陆瑜
- 作品数：17 被引量：46H指数：5
- 供职机构：上海第二医科大学附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市高等学校青年科学基金卫生部科技专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 自身核抗原U1SnRNP70kD多肽分子中U1RNA结合功能区的cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 1995年
- 本研究采用逆转录－ＰＣＲ技术克隆自身核抗原Ｕ１ＳｎＲＮＰ７０ｋＤ多肽分子中Ｕ１ＲＮＡ结合功能区（Ｕ１ＲＮＡｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎ，Ｕ１ＢＤ）的ｃＤＮＡ，经ＤＮＡ测序证实以后定向插入原核表达载体ＰＧＥＸ－２Ｔ，进而导入大肠杆菌中表达重组蛋白。免疫印迹法研究表明：９６％（４８／５０）的抗Ｕ１ＳｎＲＮＰ７０ｋＤ抗体阳性血清能够识别该重组蛋白，证实Ｕ１ＢＤ重组蛋白具有Ｕ１ＳｎＲＮＰ７０ｋＤ抗原性，而且Ｕ１ＢＤ是Ｕ１ＳｎＲＮＰ７０ｋＤ多肽上主要抗原表位区域，能够被大多数抗Ｕ１ＳｎＲＮＰ７０ｋＤ抗体阳性血清识别。这为今后对Ｕ１ＢＤ抗原表位精确定位，分析特定抗原表位与疾病的相关性以及制备重组抗原用于临床检测等研究奠定基础。
- 陆瑜沈南薛峰陈顺乐
- 关键词：重组抗原
- 重组自身抗原U1RNP多肽的制备及在风湿病诊断中的意义被引量：2
- 1997年
- 制备重组核抗原Ｕ１ＲＮＰ多肽，为探讨自身免疫性疾病的机理及提高临床自身抗体检测敏感特异性奠定基础。方法对１２０例经对流免疫电泳证实的ＲＮＰ抗体阳性血清，以重组抗原为基质进行了印迹法测定。结果重组抗原具有分子量７００００多肽抗原性，１１５例抗ＲＮＰ７００００抗体阳性血清中有１１２例可识别重组抗原，分子量为７００００（ｒ７００００），阳性率为９７．４％，而５例ＲＮＰ阴性血清及５例正常人血清均不识别ｒ７００００。结论ｒ７００００具有良好的核抗原ＲＮＰ７００００多肽的特异性，可进一步作为抗原表位研究的手段。
- 薛峰沈南陆瑜陈顺乐
- 关键词：多肽风湿病
- 干扰素诱导蛋白3基因在系统性红斑狼疮发病中的意义及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2005年
- 目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中干扰素诱导蛋白3(IFIT3)基因mRNA的实时定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动度的相关性,同时构建IFIT3基因的真核表达载体pGFP-IFIT3以备研究其免疫学功能。方法收集144例SLE患者、27例非SLE患者与59名正常对照人群的临床资料,取外周血抽提总RNA并逆转录成cDNA,运用SYBRgreen实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测患者组和对照组的IFIT3mRNA表达水平的差异,并与病情活动度进行分组比较,分析其意义。用gateway基因克隆技术,将含有IFIT3开放阅读框(ORF)序列的穿梭质粒与GFP融合蛋白表达载体pGFP-DEST53连接为重组子,构建IFIT3基因的真核表达载体pGFP-IFIT3,并进行酶切电泳和测序鉴定。结果①SLE患者组的IFIT3mRNA-ΔΔCT值显著高于非SLE对照组(P=0.012)和正常对照组(P=0.000)。②SLE活动组的IFIT3mRNA-ΔΔCT值显著高于SLE非活动组(P=0.036),SLE患者组的IFIT3mRNA-ΔΔCT值与SLE疾病活动指数(SLEDAI)积分有非常显著的正相关性(P=0.005)。③构建的重组真核表达pGFP-DEST53质粒经酶切电泳和测序鉴定,分子大小与序列均正确。结论作为干扰素诱导表达的基因,IFIT3mRNA定量表达水平的升高对SLE患者的诊断有一定的意义,同时对SLE患者的病情活动度和病情严重度的判断有一定价值。成功构建了IFIT3基因的真核表达载体pGFP-IFIT3,为以后研究其免疫学功能提供了基础。
