玉郝传吉钊守凤牛珉郑永红郭海燕
- 关键词：不稳定性心绞痛临床疗效心肌缺血血小板聚集率
- 乳糖诱导对幽门螺杆菌UreB、HpaA和大肠杆菌LTKA63、LTB重组蛋白表达的影响被引量：2
- 2004年
- 目的 :探讨乳糖诱导幽门螺杆菌尿素酶 B亚单位 (ure B)、黏附因子 (hpa A)和大肠杆菌肠毒素 B亚单位(lt B)、A亚单位突变体 6 3(lt KA6 3)重组基因表达的效果及最佳表达条件。方法 :采用 BIO- RAD凝胶图象分析系统测定表达的目的重组蛋白产量。采用 SDS- PAGE检测不同乳糖浓度、诱导时间和温度对不同生长阶段工程菌重组蛋白表达量的影响 ,并与异丙基硫代半乳糖苷 (isopropyl- β- D- thiogalactoside,IPTG)比较。结果 :乳糖较 IPTG更为有效地诱导 r Hpa A、r Ure B、r LTB、r L TKA6 3的表达。 37℃诱导的目的重组蛋白表达量明显高于 2 8℃。r Hpa A表达的最佳条件为起始菌液 OD60 0 值 0 .8、5 0 g/L乳糖 ,诱导 4 h;r Ure B和 r LTB均为起始菌液 OD60 0 值 1.2、10 0 g/L乳糖 ,诱导 5 h;r LTKA6 3为起始菌液 OD60 0 值 0 .8、10 0 g/L乳糖 ,诱导 4 h。结论 :乳糖较 IPTG更有效地诱导上述重组基因表达目的蛋白 ,且无毒和廉价 ,为幽门螺杆菌基因工程疫苗工业化生产奠定了有利的基础。
- 钊守凤严杰胡爱萍
- 关键词：幽门螺杆菌基因工程疫苗IPTG
