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登革Ⅱ型病毒E蛋白第三结构域在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫反应性鉴定被引量：7: 2010年; 目的在大肠杆菌中表达登革Ⅱ型病毒包膜糖蛋白(E)的第三结构域(DⅢ),并进行纯化及免疫反应性鉴定。方法登革Ⅱ型病毒接种乳鼠,提取总RNA,经RT-PCR扩增E蛋白全长基因片段,构建pMD18-T-DV2-E载体。以pMD18-T-DV2-E质粒为模板,PCR扩增E蛋白DⅢ基因片段并纯化。用限制性内切酶双酶切纯化产物和表达质粒pET-32a(+)并连接构建重组质粒。筛选的阳性质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,表达蛋白经SDS-PAGE分析和Ni-NTA树脂纯化,Western blot鉴定。结果 RT-PCR扩增获得1.5kb的E蛋白全长基因片段,构建pMD18-T-DV2-E质粒;以pMD18-T-DV2-E质粒为模板,PCR扩增获得320bp的E蛋白DⅢ基因片段,构建pET-32a(+)-DV2-E-DⅢ表达质粒;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析,表达相对分子质量约为29000的可溶性重组蛋白,其表达量占细菌裂解液中总蛋白量的52.50%;Western blot鉴定显示重组蛋白与His·Tag单抗和登革病毒(Ⅰ-Ⅳ)单抗均发生反应。结论重组质粒pET-32a(+)-DV2-E-DⅢ在大肠杆菌中可溶性表达登革Ⅱ型病毒E蛋白第三结构域,重组蛋白能被登革病毒(Ⅰ-Ⅳ)单抗识别。; 雷子庆苏裕心郑学礼; 关键词：登革病毒 E蛋白原核表达

白纹伊蚊C6/36细胞连接登革Ⅱ型病毒受体蛋白分子初步鉴定: 背景与目的:登革病毒(DENV)是全球最为流行的虫媒病毒,通过持续感染伊蚊传播至人类。登革感染范围从自限性无症状或中等性疾病(登革热,DF)至一个严重性登革出血热(DHF),因循环衰竭,发展为登革休克综合征。感染传播依赖...; 雷子庆郑学礼; 关键词：登革病毒受体分子; 文献传递

白纹伊蚊C6/36细胞登革Ⅱ型病毒结合分子的筛选被引量：4: 2012年; 目的筛选白纹伊蚊C6／36细胞表达连接登革Ⅱ型病毒分子。方法提取C6／36细胞的总蛋白和膜蛋白，收集和纯化登革Ⅱ型病毒，用12％SDS．PAGE分析C6／36细胞的总蛋白和膜蛋白，转于硝纤膜上，用病毒覆盖蛋白结合实验（VOPBA）筛选C6／36细胞表达连接登革Ⅱ型病毒分子。结果C6／36细胞的总蛋白和膜蛋白经12％SDS．PAGE分离后转膜，分别与纯化的病毒液和阴性对照液孵育，用抗登革病毒I～Ⅳ单克隆抗体检测，结果显示病毒孵育组在67000和30000的位置有特异性的条带出现，而阴性对照组无此条带。结论用VOPBA法初步从白纹伊蚊C6／36细胞中筛选67000和30000等登革Ⅱ型病毒结合分子，其功能的鉴定正在进行。; 郑学礼雷子庆潘京

登革Ⅱ型病毒E蛋白DⅢ结构域基因在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫反应性鉴定: 背景:登革热/登革出血热(DF/DHF)已成为热带地区最为重要的蚊-传播病毒性疾病。登革病毒是一个正意单链RNA病毒,属于黄病毒科,黄病毒属。登革病毒基因组RNA编码3个结构蛋白(C,E,pr M/M)和7个非结构蛋白(...; 雷子庆郑学礼; 关键词：登革病毒 E蛋白免疫印迹; 文献传递

登革Ⅱ型病毒E蛋白第三结构域的表达、鉴定及C6/36细胞中登革病毒受体分子的初步筛选: 登革病毒(Dengue virus, DENV)属于黄病毒科黄病毒属,包括4个血清型,由埃及伊蚊和白纹伊蚊叮咬具有传染性的脊椎动物宿主进行传播,是目前人类最重要的虫媒病毒,感染后可引起登革热(dengue fever, ...; 雷子庆; 关键词：登革病毒 E蛋白多克隆抗体 C6/36细胞受体; 文献传递

登革病毒包膜蛋白E第三结构域的研究进展: 2011年; 登革病毒是目前人类最重要的虫媒病毒之一,登革病毒包膜蛋白E的第三结构域是研究登革病毒亚单位疫苗及病毒入侵宿主细胞的重要靶点。; 雷子庆郑学礼; 关键词：登革病毒包膜蛋白疫苗受体

登革Ⅱ型病毒E蛋白DⅢ结构域基因在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫反应性鉴定: 背景:登革热/登革出血热(DF/DHF)已成为热带地区最为重要的蚊-传播病毒性疾病。登革病毒是一个正意单链RNA病毒,属于黄病毒科,黄病毒属。登革病毒基因组RNA编码3个结构蛋白(C,E,prM/M)和7个非结构蛋白(N...; 雷子庆郑学礼; 关键词：登革病毒 E蛋白免疫印迹; 文献传递

白纹伊蚊C6/36细胞连接登革Ⅱ型病毒受体蛋白分子初步鉴定: 背景与目标:登革病毒(DENV)是全球最为流行虫媒病毒,通过持续感染伊蚊传播至人类。登革感染范围从自限性无症状或中等性疾病(登革热,DF)至一个严重性登革出血热(DHF),因循环衰竭,发展为登革休克综合征。感染传播依赖于...; 雷子庆郑学礼; 关键词：登革病毒受体分子; 文献传递

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雷子庆