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马幸
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中南大学
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相关领域:
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陈汉春
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Cloning and expressing of DJ-1 L166P mutant with HA Epitode by overlap and longprimer methods
In the research of protein function,we often need clone the protein mutant to discuss the effects of the mutat...
马幸
朱飞舟
文献传递
重叠法联合长引物法构建具有HA标签的DJ-1 L166P突变体
2014年
目的通过构建具有HA标签的DJ-1 L166P突变体(DJ-1 L166P-HA),建立一种快速构建具有标签的突变体的方法——重叠法联合长引物法。方法 PCR分别扩增DJ-1的N端和C端。扩增C端的反向引物DJ-1-HA-R包含HA标签的编码序列,是具有60个核苷酸的长引物。然后,DJ-1的N端和C端重叠延伸获得DJ-1 L166P-HA全长。最后,克隆DJ-1 L166P-HA至质粒pcDNA3.1(+)。结果只需一次连接反应,成功地构建了具有HA标签的DJ-1 L166P突变体的重组质粒pcDNA3.1(+)-DJ-1 L166P-HA。将该重组质粒转染HEK293细胞后,DJ-1 L166P-HA融合蛋白质成功表达。结论重叠法联合长引物法具有简便、快捷,易掌握等特点,具有良好的应用前景。
马幸
邓梅春
陈汉春
朱飞舟
关键词:
基因克隆
定点突变
DJ-1
帕金森病
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