- 汤建平黄向阳陈晓翔李挺陆瑜钱捷吕良敬李春明沈南顾越英
- 关键词：实时定量聚合酶链反应真核表达载体
- 抗Kinectin抗体与白塞病相关性研究被引量：5
- 2003年
- 目的 研究抗kinectin抗体与白塞病的关系。方法 从人喉癌上皮细胞 (Hep2细胞 )抽提RNA ,利用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增碱基序列相当于kinectin的氨基酸 5 0 3～ 994(kin m)和氨基酸 92 0～ 1346 (kin 3)两个片段 ,并克隆到pET4 2 a(+)载体中。诱导表达的融合蛋白经纯化后建立酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法 ,并对白塞病患者血清进行分析。结果 构建的表达kinectin载体能在大肠杆菌中表达具有抗原性的肽段 ,用纯化的融合蛋白建立检测抗kinectin抗体的ELISA方法 ,对 4 6例白塞病患者、118例其他自身免疫病患者及 5 1名正常人检测显示kinectin抗体阳性率分别为白塞病 6 3% (2 9/ 4 6 ) ,系统性红斑狼疮 2 2 % (8/ 37)、类风湿关节炎 16 % (5 / 31)、干燥综合征 4 1% (11/ 2 7)、混合性结缔组织病 2 9% (4 / 14 )。与 118例其他自身免疫病相比 ,白塞病中抗kinectin抗体的检出率明显升高 (P <0 0 1)。结论 Kinectin是白塞病的相关抗原 ,在其他自身免疫病中也可检测到该抗原抗体 ,其意义有待进一步研究。
- 冯修高陈顺乐陆瑜沈南叶萍叶霜俞翀曌钱捷耿文勤
- 关键词：白塞病贝赫切特综合征酶联免疫吸附试验原核表达
- 数种检测抗核抗体、抗盐水可提取核抗原抗体方法的对比分析被引量：1
- 2002年
- 目的 评价检测抗核抗体和抗盐水可提取核抗原 (ENA)抗体的酶联免疫吸附试验 (ELISA)的性能。方法 将相关纯化抗原包被的ELISA试剂和间接免疫荧光抗核抗体 (IFANA)试验、免疫印迹法 (IBT)和对流免疫电泳法 (CIE)等用于 2 0份系统性红斑狼疮 (SLE)、10份干燥综合征 (SS)患者以及 30份健康对照血清中自身抗体的检测。结果 ELISA和IFANA抗核抗体筛选试验对结缔组织病诊断的敏感性和特异性差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,但 5例IFANA阴性而ELISA阳性的患者血清经鉴定为抗SS A和 /或dsDNA抗体阳性 ;1例ELISA阳性而IFANA阴性的正常人血清经证实为ELISA试验假阳性。ELISA、CIE、IBT 3种方法检测抗Sm抗体对诊断SLE的特异性均达到 10 0 % ,敏感性差异无显著性 (P值均 >0 .0 5 )。ELISA与IBT相比 ,在抗SS A抗体检测上更为敏感 (P <0 .0 1) ,ELISA与CIE法相比对抗SS B抗体的检测也更敏感 (P <0 .0 5 )。结论 本研究中所用的ELISA抗核抗体检测试剂敏感性。
- 陆瑜叶萍俞翀曌赵江峰陈顺乐
- 关键词：抗核抗体酶联免疫吸附试验免疫印迹法
- 免疫印迹法检测可提取核抗原多肽抗体谱的临床应用分析被引量：4
- 2002年
- 目的 探讨临床应用免疫印迹法 (IBT)检测可提取核抗原 (ENA)多肽抗体谱中出现的常见问题和解决措施。方法 于 98年和 99年相继 3次对上海部分大中型医院相关实验室进行IBT法抗ENA抗体检测的血清交流和测定 (主要为抗Sm、抗U1RNP、抗SS A/Ro、抗SS B/La、抗核糖体P蛋白等 5种自身抗体 ) ,归纳和分析存在的主要问题。结果 1.因缺乏对风湿病自身抗体谱以及IBT技术的了解 ,常导致对抗Sm、抗SS A/Ro、抗U1RNP等抗体的判断有误 ;2 .对国际上尚未公认的IBT法“自身抗体”显色区带不宜出具检验报告。 3.通过交流 ,有关实验室的检测水平得到逐步提高。结论 为保障临床IBT法抗ENA抗体检测质量 ,需对该项目有较全面的了解 ,并有必要建立培训。
- 陆瑜叶萍沈霞陈顺乐
- 关键词：免疫印迹法可提取核抗原
- 酶联法和免疫印迹法检测血抗卵巢抗体的比较
- 1998年
- 为比较酶联法（ELISA）和免疫印迹法（IBT）检测人抗卵巢抗体（AOA）的灵敏度和准确性,本文以正常妇女为对照,检测不明原因性不孕症和卵巢早衰（POF）患者血清AOA。结果表明POF组AOA阳性率分别为40％（ELISA）和80％（IBT）,不孕症组AOA阳性率为20％（ELISA）和60％（IBT）。两种方法比较,同组阳性率有显著差异（P<0.01）。IBT方法可区别非致病性和致病性AOA,提高诊断的准确性、实验表明ELISA和IBT均可用于检测AOA以了解卵巢功能降低之免疫性病因,但IBT方法更灵敏,更准确。
- 林建华严隽鸿林其德陆瑜叶萍
- 关键词：免疫印迹女性不育症卵巢早衰
- 狼疮ds-DNA抗体VL基因的突变可能影响抗体的致病性被引量：2
- 1999年
- 目的通过ＳＬＥ病人ｄｓＤＮＡ抗体轻链基因的序列测定和分析，研究致狼疮肾炎抗体的轻链基因突变特点及与疾病的关系。方法本实验室首先建立了狼疮肾炎病人单链抗体文库，并筛选了产生ｄｓＤＮＡ抗体的噬菌体株ＮＹＥ３，用ＡＢＩ３７３型ＤＮＡ测序仪对其ＶＬ基因进行了测定。结果ＳＬＥ病人ｄｓＤＮＡ抗体轻链基因的互补决定区（ＣＤＲ）存在很多突变。结论ｄｓＤＮＡ抗体轻链基因的ＣＤＲ区带正电荷氨基酸的突变，可能修饰ＮＹＥ３ｄｓＤＮＡ单克隆抗体与ＤＮＡ的结合力，为复杂的自身抗原提供接触位点。
- 康向东陈顺乐沈南鲍春德陆瑜
- 关键词：基因突变狼疮性肾炎
- 白塞病相关新自身抗原的初步免疫学分析被引量：4
- 2002年
- 为探讨白塞病是否存在特异性循环自身抗体,我们应用免疫印迹结合免疫沉淀技术对39例该病患者血清进行了初步筛查。结果发现,分别有8份(20.5％)、9份(23.1％)血清识别相对分子质量约为100 000、50 000的细胞内性质不明成分,其中4份标本(10.3％)与上述两种蛋白反应;在免疫沉淀分析中,15份血清(38.5％)可主要沉淀细胞中相对分子质量约为200 000、160 000、120 000、100 000的某些蛋白,部分免疫印迹阳性的血清其免疫沉淀分析也呈阳性结果。研究提示白塞病血清中可能存在作用于细胞内未知抗原的IgG型自身抗体,值得深入探索,以澄清靶抗原的性质,明确相应自身抗体对白塞病的特异性、血清学诊断价值及其可能的免疫致病机制。
- 陆瑜叶萍陈顺乐Eng M.TanEdwardK.L.Chan
- 关键词：自身抗原白塞病免疫印迹免疫沉淀血清学诊断
- 肽抗原ELISA检测系统性红斑狼疮患者抗核糖体蛋白P抗体的临床意义被引量：8
- 2006年
- 目的研究抗核糖体P蛋白(Rib-P)肽抗原抗体对系统性红斑狼疮(SLE)的临床诊断意义。方法用来源于抗核糖体P蛋白的3段表位肽为抗原,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和免疫印迹法(IBT)检测100例SLE病人和100例对照血清中抗Rib-P抗体。其中以90例自身免疫病病人(45例类风湿关节炎、22例强直性脊柱炎、8例干燥综合征、6例多肌炎/皮肌炎和9例其他自身免疫病病人)为疾病对照组和10名健康人为正常对照组。结果以对照组的吸光度(x±3s)设定为阳性临界值,临界值为1.258,SLE病人的阳性率为14%,病人对照组为1%。两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。ELISA法的特异性为99%,阳性预测值为93.3%,阴性预测值为53.5%。IBT的阳性率为16%,ELISA和IBT的检测的比较差异无统计学意义(!=0.922,P=0.000)。结论Rib-P抗原肽ELISA与传统的IBT方法相关性好,对SLE病人有高特异性,有较好的诊断价值,与年龄、面部红斑、关节炎、多浆膜炎、肾脏累积、血液累积和神经系统累及等临床症状,以及与抗核抗体(ANA)、抗Sm抗体、抗u1RNP抗体、抗SSA/SSB抗体、抗心磷指抗体(ACL)和病情活动度无关。
- 叶萍许桂芳陈晓翔叶霜陆瑜陈顺乐
- 关键词：抗体
